專利名稱：一種銀杏內酯脂質體注射劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種脂質體注射劑及其制法，具體涉及一種銀杏內酯脂質體注射劑及其制法，屬于醫藥技術領域。
背景技術：
心腦血管疾病是當今世界上威脅人類最嚴重的疾病之一，其發病率和死亡率已超過腫瘤性疾病而躍居世界第一。隨著人民生活水平的提高、人口老齡化的加速、生活節奏的加快、飲食習慣向高熱、高脂化發展，諸多因素導致冠心病、高血壓、高血脂等疾病成為威脅人體健康最嚴重的疾病，而且其發病率和死亡率還有逐年上升的趨勢。銀杏葉·提取物及其制劑現已成為廣泛用于心腦協管疾病的治療，在歐美草藥銷售中排行首位，其對心腦血管的療效得到世界的公認，僅德國許瓦茲藥廠和法國益普生藥廠的銀杏制劑每年的銷售量就超過10億美元。銀杏內酯是銀杏葉的主要活性成分之一。銀杏內酯包括銀杏內酯(Ginkgolides)A、B、C、M、J等和白果內酯(Bilobalid)。1932年，銀杏內酯化合物被Furukawa首次從銀杏苦味成分中分離出來；1960年,Fujise成功分離出幾個結晶；而后1967年，由Marayama等用化學方法推導出其結構，并確定其結構為銀杏內酯A、B、C、M。按IHB命名法，上述銀杏內酯分別取名為BN52020，BN52021, BN52022, BN52023,BN52024。銀杏內酯為血小板活化因子(PAF)受體拮抗劑，對心腦血管疾病具有獨特的藥理作用，廣泛用于治療和預防心腦血管疾病。銀杏內酯屬于萜類內酯類成分，極性小，水溶性差，將其做成傳統的注射液過程中發現該注射液澄明度較差，放置一段時間后易析出晶體，穩定性不易達到注射劑的要求。目前銀杏內酯注射劑的制備工藝，以葡鉀胺為助溶劑，則銀杏內酯不穩定，內酯環容易開環，導致活性減弱。目前上市的銀杏內酯劑型主要為注射劑，普通工藝所制備的銀杏內酯注射劑，物理和化學性質穩定性差，長期存放藥品質量會下降而且還會生成一些雜質，帶來毒副作用，給臨床使用留下了隱患，由于制備技術等原因中藥注射液的配伍研究遠不如西藥，而且容易導致過敏。銀杏內酯在堿性條件下成鹽，會導致部分開環，開環后內酯溶解性增加，然而閉環的結構形式才是主要活性形式，例如參見US5798342。法國Beaufour-1psen公司開發的銀杏內酯B針劑，代號BN52021，就是部分開環形式的凍干粉針，臨床療效就沒有達到預期效果[Brochet B, etal J Neurology, Neurosurgery and Psychiatry. 1995,58 360-362]。CN1594319A公開了一種銀杏內酯提取工藝和銀杏內酯注射液及其制備方法，該注射液是采用羥丙基-3 -環糊精增容制得的滅菌水溶液，再在藥液中加入一定量的等滲調節劑和螯合劑，雖然采用的包合技術來增加溶解，然而由于包和劑用量比較少，包和率不高，穩定性不夠好。CN1813825A和CN1830981A公開了一種供注射用的銀杏內酯乳劑及其制備方法，其采用常規的乳化劑制備方法制備而成，包括銀杏內酯，注射用油，乳化劑和等滲調節劑組成，然而乳劑的穩定性不夠好，植物油的用量偏多，生物利用度低。CN1709239A公開了一種注射用銀杏內酯凍干粉針及其制備方法。該凍干粉針由甘露醇乙二胺四乙酸二鈉(鈣)，偏重亞硫酸鈉，氫氧化鈉，枸櫞酸制備而來，由于銀杏內酯是不溶性的，凍干粉針劑的復溶不夠好，藥物的生物利用度不高。CN1686111A公開一種注射用銀杏內酯針劑及其制備方法，該針劑也是通過加入一定的助溶劑和賦形劑制備的凍干粉針劑，也沒有很好的解決藥物的復溶問題，生物利用度低下。CN101084889A公開一種銀杏內酯凍干粉針劑及其制備方法，該粉針劑主要由銀杏內酯、金屬堿或葡甲胺、聚維酮組成。