本發明是根據國立衛生研究院(nationalinstitutesofhealth，nih)授予的[合同號]在政府支持下完成的。政府具有本發明的某些權利。

背景

近年來，為了發現通過刺激免疫系統的某些關鍵方面連同通過抑制某些其他方面而起作用的新藥物化合物，已經付出了巨大的努力，并且取得了顯著成功(參見例如美國專利號6039969和6200592)。這些化合物(在本文中稱為免疫應答調節劑(irm))似乎通過被稱為toll樣受體(tlr)的基本免疫系統機制起作用來誘導所選擇的細胞因子生物合成、共刺激分子的誘導和抗原呈遞能力增加。

它們可用于治療多種疾病和病癥。例如，某些irm可用于治療病毒性疾病(如人乳頭狀瘤病毒、肝炎、皰疹)、瘤形成(如基底細胞癌、鱗狀細胞癌、光化性角化病、黑色素瘤)、和th2介導的疾病(如哮喘、過敏性鼻炎、特異性皮炎)、自身免疫疾病(如多發性硬化癥)，并且也可用作疫苗佐劑。

許多irm化合物是有機小分子咪唑并喹啉胺衍生物(參見例如美國專利號4689338)，但是許多其他化合物類別也是已知的(參見例如美國專利號5446153；6194425；和6110929；和國際公開號wo2005/079195)，并且還有更多仍在發現中。其他irm具有更高的分子量，例如寡核苷酸，包括cpg(參見例如美國專利號6194388)。

鑒于irm的巨大治療潛力，并且盡管已經完成了重要的工作，但是存在大量持續的需求來擴展它們的用途和治療益處。特別地，需要研究增強抗腫瘤免疫應答和結果的新方法和治療組合。

概述

免疫系統對諸如腫瘤的威脅的應答通過高度復雜的免疫激活和失活信號傳導途徑來調節或控制。信號傳導途徑和補償反饋機制如何相互作用以影響抗腫瘤免疫應答的全部僅部分地被理解，并且因此提供了用以鑒別新治療組合和方法的機會。

irm化合物通過免疫系統的tlr途徑起作用，以激活多種細胞介導的抗腫瘤免疫應答(例如，t細胞激活)。已知免疫系統天然地利用一系列被稱為檢查點受體作為下調激活的免疫細胞(例如t細胞)的補償手段，以便免受自身免疫。許多腫瘤已經進化出通過向檢查點受體表達激動性表面蛋白來逃避腫瘤環境中的抗腫瘤免疫應答的方法。涉及免疫激活與irm化合物的組合和用免疫檢查點抑制劑化合物阻斷免疫檢查點通路的方法應有助于維持和增強irm引發的抗腫瘤免疫應答。

已經發現，irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺[具有化學式(i)的化合物]與至少一種免疫檢查點抑制劑化合物組合給予增強了對腫瘤的免疫應答。已經進一步發現，具有化學式(i)的irm化合物與至少一種免疫檢查點抑制劑化合物的組合可以導致抗腫瘤應答的令人驚訝的改善，這如與單獨使用具有化學式(i)的irm化合物或免疫檢查點抑制劑化合物(即不組合使用)的單獨治療相比顯著降低的腫瘤生長速率所證明的。

還意外地發現，當使用全身性給予(腹膜內)一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物并且以使其主要定位并保持在腫瘤部位的方式給予(瘤內注射)具有化學式(i)的化合物的方法時，也可以抑制遠離瘤內注射部位的腫瘤生長。這個結果甚至在僅免疫檢查點抑制劑化合物的全身性給予(沒有給予具有化學式(i)的化合物)已顯示出很大程度上無效的免疫檢查點抑制劑化合物的劑量濃度下發生。

因此，在一方面，本披露提供了一種用于治療患有腫瘤的受試者的方法，該方法包括給予治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物和治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-ih-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(具有化學式(i)的化合物)或其藥學上可接受的鹽。

在另一方面，本披露提供了一種用于抑制受試者的腫瘤細胞生長的方法，該方法包括給予治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物和治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(具有化學式(i)的化合物)或其藥學上可接受的鹽。

在另一方面，本披露提供了一種用于增加包括腫瘤細胞的細胞群體的細胞介導的免疫應答的方法，該方法包括給予治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物和治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(具有化學式(i)的化合物)或其藥學上可接受的鹽。

在另一方面，本披露提供了一種用于治療腫瘤的治療組合，該治療組合包括治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物和治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(具有化學式(i)的化合物)或其藥學上可接受的鹽。

在另一方面，本披露提供了一種用于增加細胞群體的細胞介導的免疫應答的治療組合，該治療組合包括治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物和治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(具有化學式(i)的化合物)或其藥學上可接受的鹽。

