具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物及其提取方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物及其制備方法和用途。該細(xì)辛總多糖提取物是用極性溶劑提取細(xì)辛的根與/或根莖，乙醇沉淀，減壓干燥，得到細(xì)辛總多糖，得率為15wt%，總多糖含量為60wt%-80wt%。發(fā)明人通過(guò)大量的藥效學(xué)試驗(yàn)首次證明細(xì)辛總多糖提取物具有顯著抑制咳嗽的作用，接近可待因的治療效果，延長(zhǎng)咳嗽潛伏期的作用強(qiáng)于可待因，而且還首次發(fā)現(xiàn)細(xì)辛總多糖提取物具有降低咳嗽的敏感性、抑制氣道炎癥的作用，對(duì)各型咳嗽具有良好的預(yù)防和治療作用，可以用于制備治療咳嗽相關(guān)疾病的藥物。本發(fā)明活性明確、實(shí)驗(yàn)材料來(lái)自原植物，成本低。
【專利說(shuō)明】具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物及其提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體而言，涉及一種具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物及其提取方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]由于工作壓力、空氣環(huán)境污染等諸多因素影響，人類呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病率居高不下，而咳嗽是呼吸系統(tǒng)常見(jiàn)病、多發(fā)病，是呼吸科門診的常見(jiàn)主訴。咳嗽本身是呼系統(tǒng)受到刺激時(shí)產(chǎn)生的一種防御性反射活動(dòng)，是一種有益的動(dòng)作，有時(shí)亦見(jiàn)于健康人群。一般情況下，對(duì)于輕度而不頻繁的咳嗽無(wú)須應(yīng)用止咳藥便可自然緩解。此外，咳嗽對(duì)人體健康的影響亦是辯證的，也是一種病理性的反應(yīng)，長(zhǎng)期頻繁或過(guò)于激烈的咳嗽不僅會(huì)增加患者的痛苦，影響休息和睡眠，增加體力消耗，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)促進(jìn)疾病的發(fā)展，產(chǎn)生其他并發(fā)癥。
[0003]根據(jù)病程的不同，咳嗽可分為急性、亞急性與慢性咳嗽。急性咳嗽〈3周，亞急性咳嗽3-8周，慢性咳嗽>8周。I)急性咳嗽:目前一般認(rèn)為急性上呼吸道病毒感染是最常見(jiàn)的病因，其他包括鼻炎、鼻竇炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作、支氣管哮喘等。上呼吸道感染最常見(jiàn)的病原體是鼻病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒和腸病毒等，其中以鼻病毒最常見(jiàn)。急性咳嗽也可能與哮喘、支氣管炎以及其他呼吸系統(tǒng)疾病的急性發(fā)作有關(guān)。臨床上，常可見(jiàn)到不少以急性咳嗽為前驅(qū)表現(xiàn)的傳染病或其他一些疾患；2)亞急性咳嗽:最常見(jiàn)原因 是感染后咳嗽(又稱感冒后咳嗽)、細(xì)菌性鼻竇炎和哮喘等。作為病原體的病毒以鼻病毒多見(jiàn)，約占30%~50% ;其次為冠狀病毒和流感病毒，分別為10%~15%和5%~15%。除了呼吸道病毒外，肺炎支原體和肺炎衣原體等亦可導(dǎo)致感染后咳嗽；3)慢性咳嗽:臨床上通常將慢性咳嗽定義以咳嗽為唯一癥狀或主要癥狀、時(shí)間大于8周、胸部X線檢查無(wú)明顯異常者，稱為不明原因慢性咳嗽，簡(jiǎn)稱慢性咳嗽。在專科門診中，慢性咳嗽的比例高達(dá)10%-38%。歐美各國(guó)的問(wèn)卷調(diào)查顯示慢性咳嗽發(fā)生率也高達(dá)9%-33%。常見(jiàn)病因?yàn)槭人崃＜?xì)胞性支氣管炎(EB)、上氣道咳嗽綜合征(UACS，原稱鼻后滴流綜合征(PNDS))、胃食管反流性咳嗽(GERC )、咳嗽變異性哮喘(CVA )等。
[0004]廣州呼吸疾病研究所2006年一項(xiàng)針對(duì)1087名大學(xué)生咳嗽的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查顯示，該群體咳嗽總發(fā)生率為10.9%，其中慢性咳嗽總發(fā)生率為3.3%，可以推測(cè)社區(qū)人群的咳嗽發(fā)生率將更高，這類患者的平均病程較長(zhǎng)，有的甚至長(zhǎng)達(dá)數(shù)十年。有資料顯示，全世界每年約有15%的成年人和10%的未成年人受到不同程度咳嗽的影響。因此，開發(fā)安全有效的止咳藥物將在滿足巨大市場(chǎng)需求的同時(shí)，創(chuàng)造出較好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
