本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體、凝膠及其制備方法。
背景技術(shù)：
雷公藤紅素(celastrol)是從衛(wèi)茅科雷公藤屬植物雷公藤(triperygiumwilfordiihookf.)中分離提純得到的五環(huán)三萜醌結(jié)構(gòu)的化合物。雷公藤紅素不溶于水，易溶于二甲基亞砜、氯仿、丙酮和乙醚。具有較強的抑制免疫反應(yīng)、抗炎及抗癌作用，可以用于多種自體免疫、慢性炎癥疾病及癌癥治療，包括銀屑病、特應(yīng)性皮炎、皮膚癌、乳腺癌、全身性紅斑狼瘡及慢性類風濕性關(guān)節(jié)炎等。雖然雷公藤紅素抑制免疫反應(yīng)、抗炎癥及抗癌的作用較好，但雷公藤紅素不溶于水，口服胃腸道吸收較差，加之雷公藤紅素毒性較大，口服會產(chǎn)生全身性的毒副作用，主要表現(xiàn)為：對胃腸道存在刺激作用、甚至出現(xiàn)嚴重的腸道毒性；對中樞神經(jīng)系統(tǒng)包括視丘、中腦、延髓、小腦及脊髓產(chǎn)生損害；引起肝、心的出血與壞死等。且口服制劑存在肝臟的首過效應(yīng)，生物利用度低。采用經(jīng)皮給藥方式可提高局部藥物濃度，避免口服給藥等引起的血藥濃度峰谷現(xiàn)象，降低口服給藥后產(chǎn)生的全身性的毒副作用；其次，可避免肝臟的首過效應(yīng)，生物利用度高；此外，可減少給藥次數(shù)、延長給藥間隔，使用方便，可隨時中斷給藥，減少耐藥性，對降低藥物尤其是有毒藥物的毒副作用、提高藥物的治療效果具有重大的臨床應(yīng)用價值。
納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(nanostructurelipidcarriers，nlc)是將固體脂質(zhì)和空間上不相容的液體脂質(zhì)在一定溫度下混合制備得到的納米粒給藥載體。通過形成一些含納米隔室的脂質(zhì)骨架，提高藥物載藥量，避免儲存過程中藥物被排擠，與傳統(tǒng)載體系統(tǒng)(如脂質(zhì)體、微球、固體脂質(zhì)納米粒等)相比，其具有更高的載藥能力及降低儲藏過程包封藥物泄漏的優(yōu)點。研究發(fā)現(xiàn)將納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體用于經(jīng)皮給藥，具有生物相容性好，對皮膚無刺激作用；納米級顆粒能提高角質(zhì)層的水合程度，促進藥物透過；具有緩釋作用；可以提高難溶性藥物生物利用度并極大地降低藥物因口服產(chǎn)生的毒性。
現(xiàn)有的雷公藤紅素脂質(zhì)體藥物存在的制備過程復(fù)雜，使用的輔料種類繁多，部分輔料刺激性較強，以及制備得到的雷公藤紅素脂質(zhì)體包封率不夠理想的缺陷。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中所存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)方雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體。
為了實現(xiàn)上述目的以及其他相關(guān)目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體，由如下成分組成：
優(yōu)選地，所述雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體由如下成分組成：
本發(fā)明的第二目的在于提供一種雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟：
(1)精密稱取計量份蛋黃卵磷脂、膽固醇及雷公藤紅素于容器中，加入適量有機溶劑使得雷公藤紅素完全溶解，充分溶解搖勻后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑；所述有機溶劑為甲醇、乙醇或氯仿；
(2)加入計量份膽酸鈉溶液，充分水合后，冰浴下進行超聲得到復(fù)方雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體混懸液。
優(yōu)選的，所述有機溶劑的用量為雷公藤紅素質(zhì)量的200～400倍。
優(yōu)選的，所述膽酸鈉溶液的濃度為2～4mg/ml。
優(yōu)選的，所述步驟(2)中的超聲功率為120～280w，重復(fù)超聲10次，工作2s，間隔2s。
優(yōu)選的，所述步驟(2)得到的雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體混懸液中雷公藤紅素的濃度為1～3mg/ml。
