專利名稱：牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑產品的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑產品的用途。
背景技術：
牡丹皮為毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮，始載于《神農本草經》，列為中品，已有2000余年的藥用歷史。性微寒，味苦、辛，具有清熱涼血、活血化淤的功效，現代藥理研究顯示，牡丹皮具有調節心血管系統、抗驚厥、保肝、調節泌尿系統、調節免疫細胞、抗菌抗炎作用等。但未見牡丹皮作為抗真菌藥物增效劑與抗真菌藥物聯合使用治療真菌病的報道。

發明內容
本發明提供牡丹皮的新用途，具體是指用于制備抗真菌藥物增效劑產品的用途。本發明提供了牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途。本發明所述的牡丹皮的藥材原料是毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosaAndr.)的干燥根皮。本發明所述的牡丹皮是牡丹皮藥材乙醇提取物。本發明所述的乙醇提取是指用75%乙醇提取。具體步驟為把粉碎后的藥材粉末加入IOOOml圓底燒瓶中，加入70%乙醇水浴回流2h，回流液過濾，放入已稱重的燒瓶中，50°C左右減壓旋蒸至粘稠浸膏狀。本發明所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其中的真菌包括臨床株敏感白念珠菌(100、255、天津10)，耐藥白念珠菌(271、天津25、958、876、842、649、天津 20)。本發明所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑的用途，抗真菌藥物具體是指氟康唑，本文所稱的耐藥白念珠菌是對氟康唑耐受，敏感白念珠菌是對氟康唑敏感。本發明所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物的用途，牡丹皮藥材乙醇提取物的濃度>5000 μ g / ml ；本發明所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑的用途，牡丹皮藥材乙醇提取物的濃度 >4. 88 μ g/mlo本發明經體外細胞實驗表明，牡丹皮對各種臨床分離的白念珠菌具有抑制活性；其對氟康唑抗真菌藥物有明顯的增效作用，對于臨床耐藥性菌株，當抗真菌藥物氟康唑和牡丹皮提取物合用時，能明顯降低抗真菌藥物的用藥劑量，增強對耐藥真菌的抑制作用。因此牡丹皮可用于制備抗真菌藥物增效劑產品，用于不同深部和淺部真菌感染的治療。本發明為牡丹皮開辟了新的用途，將其用于抗真菌藥物或抗真菌藥物的增效劑，不僅能提高藥物的抗真菌作用，而且在臨床治病真菌耐藥性日趨普遍，耐藥程度日趨嚴重的情況，使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用，具有良好的臨床應用前景。
具體實施例方式下面結合本發明的實施例對本發明的實施作詳細說明，以下實施例是在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式，但本發明的保護范圍不限于下述的實施例。實施例I :牡丹皮單獨使用，牡丹皮和氟康唑聯用對不同臨床真菌株的作用材料和方法 I.試藥牡丹皮的藥材原料是毛茛科植物牡丹的干燥根皮。提取過程把粉碎后的藥材粉末加入IOOOml圓底燒瓶中，加入70%乙醇水浴回流2h，回流液過濾，放入已稱重的燒瓶中，50°C左右減壓旋蒸至粘稠浸膏狀。在燒瓶中加入蒸餾水，加熱使充分溶解(取出少許作為水提液，得到Ig / ml的生藥濃度)，再加入與蒸餾水等量的無水乙醇，加熱充分混勻，合并提取液混勻，得O. 5g / ml的生藥濃度，取少許到EP管中做體外實驗。氟康唑注射液輝瑞制藥有限公司，批號9149102。各試藥置于_20°C保存。實驗前，將藥物取出置于35°C溫箱融化，充分混勻，分別進行藥效學檢驗。2.菌株臨床株敏感白念珠菌(100、255、天津10 )，耐藥白念珠菌(271、天津25、958、876、842、649、天津20)分別采自醫院不同科室臨床樣本，并經形態學和生化學鑒定。所有實驗用菌株均于沙堡葡萄糖瓊脂培養基(SDA)劃板活化，將球狀菌于30°C培養2周后，分別挑取單克隆再次劃板活化，取第二次所得單克隆置SDA斜面，用上述方法培養后于4°C保存備用。3.培養液RPMI1640液體培養液RPMI1640 (Gibco BRL) IOg，NaHCO3 2. 0g，嗎啡啉丙磺酸(MOPS) (Sigma) 34. 5g(O. 165M),加三蒸水900ml溶解，IN NaOH調pH至7. O (25 °C )，三蒸水定容至1000ml，O. 22 μ m微孔濾膜過濾除菌，分裝后于4°c保存備用。沙堡葡萄糖瓊脂固體培養基(SDA)蛋白胨10g，葡萄糖40g，瓊脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，調整pH至7. 0，以三蒸水定容至1000ml，高壓滅菌(121°C，15min)后于4°C保存備用。YEPD 培養液酵母浸膏IOg,蛋白胨20g,葡萄糖20g,加三蒸水900ml溶解,加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，三蒸水定容至1000ml，高壓滅菌(121 °C，15min)后于4°C保存備用。4.儀器設備Multiskan MK3型酶標檢測儀(芬蘭Labsystems產品)隔水式電熱恒溫培養箱(上海躍進醫療器械廠)THZ - 82A臺式恒溫振蕩器(上海躍進醫療器械廠)Sff-CT-IF型超凈化工作臺(蘇州安泰空氣技術有限公司)