[0005]根據(jù)藥物作用機(jī)理的不同可將止咳藥物分為兩大類:第一類為中樞性鎮(zhèn)咳藥，這類藥物能直接選擇性的抑制延髓呼吸中樞而產(chǎn)生鎮(zhèn)咳作用，如嗎啡、可待因等，這類藥物鎮(zhèn)咳效果較好，但副作用明顯，可導(dǎo)致成癮性及呼吸抑制，甚至誘發(fā)幻覺(jué)、妄想或其它精神病癥狀等；第二類為外周性鎮(zhèn)咳藥，這類藥物通過(guò)抑制肺-迷走神經(jīng)反射而阻斷咳嗽反射的傳入沖動(dòng)，起到鎮(zhèn)咳作用，如苯丙哌林、磷酸苯丙哌林、莫吉斯坦等，多數(shù)為生物堿類藥物，可能會(huì)產(chǎn)生惡心、心悸、頭暈等不良反應(yīng)。雖然臨床上用于鎮(zhèn)咳的藥物繁多，但很多慢性咳嗽患者用這些藥物治療并不能獲得有效的緩解。
[0006]中醫(yī)藥學(xué)是中華民族幾千來(lái)防病治病豐富實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的結(jié)晶，中醫(yī)能辨西醫(yī)不明之癥，中藥能治西藥難治和不治之癥，中醫(yī)中藥對(duì)咳嗽的治療有著悠久的歷史與豐富的經(jīng)驗(yàn)，可以與西醫(yī)西藥互為補(bǔ)充。雖然目前國(guó)內(nèi)有很多治療咳嗽的中藥和中成藥，但這些藥物的有效組分、適應(yīng)癥并不清楚。另外，對(duì)于不明原因且伴有氣道炎癥的慢性咳嗽患者，還沒(méi)有很好的治療藥物，因而研發(fā)副作用更小且能有效治療咳嗽的純天然中藥是從事呼吸系統(tǒng)疾病領(lǐng)域藥學(xué)工作者的首要任務(wù)。
[0007]中藥細(xì)辛，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。2010版《中國(guó)藥典》規(guī)定細(xì)辛來(lái)源為馬3?鈴科植物北細(xì)辛 Asarum Heterotropoids Fr.Schmidt var.mandshuricum (Maxim.)Kitag.、漢城細(xì)辛Asarum sieboldii Miq.var.seoulense Nakai 或華細(xì)辛Asarum sieboldiiMiq.的干燥根與根莖。性溫，味辛，歸心、肺、腎經(jīng)。具有解表散寒、祛風(fēng)止痛、通竅、溫肺化飲的功效，用于痰飲咳喘、風(fēng)寒感冒、頭痛、牙痛、鼻塞流涕、鼻鼽、鼻淵、風(fēng)濕痹痛的治療。古籍有細(xì)辛治咳的記載，《本經(jīng)》謂:“細(xì)辛，主咳逆，頭痛腦動(dòng)……利九竅”；《本草綱目》:“辛能泄肺，故風(fēng)寒咳嗽上氣者宜用之”；《日華子本草》:“治咳……胸中結(jié)聚”；《長(zhǎng)沙藥解》:“善降沖逆，專止咳嗽”；《藥性論》:“治咳逆上氣……”等。目前有關(guān)細(xì)辛止咳文獻(xiàn)的報(bào)道大多集中在揮發(fā)油中的甲基丁香酚成分(周慧秋.甲基丁香酚藥理作用研究.中醫(yī)藥學(xué)報(bào).2000，(2): 79-80)。我們前期研究發(fā)現(xiàn):細(xì)辛揮發(fā)油對(duì)檸檬酸激發(fā)的急性咳嗽豚鼠模型具有明顯的鎮(zhèn)咳作用，但對(duì)于香煙暴露下咳嗽高敏豚鼠模型鎮(zhèn)咳效果則明顯沒(méi)有細(xì)辛非揮發(fā)性成分細(xì)辛總多糖好，且大劑量具有一定的副作用。此外，對(duì)于細(xì)辛非揮發(fā)性成分研究報(bào)道也較少，僅有報(bào)道從細(xì)辛根及根莖中分離得到非揮發(fā)性成分卡枯醇、1-細(xì)辛脂素、1-芝麻脂素、馬兜鈴酰胺1、山奈酚-3-0-葡萄糖苷等(蔡少青.北細(xì)辛非揮發(fā)性化學(xué)成分的研究.北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).1996，28(3):228-230;呂帥.遼細(xì)辛地下部分的化學(xué)成分(II).沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào).2010，27 (9):707-710 ;魏青春.漢城細(xì)辛化學(xué)成分的分離與鑒定.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥.2010，21 (3):676-677)。已有研究報(bào)道細(xì)辛多糖的制備方法(李晶晶.