專利名稱：一種抗卵巢功能衰退的中藥多糖提取物、制備方法及用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥領域，具體涉及一種抗卵巢功能衰退中藥多糖提取物、制備方法及用途。
背景技術：
卵巢功能衰退可引發(fā)不孕不育、生殖系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、骨質疏松等系列疾病，卵巢過早衰退(Premature ovarian failure,P0F,即卵巢早衰)致使患者生活質量下降。此夕卜，隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，越來越多的職業(yè)女性選擇延遲生育時間，但女性的最佳生殖時間窗同樣受到卵巢功能的嚴重限制。因此探討卵巢功能衰退衰老機制、預測卵巢功能衰退的指標以及防治卵巢功能過早衰退的措施是當今生殖健康領域的研究熱點和難點。
流行病學研究顯示卵巢早衰的發(fā)生率為1%，然而這1%的婦女如何最終達到卵巢衰竭的狀態(tài)，POF初始階段的狀態(tài)如何，目前仍有很多未知。有研究發(fā)現(xiàn)，隨年齡增加，卵泡密度逐漸下降，35歲以上婦女卵泡密度明顯降低，是35歲以下者卵泡密度的1/4，40歲以上婦女卵泡密度急劇降低，部分婦女卵泡密度降至O。Nikolaou估計在一般人群中至少有10%的婦女經(jīng)歷著過早的卵巢衰退，那根據(jù)POF的1%發(fā)生率，至少有9%的婦女處于卵巢衰退的早期狀態(tài)，有專家對此狀態(tài)命名為卵巢早老化(premature ovarian aging,POA),并對兩者病因學進行比較研究，結果支持了 POA是POF—種早期階段表現(xiàn)的觀點。有研究提示治療高促性腺激素閉經(jīng)的效果與病程以及促卵泡生成素(FSH)水平有關。激素替代治療(Hormone replacement therapy,HRT)是目前現(xiàn)代醫(yī)學治療卵巢衰老相關癥狀和疾病的重要方法，但現(xiàn)有研究明顯表明其具有多種副作用和遠期致癌性，使其臨床應用受到明顯的限制。

發(fā)明內容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術不足，根據(jù)中國遵循傳統(tǒng)中醫(yī)理論，采用中藥方劑治療，通過“補腎益陰、疏肝養(yǎng)血”而達到延緩卵巢衰老的目的。本發(fā)明提供了一種枸杞、桑椹和生地黃組方形成的抗卵巢功能衰退有效中藥復方，從有效部位層面，通過適當?shù)奶崛〖兓椒ê图夹g，盡可能多地提取和保留其中的多糖成分，以保證中藥復方的藥效，提高療效，減少服用量，活性明確，毒副作用小。本發(fā)明目的是通過下面的技術方案實現(xiàn)的
一種抗卵巢功能衰退的中藥多糖提取物，采用如下方法制備而成
O按以下重量份取原料藥枸杞子50-200份，桑椹40-160份和生地黃30-120份，混合均勻，取6-10倍于原料藥重量的10-50%聚合物水溶液充分溶解后，按質量比為鹽聚合物=0. 5-3:1加入鹽充分振蕩，靜止分相，離心分離，去其上層清液得沉淀物；
2)將步驟I)得到的沉淀部分依次用乙醇、丙酮和乙醚洗滌后，真空干燥，得多糖部位。上述聚合物優(yōu)選聚乙二醇、聚維酮、葡聚糖、壬苯環(huán)氧乙烯或右旋糖酐硫酸鈉一種或幾種的混合物，更優(yōu)選聚維酮6000，上述的鹽優(yōu)選KH2P04、K2HP04、(NH4) 2S04、檸檬酸銨、氯化鉀或硝酸鈉。上述10-50%聚合物水溶液為重量體積百分比。上述中藥多糖提取物，可以單獨或與一種或一種以上的藥學上可接受的載體組合制成制劑以供給藥，如針劑、輸液、滴丸、片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液等。本發(fā)明所述中藥多糖提取物各種劑型可以按照藥學領域中熟知的方法進行制備。這些藥用制劑中可以含有與載體組合的例如0.059Γ90%重量的活性成分，更常見約15°/Γ60%之間重量的活性成分。本發(fā)明還提供了一種上述中藥多糖提取物的制備方法，包括如下步驟