為了方便起見，如本文使用的術語“n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺”和“具有化學式(i)的化合物”和“具有化學式(i)的irm化合物”可互換地使用。

n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺[具有化學式(i)的化合物]：

如本文使用的，“一個/種”、“該”、“至少一個/種”和“一個/種或多個/種”可互換地使用。

另外在本文中，借助端點對數值范圍進行的描述包括隸屬該范圍的全部數字(例如，1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。

“激動劑”是指可以與受體(如tlr)組合以誘導細胞活性的化合物。激動劑可以是直接結合受體的配體?？商娲?，激動劑可以間接地與受體組合，通過例如(a)與直接結合受體的另一種分子形成復合物，或(b)另外導致另一種化合物的修飾使得該另一種化合物結合該受體。關于tlr，激動劑可以被稱為特定tlr或tlr的特定組合(例如，tlr7/8激動劑-是tlr7和tlr8兩者的激動劑)的激動劑。

“拮抗劑”是指可以與受體(如免疫檢查點受體)組合以阻斷細胞活性的化合物。拮抗劑可以是直接結合受體的配體?？商娲?，拮抗劑可以間接地與受體組合，通過例如(a)與直接結合受體的另一種分子形成復合物，或(b)另外導致另一種化合物的修飾使得該另一種化合物直接結合該受體。

“減輕”是指特定病癥的癥狀或臨床體征特性的程度、嚴重性、頻率和/或可能性的任何降低。

“抗體片段”是指保留親本抗體對配體的至少一些結合功能的抗體的亞部分。

“抗體衍生物”是指抗體或抗體片段的化學修飾型式。衍生物的一些實例包括附接到其他功能性分子(例如peg基團、肽、蛋白質或其他抗體)上。

“阻斷”(block、blocking、blockade)以及其變體具有與“抑制”(inhibit、inhibiting、inhibition)以及其變體相同的含義。術語“阻斷”意在包括部分和完全阻斷兩者。

“細胞介導的免疫活性”是指被認為是細胞介導的免疫應答的一部分的生物活性，例如，至少一種th1細胞因子的產生的增加。

“人抗體”是指具有與人種系免疫球蛋白序列相同、與其基本上相同、或由其衍生的可變區和恒定區的抗體。人抗體可以包括由隨機或位點特異性突變產生的氨基酸序列。如本文使用的，術語人抗體包括人抗體衍生物。

“免疫細胞”是指免疫系統的細胞，即直接或間接地參與免疫應答的產生或維持的細胞，不論免疫應答是先天的、獲得的、體液的或細胞介導的。

“人源化抗體”是指具有來自非人哺乳動物物種的移接到人免疫球蛋白框架上的cdr序列的抗體。如本文使用的，術語人源化抗體包括人源化抗體衍生物。

“免疫檢查點抑制劑化合物”是指充當免疫檢查點通路的抑制劑(拮抗劑)的分子(如小分子、肽、多肽、蛋白質、抗體、抗體片段等)。對通路的抑制可包括通過結合作為免疫檢查點通路的一部分的受體或信號分子來阻斷通路。

“誘導”及其變體是指細胞活性的任何可測量的增加。例如，免疫應答的誘導可包括例如細胞因子產生方面的、免疫細胞群體激活方面的、增殖或成熟方面的、和/或其他免疫功能提高的指標方面的的增加。

“脂質體”通常是指由兩親性分子組成的自組裝顆粒，例如但不限于脂質、類脂或聚合物質。脂質體還可以包括脂肽、糖脂、膽固醇及其組合。脂質體還可以包括選擇性靶向遞送至某些細胞或組織的一個或多個基團。

“藥學上可接受的配制品”可以通過所選擇的給藥途徑向受試者遞送治療有效量的本披露化合物，通常是受試者耐受的，并且具有可接受的毒性特征(優選在給予劑量下最小至無毒性)。合適的藥學上可接受的配制品描述于雷明頓氏藥物科學(remington′spharmaceuticalsciences)，第18版(1990)，馬克出版公司(mackpublishingco.)中，并且可由本領域普通技術人員容易地選擇。

“藥學上可接受的鹽”是指化合物的衍生物，其中通過將該化合物中至少一個酸基團或堿基團轉化為無毒鹽形式來修飾該化合物。“藥學上可接受的鹽”的實例由貝爾熱(berge)在藥物科學雜志(journalofpharmaceuticalscience)(1977)，66，第1-19頁中描述，并且包括酸加成鹽和堿加成鹽。酸加成鹽包括化合物中堿性部分(例如胺基)的礦物鹽或有機酸鹽。合適的酸加成鹽包括衍生自無機酸(例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸等)的那些鹽。合適的酸加成鹽衍生自有機酸，例如，一元和二元羧酸(如乙酸、丙酸)、羥基烷酸(如檸檬酸、酒石酸)、芳族酸(如苯甲酸、木質素磺酸、雙羥萘酸)、脂族酸和芳香族磺酸(如對甲苯磺酸)等。堿加成鹽包括化合物中的酸性部分(例如羧酸基團)的堿土金屬礦物鹽和有機胺鹽。合適的堿加成鹽包括鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽等。其他合適的堿加成鹽包括無毒的有機胺，例如膽堿、乙二胺等。