本發(fā)明的第三目的在于提供一種復(fù)方雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體凝膠，由如下成分組成：
優(yōu)選地，所述復(fù)方雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體凝膠由如下成分組成：
本發(fā)明的第四目的在于提供一種復(fù)方雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體凝膠的制備方法，包括如下步驟：
(1)稱取計量份卡波姆固體，加入到納米銀溶液中，攪拌下使得卡波姆固體全部溶解；
(2)在步驟(1)得到的溶液中加入前述雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體混懸液，并補加入純水直至滿足計量比，攪拌均勻即得復(fù)方雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體凝膠。
優(yōu)選地，所述納米銀溶液中納米銀的濃度為100～220μg/ml。
本發(fā)明還提供了一種雷公藤紅素含量測定方法的建立(hplc法)：
色譜柱：agilenteclipsexdb-c8柱(250mm×4.6mm,5μm)
流動相：甲醇-5％醋酸(92:8)
流速：1ml/min
檢測波長：425nm
柱溫：30℃
運行時間：8min
結(jié)果：雷公藤紅素在色譜柱上的保留時間為6.2min，峰形較好，標準曲線：c＝0.0337a-0.0365，線性范圍為0.1～50μg/ml，可用于含量測定。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
通過本發(fā)明的方法制備得到的雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體生產(chǎn)過程操作、安全，粒徑和包封率均較為理想，物理穩(wěn)定性良好；得到的雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體混懸液可直接用于制備復(fù)方雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體凝膠，無需經(jīng)過分離純化的步驟。此外，通過本發(fā)明的方法制備得到的復(fù)方雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體凝膠對大鼠燙傷創(chuàng)面具有較好的促愈合作用。
具體實施方式
在進一步描述本發(fā)明具體實施方式之前，應(yīng)理解，本發(fā)明的保護范圍不局限于下述特定的具體實施方案；還應(yīng)當理解，本發(fā)明實施例中使用的術(shù)語是為了描述特定的具體實施方案，而不是為了限制本發(fā)明的保護范圍。下列實施例中未注明具體條件的試驗方法，通常按照常規(guī)條件，或者按照各制造商所建議的條件。
當實施例給出數(shù)值范圍時，應(yīng)理解，除非本發(fā)明另有說明，每個數(shù)值范圍的兩個端點以及兩個端點之間任何一個數(shù)值均可選用。除非另外定義，本發(fā)明中使用的所有技術(shù)和科學術(shù)語與本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的意義相同。除實施例中使用的具體方法、設(shè)備、材料外，根據(jù)本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員對現(xiàn)有技術(shù)的掌握及本發(fā)明的記載，還可以使用與本發(fā)明實施例中所述的方法、設(shè)備、材料相似或等同的現(xiàn)有技術(shù)的任何方法、設(shè)備和材料來實現(xiàn)本發(fā)明。
實施例1
主要實驗用儀器和試劑如下：
高效液相色譜儀：安捷倫科技有限公司
超聲波細胞破碎儀：scientz-750f，寧波新芝生物科技股份有限公司
激光粒度測定儀：nano-zs，英國馬爾文儀器有限公司
透皮吸收儀：hc-188，天津市正通科技有限公司
即用型透析袋(10kmwco)：thermofisherscientificinc.
高純蛋黃卵磷脂(pc-98t)：上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司
高純度膽固醇：上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司
膽酸鈉：國藥集團化學試劑有限公司
氯仿、甲醇、乙醇：國藥集團化學試劑有限公司
吐溫80：國藥集團化學試劑有限公司
卡波姆：美國路博潤公司
雷公藤紅素：aktinchemicals,inc.