細(xì)辛多糖的分離純化與免疫活性研究.長(zhǎng)春師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版).2008，27(1): 54-58)，但這種方法需要提取3次、每次提取周期較長(zhǎng)(6h)、制備過(guò)程中需要離心處理，因此不適合工業(yè)化大生產(chǎn)；且這種制備方法總多糖得率較低(9.56wt%)，糖含量亦較低(48wt%-52wt%);此外，有報(bào)道細(xì)辛非揮發(fā)性成分細(xì)辛多糖具有促進(jìn)小鼠脾T、B淋巴細(xì)胞增殖作用(李晶晶.細(xì)辛多糖的分離純化與免疫活性研究.長(zhǎng)春師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版).2008, 27 (I): 54-58)，但目前尚未見(jiàn)有關(guān)細(xì)辛非揮發(fā)性成分細(xì)辛總多糖鎮(zhèn)咳活性的研究報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物。
[0009]本發(fā)明的又一目的在于提供上述具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物的提取方法。
[0010]本發(fā)明的再一目的在于提供上述具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物在制備治療咳嗽藥物中的用途。
[0011]本發(fā)明目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):[0012]一種具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物，該細(xì)辛總多糖提取物中多糖含量在60wt%-80wt%o
[0013]組成所述多糖的單糖包括葡萄糖、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖中的一種以上。
[0014]上述具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物的提取方法，按照以下操作步驟:將細(xì)辛的根與/或根莖用極性溶劑熱回流提取，減壓濃縮干燥得到細(xì)辛總提物；將細(xì)辛總提物溶于水中，采用體積百分?jǐn)?shù)為40%-100%的乙醇進(jìn)行沉淀，減壓過(guò)濾，用乙醇洗滌，減壓干燥即得細(xì)辛總多糖提取物。
[0015]所述極性溶劑優(yōu)選為水。
[0016]所述極性溶劑的重量?jī)?yōu)選為細(xì)辛的根與/或根莖重量的5-20倍。
[0017]所述沉淀是優(yōu)選采用體積百分?jǐn)?shù)為60%_90%的乙醇進(jìn)行沉淀。
[0018]所述細(xì)辛為北細(xì)辛、漢城細(xì)辛或華細(xì)辛，更加優(yōu)選為北細(xì)辛；所述用乙醇洗滌是采用體積百分?jǐn)?shù)為60%-100%的乙醇進(jìn)行洗滌，更加優(yōu)選用乙醇洗滌是采用體積百分?jǐn)?shù)為80%-100%的乙醇進(jìn)行洗滌。
[0019]所述用乙醇洗滌的次數(shù)優(yōu)選為兩次。
[0020]本發(fā)明具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物的提取方法，總多糖得率15wt%。
[0021]上述具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物在制備治療咳嗽藥物中的用途，所述細(xì)辛總多糖提取物單獨(dú)或與其他藥物組合制備治療咳嗽藥物。
[0022]所述細(xì)辛總多糖提取物與可用藥物載體制成各種劑型。
[0023]所述劑型為顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸劑、泡騰片、軟膏劑、糖漿劑、注射劑、口服液、合劑、酊劑、緩釋劑、控釋劑或靶向制劑。
[0024]藥學(xué)上可接受的載體如:填充劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑或潤(rùn)濕劑。填充劑包括乳糖、蔗糖、玉米淀粉、山梨醇；粘合劑包括糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；潤(rùn)滑劑包括硬脂酸鎂；崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚維酮、微晶纖維素；潤(rùn)濕劑如十二烷基硫酸鈉。
[0025]本發(fā)明具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物的有效劑量按照人的體重60kg來(lái)計(jì)算,為 2.5g-ll.0g/ 人.天。