“優選的”和“優選地”是指在某些情況下可以提供某些益處的本發明的實施例。然而，在相同或其他情況下，其他實施例也可以是優選的。此外，一個或多個優選實施例的敘述并不意味著其他實施例是無用的，并且不旨在將其他實施例排除在本發明的范圍之外。

“體征”或“臨床體征”是指與能夠由除該受試者以外的人發現的與特定病癥相關的客觀生理發現。

如本文使用的，“受試者”或“患者”是同義的，并且是指成人、兒童或嬰兒。

“癥狀”是指疾病或受試者病癥的任何主觀證據。

“治療性的(therapeutic)”及其變體是指減輕與病癥相關的一種或多種現有癥狀或臨床體征的治療。

“治療(treat)”及其變體是指使與病癥相關的癥狀或體征在任何程度上降低、限制發展、改善、預防、或消退。

應當理解的是，本文使用的措辭和術語是為了描述的目的，而不應被認為是限制性的。術語“包括”(includes、comprises)、或“具有”(has、have)及其變體的使用意在包括其后列出的項目及其等同物連同附加項目。

本披露的上述概述不旨在描述本發明的每個披露的實施例或每個實施。下面的描述更具體地舉例說明了說明性實施例。在貫穿本說明書的數個地方，通過實例的列表提供指導，這些實例能以不同的組合形式使用。在每種情況下，該列表僅作為代表性群組發揮作用并且不應當解釋為排他性列表。

附圖簡要說明

圖1是腫瘤尺寸隨時間生長的圖，并且對使用具有化學式(i)的化合物+抗ctla-4抗體的治療組合(b組)與單一療法和媒介物對照組(a、c、和d組)的治療進行了比較。

圖2是存活百分比隨時間的圖，并且對使用具有化學式(i)的化合物+抗ctla-4抗體的治療組合(b組)與單一療法和媒介物對照組(a、c、和d組)的治療進行了比較。

圖3是腫瘤尺寸隨時間生長的圖，并且對使用具有化學式(i)的化合物+抗pd-l1抗體的治療組合(f組)與單一療法和媒介物對照組(e、g、和h組)的治療進行了比較。

圖4是存活百分比隨時間的圖，并且對使用具有化學式(i)的化合物+抗pd-l1抗體的治療組合(f組)與單一療法和媒介物對照組(e、g、和h組)的治療進行了比較。

圖5是腫瘤尺寸隨時間生長的圖，并且對使用具有化學式(i)的化合物+抗ctla-4抗體+抗pd-l1抗體的治療組合(j組)與單一療法和媒介物對照組(i、k、和l組)的治療進行了比較。

詳細說明

本披露提供了用于治療腫瘤的方法和治療性組合物，該方法和治療組合包括給予治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺[具有化學式(i)的化合物]和治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物。具有化學式(i)的化合物通過激活toll樣受體7(tlr7)和toll樣受體8(tlr8)信號傳導途徑來激活腫瘤部位處的免疫應答。因此，具有化學式(i)的化合物稱為tlr7/8激動劑。由具有化學式(i)的化合物激活的抗腫瘤免疫應答包括但不限于干擾素-α；干擾素-γ；干擾素誘導蛋白；tnf-α，趨化因子例如ccl2、ccl3、ccl4、cxcl2；激活的t細胞；激活的b細胞；腫瘤特異性t細胞；激活的與腫瘤相關的巨噬細胞；趨化因子受體如ccr6；以及與腫瘤相關的淋巴聚集體的水平增加。

免疫檢查點抑制劑化合物通過阻斷抑制性免疫檢查點通路起作用，該通路下調或抑制以下各項中的一種或多種：t細胞的激活；抗原呈遞細胞(例如樹突細胞、b細胞和巨噬細胞)的激活；具有抗癌活性的先天免疫細胞(例如nk細胞)。將具有化學式(i)的irm化合物與免疫檢查點抑制劑化合物組合的治療方案通過增強或激活抗腫瘤免疫應答的免疫途徑的補償性上調(使用具有化學式(i)的irm化合物)和阻斷(或抑制)下調抗腫瘤免疫應答(具有免疫檢查點抑制劑化合物)的途徑來增加抗腫瘤免疫應答。