雖然加入了堿性物質增加溶解度，然而該制劑的穩定性不好，容易產生雜質，生物利用度也不高。脂質體在體內具有良好的祀向性和生物相容性。B.C. Keller等于[J]. Trends inFood science and Technology, 2001,12:25-31.中綜述了天然有效成分的脂質體研究概況，認為脂質體可以提高銀杏葉提取物的生物利用度，協助藥物通過血腦屏障。隨著生物技術的不斷進展，脂質體制備工藝逐步完善，脂質體作用機制進一步闡明，加之脂質體適合體內降解、無毒性和無免疫原性，特別是大量試驗數據證明脂質體作為藥物載體具有對活性藥物成分的保護作用，可以提高藥物治療指數、降低藥物毒性和減少藥物副作用，并減少藥物劑量等優點。國外已經有口服銀杏葉提取物脂質體上市，用于保護老年人的心腦血管，例如Shinjiro Yamamoto 等[J. Biochemical Engineering Journal, 2002,12:125-301]將不同溶劑和溫度提取的銀杏葉成分用二肉豆蘧酰磷脂酰膽堿和聚山梨酯-20以超聲法包裹制成混合脂質體，發現其具有較強抗黑素瘤的活性，而未包裹的提取物抗腫瘤活性很低。金葉，銀杏葉提取物類脂質體的制備工藝研究，《吉林大學碩士學位論文》2009，取處方量的Tween80、Span80、膽固醇，加入二氯甲烷甲醇(I 3)的混合有機溶劑，使溶解，37°C旋轉蒸發形成薄膜。將干燥的薄膜溶于60mL乙醚中，加入IOmL藥物的溶液(用乙醇溶解藥物)和PBS溶液中，超聲lOmin，將超聲后的溶液中再加入20mL PBS溶液，水合lOmin，置于30°C恒溫水浴振蕩器中振蕩過夜，制成類脂質體混懸液，其中表面活性劑與膽固醇摩爾比值為1:1，HLB值為11，GbE與載體為15:100，水合溫度為60°C。

劉婷，銀杏內酯B柔性納米脂質體的制備及體外透皮研究，《中國中藥雜志》第34卷第17期和劉婷，銀杏內酯B柔性脂質體的透皮給藥研究，《西北大學碩士學位論文》2010年度，按薄膜分散法制備柔性脂質體，公開了 稱取500mg大豆卵磷脂，IOOmg膽固醇，50mgGB，20mgVitE,加入IOOmL無水乙醇使之溶解，轉運至500mL圓底燒瓶中，將裝有上述溶液的圓底燒瓶與旋轉減壓蒸發儀連接，在圓底燒瓶上形成均勻的薄膜。同時稱取IOOmg膽酸鈉，加入介質溶劑使之溶解，將其溶液滴加至圓底燒瓶中洗脫膜材，并繼續水化lh。將得到的脂質體混懸液以水浴式超聲儀超聲lOmin，再以0. 22 y m的微孔濾膜過濾，即得到GB柔性納米脂質體。制備過程中不加入膽酸鈉，即得普通GB納米脂質體。制備的GB柔性脂質體外觀呈圓球形狀，平均粒徑在200nm左右，粒徑分布良好；測得平均包封率為75. 91%。如何開發一種既能保持銀杏內酯結構的完整性，又不使用有機溶媒作為其溶劑，制成的注射劑又穩定，已成為當務之急。由于銀杏內酯注射劑的不足，目前對于銀杏內酯脂質體注射劑存在需求。口服脂質體與銀杏內酯脂質體注射劑所要解決的技術問題及其標準是不可比擬的，本發明旨在克服上述注射劑的銀杏內酯在水中溶解度小和在體內過氧化的問題以及內酯結構易水解開環而失效的問題，提供一種銀杏內酯脂質體注射劑，其銀杏內酯既不開環，毒性反應及刺激性小，藥效時間長。

發明內容
脂質體的穩定性是長期以來限制脂質體廣泛應用的重要問題，脂質體普遍存在容易聚集、融合，導致包封藥物泄漏，因此在工業上制備符合穩定性要求的藥物脂質體實非易事，制藥領域具有一般經驗的技術人員清楚地知道在制備藥物脂質體方面面臨各種技術困難，所有這些絕非現有的理論可以預期解決的，需要克服許多技術難題。因此獲得穩定性優良的銀杏內酯脂質體需要付出創造性實踐。一般而言，對于大多數的脂質體藥物制劑而言，被包裹的藥物的藥學性質是由脂類組成和濃度所控制的。本發明人經過銳意研究意外發現，通過選用特定重量配比的銀杏內酯、膽固醇琥珀酸酯、大豆磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、海藻糖和泊洛沙姆188，可以形成品質優異的銀杏內酯脂質體注射劑，從而完成本發明。本發明的目的是提供一種銀杏內酯脂質體注射劑，其由包括以下重量配比的藥物和賦形劑成分制成