[0026]本發(fā)明可采用紫外分光光度法，以無(wú)水葡萄糖為對(duì)照品，在490nm波長(zhǎng)處以苯酚-硫酸法和/或在620nm處以蒽酮法測(cè)定細(xì)辛總多糖提取物中細(xì)辛有效總多糖含量。
[0027]本發(fā)明的原理:
[0028] 藥理實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的細(xì)辛總多糖提取物具有良好的減輕和/或抑制咳嗽的活性，可用于預(yù)防或治療各型咳嗽。
[0029]藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)于豚鼠急性咳嗽模型，檸檬酸激發(fā)后細(xì)辛總多糖提取物低、中、高劑量組與空白對(duì)照組相比可延長(zhǎng)動(dòng)物的咳嗽潛伏期，降低豚鼠的咳嗽次數(shù)；與細(xì)辛總揮發(fā)油相比細(xì)辛總多糖對(duì)豚鼠的急性鎮(zhèn)咳活性相對(duì)較弱；而對(duì)于慢性咳嗽敏感性增高并伴有氣道炎癥的豚鼠模型(香煙暴露14天)，檸檬酸激發(fā)后細(xì)辛總多糖提取物低、中、高劑量組與模型組相比可明顯延長(zhǎng)動(dòng)物的咳嗽潛伏期，降低豚鼠的咳嗽次數(shù)，同時(shí)可以降低豚鼠BALF中的炎癥細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞的比例，抑制氣道炎癥，達(dá)到或接近可待因的效果；與細(xì)辛總提取物及細(xì)辛總揮發(fā)油相比，細(xì)辛總多糖提取物高劑量組鎮(zhèn)咳率均具有顯著性差異(p〈0.05)，顯示細(xì)辛總多糖提取物對(duì)于長(zhǎng)期香煙暴露下的咳嗽高敏豚鼠模型具有更好的鎮(zhèn)咳活性。
[0030]急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，細(xì)辛總多糖提取物經(jīng)灌胃給藥途徑，SPF級(jí)NIH小鼠的食量、體重未見(jiàn)異常，LD50 > 10.0g/kg，表明毒性低，具有良好的用藥安全性。
[0031]本發(fā)明的有益效果是:
[0032](I)本發(fā)明為目前鎮(zhèn)咳藥物提供了一種全新的選擇和思路，拓展了鎮(zhèn)咳藥物的選擇領(lǐng)域，也為該【技術(shù)領(lǐng)域】的發(fā)展做出了貢獻(xiàn)。
[0033](2)本發(fā)明首次證明細(xì)辛總多糖提取物具有顯著的鎮(zhèn)咳效果，可以降低咳嗽敏感性和抑制氣道炎癥的作用，且無(wú)成癮性。
[0034](3)急性毒性試驗(yàn)表明細(xì)辛總多糖提取物的毒性低，具有很好的用藥安全性。
[0035](4)本發(fā)明提供的細(xì)辛總多糖提取物的制備工藝能有效的富集并去除雜質(zhì)，其細(xì)辛總多糖得率及含量高，優(yōu)于現(xiàn)有的方法，質(zhì)量控制可以通過(guò)紫外分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定分析，該方法簡(jiǎn)單易行可控。
[0036](5)本發(fā)明提供的提取物制備方法簡(jiǎn)單、快捷、重現(xiàn)性好；所選用的溶劑低廉、無(wú)
毒。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0037]圖1細(xì)辛總多糖對(duì)急性咳嗽豚鼠模型咳嗽次數(shù)的影響(I 士S，》= 8)，其中A:空白組；B:溶劑組(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%CMC-Na) ;C:硫酸可待因30mg/kg組；D:細(xì)辛總多糖200mg/kg組；E:細(xì)辛總多糖400mg/kg組；F:細(xì)辛總多糖800mg/kg組；G:細(xì)辛總提物1600mg/kg組；H:細(xì)辛總揮發(fā)油 200mg/kg組；與空白組相比:*ρ〈0.05，**ρ〈0.01，***ρ〈0.001。
[0038]圖2細(xì)辛總多糖對(duì)慢性咳嗽高敏豚鼠模型咳嗽次數(shù)的影響(J士S，Π = 8)，其中A:空白組；B:模型組；C:溶劑組(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%CMC-Na) ；D:硫酸可待因30mg/kg組；E:細(xì)辛總多糖200mg/kg組；F:細(xì)辛總多糖400mg/kg組；G:細(xì)辛總多糖800mg/kg組；H:細(xì)辛總提物1600mg/kg組；1:細(xì)辛總揮發(fā)油200mg/kg組；與模型組相比:**ρ〈0.01，***ρ〈0.001 ;與細(xì)辛總提物組相比:ΑΡ〈0.05 ;與細(xì)辛總揮發(fā)油組相比:#ρ〈0.05。