據信，當受試者對腫瘤有弱的(無效的)內源性抗腫瘤免疫應答時，本披露的組合治療可以是特別有益的。具有化學式(i)的irm化合物的有益效果是它可以通過激活先天的(例如ifn-α和il-12產生)和體液的(例如，腫瘤特異性t細胞產生)途徑兩者來將弱內源性抗腫瘤免疫應答轉化為強應答。然而，據信通過具有化學式(i)的irm化合物的免疫應答激活也可以通過一個或多個免疫檢查點通路的激活而引起腫瘤環境中免疫應答的后續補償性(和不期望的)下調。例如，免疫檢查點通路的補償性激活可以導致腫瘤細胞和/或與腫瘤相關的巨噬細胞(tams)上增加的檢查點配體擴增，這導致用于下調免疫學抗腫瘤應答的信號傳導增加。給予至少一種檢查點抑制劑化合物可以阻斷這些檢查點通路，這樣使得通過給予具有化學式(i)的irm化合物而增強的抗腫瘤免疫應答可以被維持，持續時間被延長，并且在一些情況下被增強。在受試者對腫瘤具有弱(無效)的內源性抗腫瘤免疫應答的情況下，僅給予一種或多種檢查點抑制劑化合物(即，不給予具有化學式(i)的化合物)的治療可能不足以產生有效的抗腫瘤應答。

n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺[具有化學式(i)的化合物]具有以下的結構：

在一個實施例中，本披露提供了一種用于治療患有腫瘤的受試者的方法，該方法包括給予治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物和治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(具有化學式(i)的化合物)或其藥學上可接受的鹽。

在一個實施例中，本披露提供了一種用于抑制受試者的腫瘤細胞生長的方法，該方法包括給予治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物和治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(具有化學式(i)的化合物)或其藥學上可接受的鹽。

在另一個實施例中，本披露提供了一種用于增加包括腫瘤細胞的細胞群體的細胞介導的免疫應答的方法，該方法包括給予治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物和治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(具有化學式(i)的化合物)或其藥學上可接受的鹽。

在另一個實施例中，本披露提供了一種用于治療腫瘤的治療組合，該治療組合包括治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物和治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(具有化學式(i)的化合物)或其藥學上可接受的鹽。

在另一個實施例中，本披露提供了一種用于增加細胞群體的細胞介導的免疫應答的治療組合，該治療組合包括治療有效量的一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物和治療有效量的irm化合物n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(具有化學式(i)的化合物)或其藥學上可接受的鹽。

在本披露的一個實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入藥學上可接受的配制品中。在一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入可注射配制品中。在一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入基本上將該具有化學式(i)的化合物保持在注射部位或其附近的可注射配制品中。

在本披露的一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入包含植物油的配制品中。在一些實施例中，該植物油選自芝麻油、菜籽油、蓖麻油、椰子油、玉米油、橄欖油、棕櫚油、紅花油、大豆油、向日葵油或花生油。

在一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入包含芝麻油的配制品中。在一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入包含芝麻油和乙醇的配制品中。將配制品中乙醇的量報告為配制品中乙醇的重量百分比(wt-％)。在一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入包含芝麻油和從1wt-％至9wt-％的乙醇的配制品中。在一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入包含芝麻油和從7wt-％至8wt-％的乙醇的配制品中。在一些實施例中，在本文所述的配制品中所使用的芝麻油是藥物級的，例如芝麻油(sesameoil)，nf。在一些實施例中，可將芝麻油進行精制，這樣使得一種或多種極性化合物基本上從芝麻油中去除或在基本上不改變芝麻油的脂肪酸譜的情況下使其含量降低。關于這種配制品的進一步信息可以在2013年11月5日提交的共同未決的美國專利申請序列號61/900255中找到。

在本披露的一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入乙醇配制品中。在一些實施例中，乙醇不含任何水或變性劑?？捎糜诒九端雠渲破分械氖纠砸掖及?00普如弗(proof)乙醇，例如脫水乙醇，usp級。

在本披露的一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入藥學上可接受的脂質體配制品中。使用二油酰磷脂酰膽堿(dopc)的具有化學式(i)的化合物的藥學上可接受的脂質體配制品的一個實例描述于美國專利申請號2013/0230578(懷特曼(wightman))的實例2中。

在本披露的一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入藥學上可接受的配制品中，并且將該藥學上可接受的配制品通過皮內、皮下或肌內注射給予。

在本披露的一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入藥學上可接受的配制品中，并且將該藥學上可接受的配制品直接注射到腫瘤中(即瘤內注射)。在一些實施例中，將具有化學式(i)的化合物摻入藥學上可接受的配制品中，并將該藥學上可接受的配制品注射入腫瘤周圍的腫瘤外周區域中。腫瘤外周區域可以含有抗腫瘤免疫細胞。

所預期的是，在注射時，具有化學式(i)的化合物通常位于并維持在注射部位持續延長的時間。因此，具有化學式(i)的化合物可以在給予部位(或在局部應用部位)誘導細胞因子產生，并且可以在沒有實質性全身性細胞因子誘導(例如tnf-α)的情況下這樣做。

適于給予具有化學式(i)的化合物的其他藥物配制品包括但不限于溶液、懸浮液和乳液配制品。配制品的類型包括但不限于水性配制品(例如磷酸鹽或檸檬酸鹽緩沖鹽水)、油配制品、多元醇配制品(例如甘油、聚乙二醇)、水包油配制品和油包水配制品。藥物配制品可以進一步包括一種或多種添加劑，例如助懸劑、著色劑、表面活性劑和分散劑。