5.菌液制備實驗前，用接種圈從4°C保存的SDA培養基上挑取白念珠菌球狀菌少量，接種至Iml YEPD培養液，于30°C，200rpm振蕩培養，活化16h，使真菌處于指數生長期后期。取該菌液至ImlYEro培養液中，用上述方法再次活化，16h后，用血細胞計數板計數，以RPMI1640培養液調整菌液濃度至I X IO3 5 X 103CFU/ml。6.藥敏板制備各菌株分別取無菌96孔板一塊，于每排I號孔加R PMI1640液體培養基100 μ I作空白對照；3 12號孔各加上述新鮮配制的菌液99 μ I ;2號孔分別加菌液196 μ I和牡丹皮75%的乙醇提取物2μ I ;12號孔不含藥物，只加菌液100μ I作陽性生長對照。調配不同濃度的氟康唑為8、4、2、1、0. 5、0. 25 μ g / ml。在每排的2號孔加相應濃度的氟康唑2 μ 1，3^11號孔各加I μ I。對2 11號孔進行10級倍比稀釋，使各孔的最終牡丹皮75%的乙醇提取物濃度分別為 2500、1250、625、312· 5,156. 25,78. 125,39. 06,19. 53,9. 76μ g/ml、4. 88 μ g / ml。
而氟康唑提取物的濃度保持恒定，各孔中DMSO含量均低于I %。將各藥敏板于30°C恒溫箱培養。7. MIC8。值判定在30°C恒溫箱中，念珠菌培養48h后，用酶標分析儀于630nm測各孔OD值。與陽性對照孔比，以OD值下降80%以上的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC8q (真菌生長80%被抑制時的藥物濃度)。當藥物的MIC8tl值超過測定濃度范圍時，按以下方法進行統計MICm值高于最高濃度64yg / ml時，計為“>64μ8 / ml” ;MIC8(I值為最低濃度或在最低濃度以下時，不作區別，均計為“<0. 125yg / ml”。上述實驗均平行操作2到3次，當MIC8tl值能準確重復或只差一個濃度時才被接受，并以較高濃度作為MIC8tl值；當MIC8tl值相差兩個濃度以上時，則需重新實驗，直到符合要求為止。實驗結果見表I :表I牡丹皮與氟康唑合用對不同臨床菌株的MIC8tl值(μ g / ml)

權利要求
1.牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途。
2.根據權利要求I所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，所述的牡丹皮是牡丹皮藥材乙醇提取物。
3.根據權利要求2所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，所述的牡丹皮藥材乙醇提取物是用75%乙醇提取的。
4.根據權利要求2所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，所述的牡丹皮藥材乙醇提取物是用以下方法制得的 把粉碎后的藥材粉末加入IOOOml圓底燒瓶中，加入70%乙醇水浴回流2小時，回流液過濾，放入已稱重的燒瓶中，50°C左右減壓旋蒸至粘稠浸膏狀。
5.根據權利要求I所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，所述的真菌包括白念珠菌100、白念珠菌255、白念珠菌天津10、白念珠菌271、白念珠菌天津25、白念珠菌958、白念珠菌876、白念珠菌842、白念珠菌649、白念珠菌天津20。
6.根據權利要求5所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，牡丹皮用于制備抗真菌藥物中，牡丹皮藥材乙醇提取物的濃度>5000ii g/ml。
7.根據權利要求1-5任一所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，抗真菌藥物增效劑中的抗真菌藥物是指氟康唑。
8.根據權利要求7所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑中，牡丹皮藥材乙醇提取物的濃度>4. 88 Ug/ml o
全文摘要
本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑產品的用途。牡丹皮為毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr．)的干燥根皮，始載于《神農本草經》，已有2000余年的藥用歷史。本發明經體外細胞實驗表明，牡丹皮對各種臨床分離的白念珠菌具有抑制活性；牡丹皮提取物與氟康唑抗真菌藥合用，能不同程度地提高對淺表部和深部真菌感染的治療效果，并能使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用。因此牡丹皮可用作抗真菌藥物的增效劑。
文檔編號A61K36/71GK102764310SQ201210228529
公開日2012年11月7日 申請日期2012年7月3日 優先權日2012年7月3日
發明者姜遠英, 曹永兵, 熊娟, 閻瀾, 鹿輝 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學