[0039]圖3細(xì)辛總多糖對(duì)慢性咳嗽高敏豚鼠模型肺組織病理代表圖(HE染色，X 200)，其中A:空白組；Β:模型組；C:溶劑組(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%CMC-Na) ；D:硫酸可待因30mg/kg組；E:細(xì)辛總多糖200mg/kg組；F:細(xì)辛總多糖400mg/kg組；G:細(xì)辛總多糖800mg/kg組；H:細(xì)辛總提物1600mg/kg組；1:細(xì)辛總揮發(fā)油200mg/kg組。
[0040]圖4細(xì)辛總多糖對(duì)慢性咳嗽高敏豚鼠模型氣管組織病理代表圖(HE染色，X 200)，其中A:空白組；B:模型組；C:溶劑組(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%CMC-Na) ；D:硫酸可待因30mg/kg組；E:細(xì)辛總多糖200mg/kg組；F:細(xì)辛總多糖400mg/kg組；G:細(xì)辛總多糖800mg/kg組；H:細(xì)辛總提物1600mg/kg組；1:細(xì)辛總揮發(fā)油200mg/kg組。
【具體實(shí)施方式】
[0041]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述，但不作為對(duì)本發(fā)明的限定。
[0042]實(shí)施例1
[0043]細(xì)辛總多糖提取物的制備[0044]干燥的細(xì)辛根與/或根莖Ikg,粉碎成粗粉,過(guò)80目篩,用藥材重量10倍量的水，微沸加熱回流提取5h，提取液經(jīng)6層紗布濾過(guò)，減壓濃縮干燥得細(xì)辛總提物，將細(xì)辛總提物用水加熱溶解至1L，加入9倍體積量的無(wú)水乙醇至醇體積百分濃度為90%，邊加邊攪拌，充分沉淀后于4°C冰箱靜置過(guò)夜，傾倒上清液，沉淀減壓抽濾，等量90%體積百分比乙醇洗滌2次，常規(guī)干燥，即得細(xì)辛總多糖提取物，得率為15wt%。分別采用苯酚-硫酸法和蒽酮法紫外分光光度法測(cè)定細(xì)辛總多糖含量為68wt%和60wt%。
[0045]實(shí)施例2
[0046]小鼠經(jīng)口灌胃給予細(xì)辛總多糖提取物的急性毒性試驗(yàn)
[0047]I實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0048]SPF級(jí)NIH小鼠，雌雄各半，體重18_22g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK (粵)2008-0002 O
[0049]2實(shí)驗(yàn)方法
[0050]參照《藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》、《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》，采用正規(guī)Bliss法考察細(xì)辛總多糖提取物經(jīng)口灌胃給予小鼠的急性毒性。首先用最大濃度、最大給藥劑量、最大灌胃體積進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)前禁食不禁水12h試驗(yàn)時(shí)按10.0g/kg細(xì)辛總多糖提取物灌胃(相當(dāng)于生藥量24.4g/kg，相當(dāng)于臨床用量的12倍)。實(shí)驗(yàn)室溫度25±2°C，一次給藥，觀察14天，仔細(xì)觀察每只動(dòng)物并詳細(xì)記錄各種毒性反應(yīng)出現(xiàn)和消失的時(shí)間。觀察記錄的內(nèi)容包括皮膚、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、循環(huán)、自主活動(dòng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)行為表現(xiàn)等。給予受試物前、后各一周、動(dòng)物死亡及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)應(yīng)稱取動(dòng)物的體重。所有動(dòng)物包括死亡或處死的動(dòng)物均進(jìn)行尸檢，尸檢異常的器官應(yīng)作 組織病理學(xué)檢查。
[0051]3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0052]試驗(yàn)結(jié)果表明:以10.0g/kg的劑量經(jīng)口灌胃給予小鼠，給藥后14天內(nèi)，未見(jiàn)動(dòng)物死亡，各動(dòng)物精神及行為活動(dòng)狀況良好，皮膚被毛清潔，大小便、體重及攝食量的增長(zhǎng)均正常，亦未見(jiàn)其他毒性反應(yīng)癥狀。觀察結(jié)束后大體解剖未見(jiàn)臟器明顯異常。細(xì)辛總多糖的LD5tl> 10.0g/kg。