1)按以下重量份取原料藥枸杞子50-200份，桑椹40-160份和生地黃30-120份，混 合均勻，取6-10倍于原料藥重量的10-50%聚合物水溶液充分溶解后，按質量比為鹽聚合物=0. 5-3:1加入鹽充分振蕩，靜止分相，離心分離，去其上層清液得沉淀物；
2)將步驟I)得到的沉淀部分依次用乙醇、丙酮和乙醚洗滌后，真空干燥，得多糖部位。上述聚合物優(yōu)選聚乙二醇、聚維酮、葡聚糖、壬苯環(huán)氧乙烯或右旋糖酐硫酸鈉一種或幾種的混合物，更優(yōu)選聚維酮6000，上述的鹽優(yōu)選KH2P04、K2HP04、(NH4)2SO4、檸檬酸銨、氯化鉀或硝酸鈉。上述中藥多糖提取物經(jīng)藥理實驗證實其具抗卵巢功能衰退功能,所述的卵巢衰退癥狀優(yōu)選多囊卵巢綜合征、功能性月經(jīng)不調、卵巢早衰或絕經(jīng)期綜合征。本發(fā)明提供了一種上述中藥多糖提取物在制備抗卵巢功能衰退藥物中的應用。本發(fā)明所述中藥多糖提取物采用的中藥復方由枸杞、桑椹和地黃組成，其中，枸杞味甘，性平。能補肝腎，益精血，明目，主治肝腎陰虧，腰膝酸軟，頭暈，目眩，目昏多淚，虛勞咳嗽，消渴，遺精。現(xiàn)代醫(yī)學研究證明枸杞有免疫調節(jié)、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、抗疲勞、降血脂、降血糖、降血壓、補腎、保肝、明目、養(yǎng)顏、健腦、排毒、保護生殖系統(tǒng)、抗輻射損傷等十六項功能，其活性部位為枸杞多糖。桑椹味甘酸，性寒，有補肝益腎、養(yǎng)血生津、滋液熄風、潤腸通便的作用，主治肝腎陰虛、耳鳴、津液不足、老年便秘、消渴、瘰疬、關節(jié)不利、神經(jīng)衰弱等證，活性部位為多糖及其微量元素。生地黃味甘，苦，性寒，歸心、肝、肺經(jīng)，具有清熱涼血、養(yǎng)陰、生津之功效，用于熱病舌絳煩渴、陰虛內熱、骨蒸勞熱、內熱消渴、吐血、衄血、發(fā)斑發(fā)疹等證，活性部位為多糖。現(xiàn)有文獻《枸杞多糖對自然衰老雌性大鼠卵巢保護作用機制的探討》(韋敏，鄭生智，馬紅等，《中藥材》，2011年12期)公開發(fā)現(xiàn)枸杞多糖對大鼠卵巢系統(tǒng)具有保護作用。《六味地黃丸治療卵巢早衰的實驗研究》(楊蘭英，《山西中醫(yī)學院學報》2002年第01期)研究了六味地黃丸對大鼠下丘腦一垂體一卵巢軸的調節(jié)作用，恢復、改善卵巢功能，提高體內雌激素水平，調整內分泌的作用。但是尚無針對由枸杞、桑椹和地黃組成中藥復方的多糖有效部位治療卵巢功能衰退的報道。目前，含有枸杞、桑椹和地黃等藥材的中藥復方多用于男性疾病治療與保健，未用于女性卵巢疾病治療與保健，如申請?zhí)枮镃N201110196777. 6，公開號為CN102258627A的中國專利文獻“一種男士保健酒及其制備方法”公開了一種男士保健酒及其配制方法，炮制藥材中含有鹿茸、不老草、肉蓯蓉、鎖陽、淫羊藿葉、海馬、海狗腎、蛤蚧、生地黃、山萸肉、菟絲子、桑椹子、覆盆子、五味子、枸杞子、蛇床子、車前子、靈芝、吉林人參、云苓、冬蟲夏草、紅景天、雪蓮、鹿鞭、牛鞭、狗鞭、雄蠶蛾、蜈蚣、當歸、白芍、灸甘草、黑螞蟻、紅螞蟻、炒棗仁、制首烏。申請?zhí)枮镃N200610067535. 6，授權公告號為CN1857520的中國專利文獻“治療不育癥的藥物”公開了一種治療不育癥的藥物，它的原料組成為，紫河車10 -30份、淫羊藿10 - 30份、枸杞子10 - 20份、沙苑子5 — 15份、女貞子10 — 30份、覆盆子5 - 15份、五味子5 — 15份、桑椹子5 — 15份、菟絲子5 — 15份、何首烏10 — 30份、生地黃5 — 15份、當歸10 — 30份和甘草梢5 — 15份。主要適應由于男性引起的少精子癥，畸形精子癥、無精子癥的不育癥患者。申請?zhí)枮镃N200610074229. 