描述免疫檢查點通路和用免疫檢查點抑制劑化合物阻斷這種途徑的綜述由帕多爾(pardoll)在癌癥自然評論(naturereviewscancer)(2012年4月)，第252-264頁中提供。免疫檢查點抑制劑化合物通過阻斷一種或多種下調抗腫瘤免疫應答的內源免疫檢查點通路而顯示出抗腫瘤活性。免疫檢查點通路的抑制或阻斷通常涉及抑制檢查點受體和配體與免疫檢查點抑制劑化合物的相互作用，以減少或消除下調信號并導致抗腫瘤應答的減少。

在本披露的一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物抑制免疫檢查點受體與免疫檢查點受體的相應配體之間的信號傳導相互作用。免疫檢查點抑制劑化合物可以通過阻斷免疫檢查點通路的激活而起作用，阻斷免疫檢查點通路的激活是通過抑制(拮抗作用)免疫檢查點受體(一些受體實例包括ctla-4、pd-1、lag-3、tim-3、btla和kir)或通過抑制免疫檢查點受體的配體(配體的一些實例包括pd-l1和pd-l2)。在這樣的實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物的作用是減少或消除腫瘤微環境中免疫系統抗腫瘤應答的某些方面的下調。

免疫檢查點受體細胞毒性t淋巴細胞相關抗原4(ctla-4)在t細胞上表達，并參與降低t細胞激活水平的信號傳導途徑。據信，ctla-4可以通過cd80和cd86的競爭性結合和螯合來下調t細胞激活。此外，已顯示ctla-4參與增強treg細胞的免疫抑制活性。

免疫檢查點受體程序性死亡1(pd-1)由延長暴露于抗原時的激活的t細胞表達。pd-1與其已知的結合配體(pd-l1和pd-l2)的結合主要發生在腫瘤微環境內，并導致抗腫瘤特異性t細胞應答的下調。pd-l1和pd-l2都已知在腫瘤細胞上表達。pd-l1和pd-l2在腫瘤上的表達與減少的存活結果相關。

免疫檢查點受體淋巴細胞激活基因3(lag-3)在無活動力t細胞和t-reg細胞上表達。lag-3參與向激活的效應t細胞傳遞抑制性信號的信號傳導途徑。lag-3也上調免疫抑制性treg細胞活性。

免疫檢查點受體t細胞膜蛋白3(tim-3)在th1和tc1細胞上表達，而不在其他t細胞上表達。tim-3與其配體半乳凝素-9的相互作用產生th1細胞死亡信號。已報道tim-3在維持t細胞耗竭中起作用，并且已顯示對tim-3的阻斷可恢復對耗竭的t細胞的活性。

免疫檢查點受體b淋巴細胞和t淋巴細胞衰減予(btla)受體在靜息和激活的b細胞和t細胞上表達。當與其配體hvem(皰疹病毒進入介導子)組合時，btla的激活導致t細胞激活和增殖均下調。hvem由某些腫瘤(例如，黑色素瘤)和與腫瘤相關的內皮細胞表達。

被稱為殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(kir)的免疫檢查點受體是在nk細胞和一些t細胞上表達的受體的多態性家族，并且作為與自然殺傷(nk)細胞相關的免疫耐受的調節劑起作用。用抑制劑化合物阻斷某些kir受體可以通過增加的nk細胞活性來促進腫瘤的破壞。

在本披露的一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物是有機小分子(分子量小于1000道爾頓)、肽、多肽、蛋白質、抗體、抗體片段或抗體衍生物。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物是抗體。在一些實施例中，該抗體是單克隆抗體，特別是人或人源化單克隆抗體。

用于阻斷免疫檢查點通路的單克隆抗體、抗體片段和抗體衍生物可以通過本領域普通技術人員已知的若干種方法中的任何一種進行制備，這些方法包括但不限于體細胞雜交技術和雜交瘤方法。雜交瘤產生描述于《抗體：實驗手冊》(antibodies，alaboratorymanual)，哈洛(harlow)和菜恩(lane)，1988年，紐約冷泉港出版社(coldspringharborpublications，newyork)?？梢酝ㄟ^在例如美國專利號5223409、5403484、5571698、6582915、和6593081中描述的方法通過篩選人免疫球蛋白基因的噬菌體展示文庫來鑒定和分離人單克隆抗體。單克隆抗體可以使用在美國專利號6331415(加比利(cabilly))中描述的一般方法進行制備。

作為實例，人單克隆抗體可以使用xenomouse^tm(安根尼克斯公司(abgenix)，弗里蒙特，加利福尼亞州(fremont，ca))或來自xenomouse的b細胞的雜交瘤進行制備。xenomouse是具有功能性人免疫球蛋白基因的鼠科動物宿主，如在美國專利號6162963(庫徹拉帕提(kucherlapati))中所述。