[0053]以上結(jié)果說(shuō)明，細(xì)辛總多糖的安全性高，無(wú)嚴(yán)重急性中毒的危險(xiǎn)性。
[0054]實(shí)施例3
[0055]細(xì)辛總多糖提取物對(duì)檸檬酸所致豚鼠咳嗽的急性鎮(zhèn)咳作用
[0056]I實(shí)驗(yàn)材料
[0057]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:普通級(jí)Hartley豚鼠，雌雄各半，體重250_350g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)=SCXK (粵)2008-0002。
[0058]試劑與儀器:一水合檸檬酸(廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào):20121001-2),用時(shí)配制成
0.8M的生理鹽水溶液；動(dòng)物無(wú)創(chuàng)Buxco肺功能檢測(cè)系統(tǒng)(美國(guó)Buxco公司);Aeroneb Pro霧化器(Aerogen (愛(ài)爾蘭)有限公司)；灌胃針(廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。
[0059]2實(shí)驗(yàn)方法
[0060]采用檸檬酸誘導(dǎo)豚鼠急性咳嗽模型進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)。取128只Hartley豚鼠，將其逐一置于動(dòng)物無(wú)創(chuàng)Buxco肺功能檢測(cè)系統(tǒng)6L體描儀內(nèi)，偏流儀空氣流速2.5L/min,使用Aeroneb Pro霧化器通入霧化的0.8M的檸檬酸超純水溶液氣溶膠lmin，霧化的粒子平均直徑2.5μπι，觀察5min，監(jiān)測(cè)6min內(nèi)的咳嗽次數(shù)，咳嗽的聲音由室內(nèi)放置的麥克風(fēng)記錄和放大，聲波經(jīng)B1system XA軟件進(jìn)行分析,再經(jīng)電腦軟件處理聲音數(shù)據(jù)記錄咳嗽次數(shù)，同時(shí)由經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的觀察者補(bǔ)充觀察。挑選咳嗽次數(shù)大于10次的豚鼠為合格動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。
[0061]取篩選合格的64只Hartley豚鼠，雌雄各半，隨機(jī)分成8組，空白組給予lmL/kg的生理鹽水，溶劑組給予等體積的相應(yīng)溶劑(質(zhì)量百分比濃度0.5%的CMC-Na水溶液)，陽(yáng)性藥組給予等體積的30mg/kg磷酸可待因，給藥組給予等體積的細(xì)辛總多糖提取物(實(shí)施例1樣品 200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg)、細(xì)辛總提物(1600mg/kg)、細(xì)辛總揮發(fā)油(200mg/kg,常規(guī)水蒸汽蒸懼制備所得)，每天I次，連續(xù)給藥3天。末次給藥后2h在動(dòng)物無(wú)創(chuàng)Buxco肺功能檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檸檬酸霧化激發(fā)試驗(yàn)(霧化條件同前)，霧化激發(fā)lmin，誘導(dǎo)豚鼠產(chǎn)生急性咳嗽，觀察5min，計(jì)算6min內(nèi)的咳嗽次數(shù)(N)、咳嗽潛伏期，并用公式“鎮(zhèn)咳率=(Ns自對(duì)照-N給藥組)/N空自對(duì)照X 100%計(jì)算各給藥組的鎮(zhèn)咳率。
[0062]數(shù)據(jù)用Z 土S表示，采用IBM SPSS Statisticsl9.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各組參數(shù)進(jìn)行單因素方差分析。進(jìn)行組間比較，P〈0.05為有顯著性差異。
[0063]3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0064](I)細(xì)辛總多糖提取物對(duì)急性咳嗽豚鼠模型咳嗽次數(shù)的影響