納米銀原液(220μg/ml)，華繡科技有限公司
包封率的測定：取脂質(zhì)體混懸液1ml，加入sephadexg-50葡聚糖凝膠柱，以純水洗脫，每2ml收集一管，比濁法(300nm)測定脂質(zhì)體濃度，繪制洗脫曲線。收集脂質(zhì)體部分流出液，以甲醇適當稀釋后進hplc檢測藥物濃度，計算包封率。包封率計算公式如下：
包封率(％)＝(脂質(zhì)體中包封的藥物/脂質(zhì)體中藥物總量)×100％。
精密稱取0.2g蛋黃卵磷脂、0.025g膽固醇及及0.01g雷公藤紅素于梨形瓶中，加入2ml甲醇，充分溶解搖勻后，40℃、10rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑，加入5ml膽酸鈉溶液(4mg/ml)，充分水合，冰浴超聲10次(200w，工作2s，間隔2s)，得到雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體混懸液5ml。所得雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體平均粒徑為118.7nm，pdi為0.240，zeta電位為-31.8mv，包封率為99.9％，脂質(zhì)體載藥量為4.1％。于4℃冰箱放置2周后，粒徑和包封率無明顯變化，說明脂質(zhì)體物理穩(wěn)定性良好。
精密稱取卡波姆固體0.05g，加入到4.545ml納米銀原液(220μg/ml)中，攪拌溶解，向該溶液中加入0.405ml純水、5ml雷公藤紅素脂質(zhì)體混懸液(含雷公藤紅素2mg/ml)，攪拌均勻即得復(fù)方脂質(zhì)體凝膠。
實施例2
精密稱取0.2g蛋黃卵磷脂、0.05g膽固醇及及0.01g雷公藤紅素于梨形瓶中，加入2ml乙醇，充分溶解搖勻后，40℃、10rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑，加入5ml膽酸鈉溶液(3mg/ml)，充分水合，冰浴超聲10次(120w，工作2s，間隔2s)，得到雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體混懸液5ml。所得雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體平均粒徑為110.2nm，pdi為0.226，zeta電位為-32.6mv，包封率為99.7％，脂質(zhì)體載藥量為4.2％。于4℃冰箱放置2周后，粒徑和包封率無明顯變化，說明脂質(zhì)體物理穩(wěn)定性良好。
精密稱取卡波姆固體0.1g，加入到4.495ml納米銀溶液(100μg/ml)中，攪拌溶解，向該溶液中加入0.405ml純水、5ml雷公藤紅素脂質(zhì)體混懸液(含雷公藤紅素2mg/ml)，攪拌均勻即得復(fù)方脂質(zhì)體凝膠。
實施例3
精密稱取0.2g蛋黃卵磷脂、0.05g膽固醇及及0.01g雷公藤紅素于梨形瓶中，加入2ml氯仿，充分溶解搖勻后，40℃、10rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑，加入5ml膽酸鈉溶液(2mg/ml)，充分水合，冰浴超聲10次(280w，工作2s，間隔2s)，得到雷公藤紅素柔性脂質(zhì)體混懸液5ml。平均粒徑為114.8nm，pdi為0.230，zeta電位為-33.1mv，包封率為99.8％，脂質(zhì)體載藥量為4.3％。于4℃冰箱放置2周后，粒徑和包封率無明顯變化，說明脂質(zhì)體物理穩(wěn)定性良好。
精密稱取卡波姆固體0.025g，加入到4.57ml納米銀溶液(120μg/ml)中，攪拌溶解，向該溶液中加入0.405ml純水、5ml雷公藤紅素脂質(zhì)體混懸液(含雷公藤紅素2mg/ml)，攪拌均勻即得復(fù)方脂質(zhì)體凝膠。
實施例4復(fù)方脂質(zhì)體凝膠的體外釋放實驗
復(fù)方脂質(zhì)體凝膠的體外釋放實驗：將裁剪合適的透析袋置于透皮吸收儀接收池頂部，并固定在擴散池和接收池之間。接收池(5ml，ф9mm)中加入含0.1％吐溫80的磷酸鹽緩沖液(pbs，ph7.4)，設(shè)定溫度為37℃和轉(zhuǎn)速為300r/min。在擴散池中加入0.2g復(fù)方脂質(zhì)體凝膠，分別于0.5、1、2、4、6、8、12、24h取樣0.5ml，并補充0.5ml新的釋放介質(zhì)。hplc測定樣品中雷公藤紅素濃度，計算單位面積累積釋放量。