權利要求
1.一種銀杏內酯脂質體注射劑，其由包括以下重量配比的藥物和賦形劑成分制成
2.根據權利要求1所述的銀杏內酯脂質體注射劑，其由包括以下重量配比的藥物和賦形劑成分制成
3.根據權利要求1或2所述的銀杏內酯脂質體注射劑，其特征在于所述二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的重量與大豆磷脂酰肌醇和膽固醇琥珀酸酯的重量和之間的比為2:1-6:1，優選為 4:1。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的銀杏內酯脂質體注射劑，其中銀杏內酯的規格為 IOmg0
5.一種制備權利要求1-4任一項所述的銀杏內酯脂質體注射劑的方法，其特征在于包括如下步驟(1)在氮氣保護下，將膽固醇琥珀酸酯、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰肌醇、泊洛沙姆188和銀杏內酯溶解于有機溶劑中，攪拌使其溶解；將上述溶液置于茄形瓶中，45°C水浴減壓除去有機溶劑，在瓶壁上形成均勻透明薄膜；(2)在氮氣保護下，向瓶中加入緩沖鹽溶液，攪拌，使磷脂膜洗脫并充分溶脹水合，水化完全后在600bar到800bar做梯度均質4 6遍優選5遍,O. 22 μ m微孔濾膜過濾,制得銀杏內酯脂質體；(3)無菌條件下，向溶液狀態的脂質體中，不斷攪拌下加入海藻糖，400W-600W超聲處理兩次，每次15 30分鐘，加注射用水定容，然后經O. 22 μ m微孔濾膜過濾，灌裝，即得銀杏內酯脂質體注射劑。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述的緩沖鹽溶液是選自磷酸鹽緩沖溶液、枸櫞酸鹽緩沖溶液、碳酸鹽緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液中的一種，所述的緩沖鹽溶液優選為pH為6. 8的磷酸鹽緩沖溶液。
7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于步驟(I)中所述的溶劑選自乙醇、甲醇、異丙醇、叔丁醇、正丁醇、苯甲醇、二氯甲烷、氯仿、三氯甲烷中的一種或幾種，優選為體積比為1:1的乙醇和叔丁醇的混合有機溶劑。
8.根據權利要求1-4任一項所述的銀杏內酯脂質體注射劑在制備心腦血管藥物中的用途。
9.根據權利要求1-4任一所述的銀杏內酯，其為銀杏總內酯混合物，即包括銀杏內酯A、B、C、M、和 J 等。
全文摘要
本發明公開了一種銀杏內酯脂質體注射劑及其制法，該脂質體注射劑銀杏內酯、膽固醇琥珀酸酯、大豆磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、海藻糖和泊洛沙姆188制成。本發明的脂質體注射劑具有良好的制劑穩定性，良好的包封率和較低的滲漏率；本發明提供了一種粒徑小而均勻銀杏內酯脂質體注射劑，其銀杏內酯不會開環，降低了毒性反應及刺激性小，延長了藥效時間。
文檔編號A61K36/16GK103040753SQ20121055827
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月20日 優先權日2012年12月20日
發明者王平 申請人:海南百思特醫藥科技有限公司