5，公開號為CN1861164的中國專利文獻“一種治療陰虛火旺型男子不育癥的湯劑藥物及制備方法”公開了一種治療陰虛火旺型男子不育癥的湯劑藥物及制備方法，涉及治療陰虛火旺型男子不育癥的中草藥配方，其藥物是由下述重量份的原料制成的炒黃柏、知母各12 15克，生地黃、山萸肉、女貞子、桑椹、旱蓮草、枸杞子、何首烏、牡丹皮、澤瀉、炙龜板各9 12克。此外，本發(fā)明技術方案采用雙水相萃取法提取中藥多糖有效部位，有別于多糖常規(guī)的提取方法，多糖提取工藝常見于水提醇沉法、超聲法、微波法或調整PH值來提取。 文獻《微波法與傳統(tǒng)工藝提取枸杞多糖的比較研究》(陳金娥，李成義，張海容.中成藥，2006，28(4) : 573-576)、《枸杞多糖的提取分離及其組成研究》(茍春林，茍金萍，張艷等.寧夏農(nóng)林科技，2012，53 (5) :89-90，92)、《枸杞多糖提取方法的研究進展》(張爽，王飛娟，王燕.中國科技信息，2012，7:148)、《枸杞多糖提取工藝優(yōu)化方法的研究進展》(翁艷英，張貞發(fā).科技信息，2012,11:19)、以及《黑果枸杞多糖的純化工藝研究》(彭強，呂曉鵬，黃琳娟，等.西北農(nóng)業(yè)學報，2012，21 (2) :121-126)等科技文獻中多采用酶提法、水提法、超聲法、微波法、堿提法、超臨界萃取，純化有脫鹽、反滲透濃縮、冷凍升華干燥、超濾法、sevage除蛋白、過氧化氫除色素、透析法等進行枸杞多糖的提取和純化。文獻《桑椹多糖提取工藝的優(yōu)化》(魏兆軍，胡海梅，柏曉輝，等.食品科學，2007，28(11) :261-264)、《新疆黑桑椹多糖的提取和測定》(江巖，李斌，郭曉軍.食品科學，2008，29(8) :224-226)、《新疆黑桑椹多糖超聲提取工藝優(yōu)選》(江巖.中國釀造.2009，3:138-140)等科技文獻中公開了桑椹使用超聲提取、水提醇沉，采用sevage除蛋白、透析法等手段純化桑椹多糖。文獻《超濾膜技術在多糖提取方面的應用》(胡亞芹，曹楊.生物技術通訊，2005，16(2) :228-230)、《超聲技術在熟地黃多糖提取中的應用》(陳傳福，張曉偉，張培正.食品科學，2008, 29 (02) : 184-187)、《地黃多糖的提取純化工藝研究》(趙平鴿，劉曉·中國藥房，2010，21 (23) :2146-2148)、《地黃多糖的研究概況》(王玉華，王偉.上海中醫(yī)藥雜志，2007，41 (5) :81- 83)、《地黃多糖提取分離技術的研究進展》(許春鵑，薛進華，范啟蘭.贛南醫(yī)學院學報，2012，32(2) :315-316)等文獻公開了使用酶提法、微波法、超聲法、水提醇沉法、超濾法，采用sevage除蛋白、透析法、過氧化氫脫色、離子水逆流透析等工藝純化多糖。上述文獻中對枸杞、桑椹、地黃多糖的提取純化工藝均為常規(guī)方法，工藝繁雜，且提取率不高。本發(fā)明使用雙水相萃取法，利用兩種化學結構不同的親水性高聚物或者一種親水性高聚物與無機鹽在水中以適當?shù)臐舛刃纬傻幕ゲ幌嗳艿膬蓚€水相體系，利用體系中多糖、蛋白質和其它生物分子在兩個水相間分配系數(shù)的差異，而使得各自溶解度不同，從而進行分離。本發(fā)明工藝條件溫和、處理時間短、后處理簡便，不會引起生物活性物的失活和變性，即保留復方中各藥材成分的綜合作用，有利于發(fā)揮中藥的多效性，又去除了組織物質和部分無效成分，延長了儲存期，提高了純度，減少了服用量，質量控制的再現(xiàn)性提高，同時提供了一種活性多糖的新的工業(yè)化提取途徑，該法省時，省力，提取物多糖含量高，提取率高。
此外本發(fā)明克服現(xiàn)有的膠囊服用劑量大、貯存不便、時間短的特點，通過對全方原料藥材用適宜的溶劑提取分離并篩選出藥效較高部位，保留藥材有效成分，去除組織物質和部分無效成分，活性明顯提高，減少服用量，增強藥物順醫(yī)性，質量控制的再現(xiàn)性提高，方便貯藏和運輸。本發(fā)明的方法工藝簡單安全，所得有效部位藥效強于原方藥材，生產(chǎn)成本低，適于工業(yè)化生產(chǎn)，制備出的組合物為活性成分可制成各種藥物劑型，如軟膠囊、片劑、滴丸、緩控釋劑等等。


圖I為流式細胞儀檢測藥物作用后的凋亡指數(shù)圖。