表1
實施例5大鼠燙傷創(chuàng)面的促愈合試驗
(1)受試藥物及試劑：
水合氯醛：國藥集團化學試劑有限公司，批號：20151023；
0.02mpbs(ph6.8)：500ml/瓶，武漢谷歌生物科技有限公司；
4％多聚甲醛：500ml/瓶，武漢谷歌生物科技有限公司，g-1002；
甲醛溶液：500ml/瓶，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20160503；
乙醇：500ml/瓶，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20160627；
0.9％氯化鈉注射液：浙江天瑞藥業(yè)有限公司，規(guī)格：500ml:4.5g，批號：716022605；
hangping,electronicbalance分析天平：型號ja5003n；
h-600透射電子顯微鏡：日本日立公司；
醫(yī)用脫脂紗布：上海宏隆醫(yī)療用品設(shè)備有限公司，批號：151112；
一次性護理口罩：上海宏隆醫(yī)療用品設(shè)備有限公司，批號：150804；
如意無粉乳膠手套：海門市如意實驗器材廠，批號：160606；
剪刀、鑷子等手術(shù)實驗用品均購自第二軍醫(yī)大學教保處；
一次性使用無菌注射器帶針(1ml、2ml、5ml)：上海康德萊企業(yè)發(fā)展集團股份有限公司，批號：k20160318；
科德士寵物專用電推剪：cp-8000；
電子數(shù)顯卡尺：上海量具刃具廠；
yp1201n電子天平：上海精密科學儀器有限公司；
canon數(shù)碼相機：860is；
陽性對照藥：重組納米銀抗菌凝膠(斯麗凱)(深圳市源興納米醫(yī)藥科技有限公司，批號：150508021)。
(2)動物
來源、種屬、品系：sd大鼠，spf級，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供。
許可證號碼：scxk(滬)2013-0016。
體重：180-200g
性別：雄性
動物總數(shù)：42只
每組動物數(shù)：6只
飼養(yǎng)條件:室溫20～25℃，濕度40～70％，標準飼料，動物自由飲食和飲水。
(3)劑量設(shè)置：設(shè)置正常組、生理鹽水組(模型組)、空白凝膠組(100μl/創(chuàng)面)、納米銀凝膠組(100μl/創(chuàng)面)、脂質(zhì)體凝膠組(100μl/創(chuàng)面)和復(fù)方凝膠組(100μl/創(chuàng)面)。復(fù)方凝膠組為實施例1制備得到的復(fù)方脂質(zhì)體凝膠，空白凝膠組為卡波姆濃度為0.5％的未添加藥物的凝膠，納米銀凝膠組為卡波姆濃度為0.5％、納米銀終濃度100μg/ml的凝膠，脂質(zhì)體凝膠組為卡波姆濃度為0.5％、雷公藤紅素終濃度為1.0mg/ml的凝膠。
(4)試驗對照
生理鹽水組(模型組)為裸露創(chuàng)面；陽性對照組給予重組納米銀抗菌凝膠(斯麗凱)(100μl/創(chuàng)面)。
(5)試驗主要步驟：
為避免皮膚創(chuàng)傷后細菌感染帶來的影響，實驗全程在第二軍醫(yī)大學藥學院ivc屏障系統(tǒng)房間進行。取sd大鼠42只，除正常組6只大鼠外，其余大鼠用10％水合氯醛(3ml/kg)麻醉后，背部去毛，經(jīng)消毒后在大鼠背部用yls-5q臺式超級控溫燙傷儀燙1個直徑2cm圓形深ii度燙傷創(chuàng)面創(chuàng)面(98℃，10s)。36只大鼠隨機分為生理鹽水組(模型組)、空白凝膠組、納米銀凝膠組、脂質(zhì)體凝膠組、復(fù)方凝膠組和陽性對照斯麗凱組，每組6只。皮膚創(chuàng)面形成2h后給藥治療，所有大鼠單籠飼養(yǎng)。除正常組不作處理外，其他創(chuàng)面分別給予不同藥物100μl，每天處理1次，連續(xù)給藥21天。
檢測指標包括:
a.傷口面積：治療前，治療3天、7天、10天、14天、17天和21天，將每只大鼠創(chuàng)面在相同條件下拍數(shù)碼照片，用塑料透明紙描記創(chuàng)面，掃描儀掃描圖片后，游標卡尺測量后，計算其傷口面積；