免疫檢查點抗體的制備和使用方法描述于以下說明性出版物中?？筩tla-4抗體的制備和治療性用途描述于美國專利號7229628(艾利森(allison))、7311910(林斯利(linsley))和8017144(科曼(korman))中。抗pd-1抗體的制備和治療性用途描述于美國專利號8008449(科曼(korman))和美國專利申請號2011/0271358(弗里曼(freeman))中?？筽d-l1抗體的制備和治療性用途描述于美國專利號7943743科曼(korman)中?？箃im-3抗體的制備和治療性用途描述于美國專利號8101176(kuchroo)和8552156(tagayanagi)中?？筶ag-3抗體的制備和治療性用途描述于美國專利申請號2011/0150892(thudium)和國際公開號wo2014/008218(lonberg)中?？筴ir抗體的制備和治療性用途描述于美國專利號8119775(莫雷塔(moretta))中。阻斷btla調節的抑制通路(抗btla抗體)的抗體的制備描述于美國專利號8563694(mataraza)中。

在本披露的一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物是ctla-4受體抑制劑、pd-1受體抑制劑、lag-3受體抑制劑、tim-3受體抑制劑、btla受體抑制劑、或kir受體抑制劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物是pd-l1的抑制劑或pd-l2的抑制劑。

在本披露的一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物是pd-l1/pd-1途徑或pd-l2/pd-1途徑的抑制劑。在一些實施例中，pd-l1/pd-1途徑的抑制劑是medi4736。

在本披露的一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物是抗ctla-4受體抗體、抗pd-1受體抗體、抗lag-3受體抗體、抗tim-3受體抗體、抗btla受體抗體、抗kir受體抗體、抗pd-l1抗體、或抗pd-l2抗體。

在本披露的一些實施例中，該方法包括給予具有化學式(i)的irm化合物和免疫檢查點抑制劑化合物。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和ctla-4受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和pd-1受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。

在本披露的一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和lag-3受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和tim-3受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和btla受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和kir受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和pd-l1受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和pd-l2受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。

在本披露的一些實施例中，該方法包括給予具有化學式(i)的irm化合物和免疫檢查點通路的阻斷抗體。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和抗ctla-4受體抗體來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和抗pd-1受體抗體來治療患有腫瘤的受試者。

在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和抗lag-3受體抗體來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和抗tim-3受體抗體來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和抗btla受體抗體來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和抗kir受體抗體來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和抗pd-l1抗體來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和抗pd-l2抗體來治療患有腫瘤的受試者。

在本披露的一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和ctla-4受體抑制劑化合物。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和pd-1受體抑制劑化合物。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和lag-3受體抑制劑化合物。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、tim-3受體抑制劑化合物。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和btla受體抑制劑化合物。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和kir受體抑制劑化合物。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和pd-l1抑制劑化合物。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和pd-l2抑制劑化合物。

在本披露的一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和免疫檢查點通路的阻斷抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和抗ctla-4受體抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和抗pd-1受體抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和抗lag-3受體抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、抗tim-3受體抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和抗btla受體抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和抗kir受體抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和抗pd-l1抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和抗pd-l2抗體。

在本披露的一些實施例中，抗ctla-4受體抗體是伊匹木單抗或曲美木單抗。在一些實施例中，抗pd-1受體抗體是蘭布羅利珠單抗(lambrolizumab)、pidilizumab、或納武單抗。在一些實施例中，抗kir受體抗體是lirilumab。

在本披露的一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和伊匹木單抗來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和曲美木單抗來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和蘭布羅利珠單抗(lambrolizumab)來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和pidilizumab來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和納武單抗來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物和lirilumab來治療患有腫瘤的受試者。

在本披露的一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和伊匹木單抗。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和曲美木單抗。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和蘭布羅利珠單抗(1ambrolizumab)。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和pidilizumab。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和納武單抗。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和lirilumab。

在本披露的一些實施例中，該方法包括給予具有化學式(i)的irm化合物和兩種不同的免疫檢查點抑制劑化合物。兩種不同的免疫抑制劑化合物可以選自ctla-4受體抑制劑、pd-1受體抑制劑、lag-3受體抑制劑、tim-3受體抑制劑、btla受體抑制劑、kir受體抑制劑、pd-l1抑制劑或pd-l2抑制劑。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物、ctla-4受體抑制劑化合物、和pd-1受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物、ctla-4受體抑制劑化合物、和pd-l1抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物、pd-1受體抑制劑化合物、和lag-3受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物、pd-1受體抑制劑化合物、和tim-3受體抑制劑化合物來治療患有腫瘤的受試者。

在本披露的一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物、抗ctla-4受體抗體、和抗pd-l1抗體來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物、抗pd-1受體抗體、和抗lag-3受體抗體來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物、抗pd-1受體抗體、和抗tim-3受體抗體來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物、抗pd-1受體抗體、和抗pd-l1抗體或抗pd-l2抗體來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物、伊匹木單抗和納武單抗來治療患有腫瘤的受試者。在一些實施例中，該方法包括通過給予治療有效量的具有化學式(i)的irm化合物、伊匹木單抗和蘭布羅利珠單抗(lambrolizumab)來治療患有腫瘤的受試者。