具體實施例方式以下將結合具體實施例對本發(fā)明做進一步闡述，這些實例僅用于說明目的，而不用于限制本發(fā)明范圍。本發(fā)明的實驗動物，購自中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心(生產(chǎn)許可證號SCXK (軍)2007-004 )。·
·
實施例I
稱取一定量的聚維酮6000溶于去離子水中，按照表I配制溶液,備用。按照表I中的各組方比例稱取原料藥，混合均勻，用聚維酮6000水溶液充分溶解后，按表I中的比例加入檸檬酸銨充分振蕩，靜止分相，離心分離，去其上層清液得沉淀物；所得沉淀部分用乙醇、丙酮和乙醚分別洗滌后，真空干燥，得多糖部位。表I提取工藝各組分及試劑比例
權利要求
1.一種抗卵巢功能衰退的中藥多糖提取物，其特征在于采用如下方法制備而成 1)按以下重量份取原料藥枸杞子50-200份，桑椹40-160份和生地黃30-120份，混合均勻，取6-10倍于原料藥重量的10-50%聚合物水溶液充分溶解后，按質量比為鹽聚合物=0. 5-3:1加入鹽充分振蕩，靜止分相，離心分離，去其上層清液得沉淀物； 2)將步驟I)得到的沉淀部分依次用乙醇、丙酮和乙醚洗滌后，真空干燥，得多糖部位。
2.如權利要求I所述的抗卵巢功能衰退的中藥多糖提取物，其特征在于所述聚合物為聚乙二醇、聚維酮、葡聚糖、壬苯環(huán)氧乙烯或右旋糖酐硫酸鈉一種或幾種的混合物，所述的鹽為KH2PO4、K2HP04、(NH4)2SO4、檸檬酸銨、氯化鉀或硝酸鈉。
3.如權利要求2所述的抗卵巢功能衰退的中藥多糖提取物，其特征在于所述聚合物為聚維酮6000。
4.如權利要求1-3所述的抗卵巢功能衰退的中藥多糖提取物,其特征在于加入藥劑學上可接受的相應輔料，所述藥劑是針劑、輸液、滴丸、片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液。
5.—種如權利要求I所述的抗卵巢功能衰退的中藥多糖提取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟 O按以下重量份取原料藥枸杞子50-200份，桑椹40-160份和生地黃30-120份，混合均勻，取6-10倍于原料藥重量的10-50%聚合物水溶液充分溶解后，按質量比為鹽聚合物=0. 5-3:1加入鹽充分振蕩，靜止分相，離心分離，去其上層清液得沉淀物； 2)將步驟I)得到的沉淀部分依次用乙醇、丙酮和乙醚洗滌后，真空干燥，得多糖部位。
6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于所述聚合物為聚乙二醇、聚維酮、葡聚糖、壬苯環(huán)氧乙烯或右旋糖酐硫酸鈉一種或幾種的混合物，所述的鹽為KH2P04、K2HPO4,(NH4)2SO4、檸檬酸銨、氯化鉀或硝酸鈉。
7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于所述聚合物為聚維酮6000。
8.如權利要求1-3所述的抗卵巢功能衰退的中藥多糖提取物在制備抗卵巢功能衰退藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥領域，提供了一種抗卵巢功能衰退中藥多糖提取物、制備方法及用途，具體為取枸杞子50-200份，桑椹40-160份和生地黃30-120份，混合均勻，取6-10倍于原料藥重量的10-50%聚合物水溶液充分溶解后，按質量比為鹽:聚合物=0.5-3:1加入鹽充分振蕩，靜止分相，離心分離，去其上層清液得沉淀物。沉淀部分依次用乙醇、丙酮和乙醚洗滌后，真空干燥，得多糖部位。本發(fā)明從有效部位層面，通過適當?shù)奶崛〖兓椒ê图夹g，盡可能多地提取和保留其中的多糖成分，以保證中藥復方的藥效，提高療效，減少服用量，活性明確，毒副作用小。
文檔編號C08B37/00GK102875690SQ20121038784
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月15日 優(yōu)先權日2012年10月15日
發(fā)明者韋敏, 馬紅, 呂曄 申請人:南京美福天然藥物科技有限公司