b.病理組織學：給藥21天后，10％水合氯醛麻醉大鼠，取3個大鼠割傷創(chuàng)面皮膚，一部分切成1mm3大小組織，用4％多聚甲醛保存待做透射電鏡檢查傷口部位皮膚組織的超微結(jié)構(gòu)變化；所有大鼠皮膚用10％甲醛液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋切片、he染色，光鏡下觀察傷口部位皮膚的組織病理學變化；
c.創(chuàng)面組織生化指標：所有大鼠取全層皮膚組織100mg左右，有痂皮者先去除痂皮，在4℃生理鹽水中漂洗，去除血液，用濾紙拭干后稱重。在冰浴中將組織剪碎后置于玻璃勻漿管中，充分研碎，使組織勻漿化；加入組織重量9倍的冰冷生理鹽水，研磨成10％組織勻漿，隨后將勻漿液以3000r/min速度離心10min，吸取上清液；將考馬斯亮藍顯色劑加入蛋白樣品中，通過測定吸光度值測定蛋白含量；然后按試劑盒說明，采取分光光度法測定樣品管的吸光度值，以反映創(chuàng)面組織sod活性、丙二醛(malonaldehyde,mda)含量的變化。試驗數(shù)據(jù)用_x±s表示，兩組間比較采用t檢驗比較差異的顯著性。顯著性水平a＝0.05。
(6)試驗結(jié)果
a.傷口面積：與空白對照組比較，連續(xù)給藥21天后，復(fù)方凝膠組、納米銀凝膠組和陽性對照斯麗凱組均可使大鼠燙傷面積顯著減小(p<0.05，p<0.01)。結(jié)果見表2；
表2復(fù)方凝膠對大鼠燙傷創(chuàng)面(mm2)的影響(_x±s,n＝6)
*p<0.05，**p<0.01vs生理鹽水組
b.病理組織學：透射電鏡結(jié)果顯示：正常組：正常上皮細胞結(jié)構(gòu)；生理鹽水組(模型組)：未見上皮，膠原結(jié)構(gòu)紊亂，可見大量變形細胞和空泡，未見上皮；空白凝膠組：可見上皮，上皮細胞內(nèi)可見少量空泡；納米銀凝膠組：可見少量較幼稚的新生上皮，膠原排列整齊；脂質(zhì)體凝膠組：上皮細胞結(jié)構(gòu)基本正常，膠原纖維排列整齊；復(fù)方凝膠組：上皮細胞結(jié)構(gòu)基本正常，少數(shù)細胞核周間隙擴張；納米銀抗菌凝膠組：基本正常上皮細胞結(jié)構(gòu)。
c.創(chuàng)面組織生化指標：按試劑盒說明，采取分光光度法測定樣品管的吸光度值，檢測反映創(chuàng)面組織sod活性、丙二醛(malonaldehyde,mda)含量變化。與空白對照組比較，連續(xù)給藥21天后，復(fù)方凝膠組、納米銀凝膠等和陽性對照斯麗凱組大鼠皮膚sod活力均有不同程度增加，mda活力不同程度降低。結(jié)果見表3。
表3復(fù)方凝膠等對大鼠sod和mda的影響(_x±s)
與空白對照組(模型組)比較，給復(fù)方凝膠組(cm)和納米銀凝膠各組、陽性對照納米銀抗菌凝膠21天后，均促進大鼠燙傷創(chuàng)面的愈合，顯著減小燙傷面積(p<0.05，p<0.01)；大鼠皮膚sod活力均有不同程度增加，mda活力不同程度降低，其中斯麗凱組和納米銀凝膠組效果最好；通過透射電鏡結(jié)果顯示：各給藥組可以減輕大鼠燙傷后皮膚膠原結(jié)構(gòu)紊亂，上皮下可見大量變形細胞和空泡，未見上皮等癥狀；病理結(jié)果顯示：空白對照組(模型組)表皮壞死脫落，有潰瘍，皮膚結(jié)構(gòu)紊亂；各給藥組表皮不規(guī)則生長，部分可見皮膚附屬器存在，可見藥物對皮膚具有一定的治療作用。試驗結(jié)果表明：復(fù)方凝膠對大鼠燙傷創(chuàng)面具有較好的促愈合作用。
實施例6小鼠的急性毒性試驗
試驗參照1999年國家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《中藥新藥藥理毒理研究的技術(shù)要求》和2005年頒布的《中藥、天然藥物急性毒性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》進行。根據(jù)復(fù)方脂質(zhì)體凝膠在臨床應(yīng)用的給藥途徑為皮膚給藥，試驗選擇對小鼠進行灌胃給藥。小鼠給藥后觀察14天，記錄其毒性反應(yīng)、體重變化及死亡情況。
(1)試驗動物
種屬：icr小鼠
性別：雌雄各半
體重：18～22克
數(shù)量：40只
來源：上海市西普爾-必凱實驗動物有限責任公司
實驗動物許可證號碼：scxk(滬)2013-0016
(2)試驗方法
給藥途徑：小鼠單次灌胃，給藥前禁食不禁水12h；