在一些實施例中，本披露的治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物和兩種不同的免疫檢查點抑制劑化合物。兩種不同的免疫檢查點抑制劑化合物可以選自ctla-4受體抑制劑、pd-1受體抑制劑、lag-3受體抑制劑、tim-3受體抑制劑、btla受體抑制劑、kir受體抑制劑、pd-l1抑制劑、或pd-l2抑制劑。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、ctla-4受體抑制劑化合物、和pd-1受體抑制劑化合物。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、ctla-4受體抑制劑化合物、和pd-l1抑制劑化合物。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、pd-1受體抑制劑化合物、和lag-3受體抑制劑化合物。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、pd-1受體抑制劑化合物、和tim-3受體抑制劑化合物。

在本披露的一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、抗ctla-4受體抗體、和抗pd-l1抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、抗ctla-4抗體、和抗pd-1抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、抗pd-1受體抗體、和抗lag-3受體抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、抗pd-1受體抗體、和抗tim-3受體抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、抗pd-1受體抗體、和抗pd-l1抗體或抗pd-l2抗體。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、伊匹木單抗和納武單抗。在一些實施例中，該治療組合包含具有化學式(i)的irm化合物、伊匹木單抗和蘭布羅利珠單抗(lambrolizumab)。

在一些實施例中，本披露提供了一種用于治療實體瘤癌癥的方法。在一些實施例中，本披露提供了一種用于治療乳腺癌、膀胱癌、頭頸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、結腸直腸癌、胃腸癌、胃食管癌、腎細胞癌、前列腺癌、肝癌、結腸癌、胰腺癌腫瘤、卵巢癌腫瘤、淋巴瘤、皮膚t細胞淋巴瘤或黑色素瘤。

在一些實施例中，本披露提供了一種用于治療實體瘤的方法。在一些實施例中，本披露提供了一種用于治療乳腺癌腫瘤、膀胱癌腫瘤、頭頸癌腫瘤、非小細胞肺癌腫瘤、小細胞肺癌腫瘤、結腸直腸癌腫瘤、胃腸道間質瘤、胃食管癌、腎細胞癌腫瘤、前列腺癌腫瘤、肝癌腫瘤、結腸癌腫瘤、胰腺癌腫瘤、卵巢癌腫瘤、淋巴瘤、皮膚t細胞淋巴瘤、或黑色素瘤。在一些實施例中，本披露提供了一種用于治療免疫抑制腫瘤的方法。免疫抑制腫瘤是包含免疫抑制相關的細胞(例如treg細胞、髓源性抑制細胞(mdsc)、m2巨噬細胞等)或免疫抑制因子(例如誘導型一氧化氮合成酶(inos)、pd-l1等)的腫瘤。

摻入本披露的特定方法或治療組合中的具有化學式(i)的irm化合物的精確量可以根據本領域已知的因素(例如受試者的身體和臨床狀態、給予的方法、配制品的含量、預期的給藥方案或順序)而變化。因此，明確提出構成針對所有可能的應用治療有效的irm化合物量的量是不切實際的。然而，本領域普通技術人員可以在適當考慮這些因素的情況下容易地確定適當的量。

在本披露的一些實施例中，該方法包括向受試者給予具有化學式(i)的irm化合物的可注射配制品，以基于該受試者的體重向該受試者提供劑量為從約1μg/kg至約5mg/kg的具有化學式(i)的irm化合物。

具有化學式(i)的irm化合物或任何免疫檢查點抑制劑化合物的劑量可以使用剛好在治療過程開始之前獲得的受試者的實際體重(或質量)來計算。在一些實施例中，可以使用受試者的體表面積來計算劑量。可以在治療過程開始之前使用dubois方法計算體表面積(m²)：m²＝(重量(kg)^0.425×高度(cm)^0.725)×0.007184。

在一些實施例中，腫瘤尺寸基于待注射的腫瘤的長軸的長度。在一些實施例中，待注射的腫瘤包括長軸，并且其中長軸范圍為從約1.5cm至約5cm。

可以使用腫瘤的成像程序(例如三維超聲成像、三維ct成像或三維mri成像)來確定腫瘤尺寸和體積。

本文所考慮的用于免疫檢查點抑制劑化合物的藥物配制品可以通過非腸胃外(通過消化道)或腸胃外(除了通過消化道以外的給予)給予，腸胃外給予是優選的實施例。

本文所考慮的用于給予免疫檢查點抑制劑化合物的藥物配制品包括但不限于溶液、懸浮液和乳液配制品。配制品的類型包括但不限于水性配制品(例如磷酸鹽或檸檬酸鹽緩沖鹽水)、油配制品、多元醇配制品(例如甘油、聚乙二醇)、水包油配制品和油包水配制品。藥物配制品可進一步包括一種或多種添加劑，例如助懸劑、著色劑、表面活性劑、張度劑和分散劑。