[0065]各組動(dòng)物經(jīng)過(guò)檸檬酸霧化激發(fā)后6min內(nèi)的咳嗽次數(shù)及咳嗽抑制率見(jiàn)表1及圖1。由表1及圖1可知，與空白組相比，細(xì)辛總多糖提取物中、高劑量組均可以顯著降低豚鼠的咳嗽次數(shù)(P〈0.05)，鎮(zhèn)咳率分別達(dá)到28.5%和32.3%。細(xì)辛總提取物在1600mg/kg劑量時(shí)鎮(zhèn)咳率為28.8%，而細(xì)辛總多糖提取物高劑量組在800mg/kg劑量時(shí)鎮(zhèn)咳率達(dá)到相當(dāng)水平，顯示細(xì)辛總多糖提取物的鎮(zhèn)咳活性較總提取物為高，進(jìn)而說(shuō)明細(xì)辛總多糖是細(xì)辛鎮(zhèn)咳的主要活性組分之一，細(xì)辛總多糖提取物與細(xì)辛總提取物之間無(wú)顯著性差異。細(xì)辛總揮發(fā)油對(duì)于豚鼠的急性鎮(zhèn)咳活性均比細(xì)辛總提取物及細(xì)辛總多糖好(鎮(zhèn)咳率53.8%)，但三者之間均無(wú)顯著性差異。
[0066]以上結(jié)果表明，細(xì)辛總多糖提取物具有良好的急性鎮(zhèn)咳作用，并具量效關(guān)系，且用藥相對(duì)安全。
[0067]表1細(xì)辛總多糖提取物對(duì)急性咳嗽豚鼠模型咳嗽次數(shù)的影響0- ±S，?= 8 '
[0068]
【權(quán)利要求】
1.一種具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物，其特征在于:該細(xì)辛總多糖提取物中多糖含量在 60wt%-80wt%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物，其特征在于:組成所述多糖的單糖包括葡萄糖、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖中的一種以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物的提取方法，其特征在于按照以下操作步驟:將細(xì)辛的根與/或根莖用極性溶劑熱回流提取，減壓濃縮干燥得到細(xì)辛總提物；將細(xì)辛總提物溶于水中，采用體積百分?jǐn)?shù)為40%-100%的乙醇進(jìn)行沉淀，減壓過(guò)濾，用乙醇洗滌，減壓干燥即得細(xì)辛總多糖提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于:所述極性溶劑為水；所述極性溶劑的重量為細(xì)辛的根與/或根莖重量的5-20倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于:所述沉淀是采用體積百分?jǐn)?shù)為60%-90%的乙醇進(jìn)行沉淀；所述用乙醇洗滌的次數(shù)為兩次。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于:所述細(xì)辛為北細(xì)辛、漢城細(xì)辛或華細(xì)辛；所述用乙醇洗滌是采用體積百分?jǐn)?shù)為60%-100%的乙醇進(jìn)行洗滌。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的提取方法，其特征在于:所述細(xì)辛為北細(xì)辛；所述用乙醇洗滌是采用體積百分?jǐn)?shù)為80%-100%的乙醇進(jìn)行洗滌。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有鎮(zhèn)咳活性的細(xì)辛總多糖提取物在制備治療咳嗽藥物中的用途，其特征 在于:所述細(xì)辛總多糖提取物單獨(dú)或與其他藥物組合制備治療咳嗽藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于:所述細(xì)辛總多糖提取物與可用藥物載體制成各種劑型。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于:所述劑型為顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸劑、泡騰片、軟膏劑、糖漿劑、注射劑、口服液、合劑、酊劑、緩釋劑、控釋劑或靶向制劑。
【文檔編號(hào)】A61K31/715GK104027345SQ201410115066
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年3月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月25日
【發(fā)明者】賴克方, 劉曉東, 鐘伯年, 鐘山, 聶怡初 申請(qǐng)人:廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院, 廣州呼吸疾病研究所