給藥容量：按最大給藥容量40ml/kg體重給藥；
給藥劑量：小鼠灌胃實施例1制備得到的復(fù)方脂質(zhì)體凝膠40ml/kg體重；陰性對照組給40ml/kg體重的空白凝膠，空白凝膠為卡波姆濃度為0.5％的未添加藥物的凝膠；
觀察指標：觀察給藥后14天內(nèi)小鼠的中毒及死亡情況，未死亡小鼠于第7、14天分別稱重，第14天稱重后處死，解剖，檢查各主要臟器是否有病變。
統(tǒng)計學處理：體重數(shù)據(jù)用_x±sd表示，數(shù)據(jù)用spss17.0軟件進行處理，采用單因素方差分析(one-wayanova)檢驗；顯著性水平a＝0.05。
(3)試驗結(jié)果
給小鼠單次灌胃實施例1制備得到的復(fù)方脂質(zhì)體凝膠40ml/kg體重后，小鼠的一般行為活動、飲食、皮毛及其它情況未見異常，未見明顯毒性反應(yīng)。給藥小鼠在給藥后一般行為活動、飲食、皮毛及其它情況未見異常；給藥后第14天稱重后處死小鼠，進行大體解剖，肉眼觀察未見器官出現(xiàn)體積、顏色、紋理改變；具體數(shù)據(jù)見表4。單次灌胃小鼠復(fù)方脂質(zhì)體凝膠的最大耐受劑量為40ml/kg。
表4單次灌胃icr小鼠復(fù)方脂質(zhì)體凝膠40ml/kg體重后小鼠的體重變化
注：同性別與對照組比較p均＞0.05
實施例7新西蘭兔皮膚刺激性試驗
試驗參照2005年3月頒布的《化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》進行。復(fù)方脂質(zhì)體凝膠(棕黃色)臨床應(yīng)用途徑為皮膚愈合，本試驗選擇復(fù)方脂質(zhì)體凝膠(棕黃色)對兔正常皮膚涂抹給藥，觀察72h內(nèi)給藥部位皮膚的變化。
(1)試驗動物
種屬：新西蘭兔
性別：雌雄各半
體重：2.0～2.5kg
數(shù)量：6只，雌雄分別隨機分組，共分2組
來源：上海甲干生物科技有限公司提供，普通級
動物合格證號：scxk(滬)2013-0007號
飼養(yǎng)條件：標準飼料，動物自由飲食和飲水。實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)3天。動物飼養(yǎng)于清潔級環(huán)境，室溫20-25℃，日溫差≤3℃，換氣次數(shù)10-20次/h，濕度40-70％，壓強梯度20-50pa，晝夜明暗交替時間12h/12h。
(2)試驗方法：
取新西蘭兔6只，雌雄各半，均采用自身對照進行試驗。試驗前24h新西蘭兔背部去毛，呈前后2個去毛區(qū)域，每個去毛區(qū)域的范圍約為3cm×3cm，檢查去毛皮膚是否因去毛而受損傷。去毛區(qū)域的皮膚保持無損傷，左側(cè)給實施例1制備得到的復(fù)方脂質(zhì)體凝膠，右側(cè)給陰性對照空白凝膠(卡波姆濃度為0.5％的未添加藥物的凝膠)。將復(fù)方脂質(zhì)體凝膠和空白凝膠直接均勻涂抹在給藥區(qū)域，用二層紗布(2.5cm×2.5cm)貼敷創(chuàng)面，再用無刺激性醫(yī)用膠布加以固定，貼敷4h后，用溫水沖洗清潔受試物部位，分別于45min、3h、24h、48h和72h肉眼觀察去毛皮膚反應(yīng)情況，并記錄受試部位皮膚有無紅斑和水腫等。按表5對皮膚刺激反應(yīng)進行評分。
劑量設(shè)置：500ul/創(chuàng)面
給藥途徑：涂抹給藥。
給藥次數(shù)：均單次給藥
觀察指標及觀察時間：觀察復(fù)方脂質(zhì)體凝膠對家兔皮膚反應(yīng)情況。觀察時間分別為45min、3h、24h、48h和72h。
結(jié)果評價：計算每一觀察時間點各組受試物皮膚反應(yīng)積分的平均分值，按表6進行刺激強度評價。
表5皮膚刺激反應(yīng)評分標準
表6皮膚刺激強度評分標準
(3)結(jié)果：
空白凝膠組正常皮膚部位無紅斑、水腫情況。復(fù)方脂質(zhì)體凝膠對正常皮膚無影響，不引起正常皮膚紅斑、水腫，評分均為0。對正常皮膚刺激反應(yīng)平均評分情況見表7。
表7復(fù)方脂質(zhì)體凝膠對正常皮膚刺激反應(yīng)平均評分情況(x±sd，n＝6)
結(jié)論：復(fù)方脂質(zhì)體凝膠對正常皮膚無刺激性。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。