在本披露的一些實施例中，將免疫檢查點抑制劑化合物摻入藥學上可接受的配制品中。在一些實施例中，將免疫檢查點抑制劑化合物摻入藥學上可接受的水性配制品中?？山邮艿乃耘渲破返膶嵗ǖ葷B緩沖和ph4.5-8調節的鹽溶液，例如乳酸林格氏溶液等。

在本披露的一些實施例中，將免疫檢查點抑制劑化合物摻入藥學上可接受的脂質體配制品中，其中該配制品是被動或靶向的脂質體配制品。用于制備抗體的合適脂質體配制品的方法的實例描述于美國專利號5399331(羅貴爾(loughrey))、us8304565(吳(wu))和7780882(常(chang))中。

在本披露的一些實施例中，免疫檢查點抑制劑抗體是干燥的凍干固體，該凍干固體在使用前用水性復溶溶劑復水。

在本披露的一些實施例中，將免疫檢查點抑制劑抗體摻入藥學上可接受的配制品中，并且將該藥學上可接受的配制品直接注射到腫瘤中。在一些實施例中，將免疫檢查點抑制劑抗體摻入藥學上可接受的配制品中，并將該藥學上可接受的配制品注射到腫瘤周圍的腫瘤外周區域中。腫瘤外周區域可以含有抗腫瘤免疫細胞。

在本披露的一些實施例中，將免疫檢查點抑制劑抗體摻入藥學上可接受的配制品中，并且將該藥學上可接受的配制品通過靜脈注射或輸注給予。在一些實施例中，將免疫檢查點抑制劑抗體摻入藥學上可接受的配制品中，并且將該藥學上可接受的配制品通過皮下注射或皮內注射給予。

在一些實施例中，將免疫檢查點抑制劑抗體摻入藥學上可接受的配制品中，并且將該藥學上可接受的配制品通過腹膜內注射或灌洗給予。

摻入本披露的特定方法或治療組合中的免疫檢查點抑制劑化合物的精確量可以根據本領域已知的因素(例如受試者的身體和臨床狀態、給予方法、配制品的含量、免疫檢查點抑制劑化合物的物理和化學性質、預期給予方案或順序)而變化。因此，明確提出構成針對所有可能的應用治療有效的irm化合物量的量是不切實際的。然而，本領域普通技術人員可以在適當考慮這些因素的情況下容易地確定適當的量。

在本披露的一些實施例中，該方法包括向受試者給予免疫檢查點抑制劑抗體的可注射配制品，以向該受試者提供劑量為從約0.5mg至約25mg每kg受試者體重的免疫檢查點抑制劑抗體。在一些實施例中，該方法包括向受試者給予免疫檢查點抑制劑抗體的可注射配制品，以向該受試者提供劑量為從約0.5mg至約15mg每kg受試者體重的免疫檢查點抑制劑抗體。在一些實施例中，該方法包括向受試者給予免疫檢查點抑制劑抗體的可注射配制品，以向該受試者提供劑量為從約0.5mg至約10mg每kg受試者體重的免疫檢查點抑制劑抗體。

當給予多于一種免疫檢查點抑制劑化合物時，這些免疫檢查點抑制劑化合物可以單獨地以藥學上可接受的配制品給予或在同一種配制品中組合在一起給予。

具有化學式(i)的irm化合物和免疫檢查點抑制劑化合物可以是兩者在同一天給予或者這些劑量可以間隔若干天或若干周給予。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物在給予具有化學式(i)的irm化合物的1、2、3、4、5、6、或7天內給予。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物在給予具有化學式(i)的irm化合物的1-10天內給予。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物在給予具有化學式(i)的irm化合物的1-13周內、1-8周內、1-6周內、1-4周內或1-2周內給予。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑化合物在給予具有化學式(i)的irm化合物的4個月內、3個月內、2個月內、1個月內給予。為了清楚起見，術語“在……內”包括在給予具有化學式(i)的irm化合物之前、之后或同一天的時間段。例如，在1-2周內給予包括在給予具有化學式(i)的irm化合物之前1-2周、在給予具有化學式(i)的irm化合物之后1-2周、以及在給予具有化學式(i)的irm化合物的同一天。

治療有效量是減輕腫瘤的至少一種癥狀或臨床體征的量。減輕腫瘤的至少一種癥狀或臨床體征可以包括腫瘤尺寸的減小、腫瘤尺寸或生長的穩定、腫瘤生長速率的降低、腫瘤壞死的增加、腫瘤結構的變化(例如崩解)、與腫瘤建立減少相關的生化標志物的變化、腫瘤進展的減少或腫瘤存活的減少。

包括腫瘤細胞的細胞群體的至少一種細胞介導的免疫應答的增加是指與腫瘤微環境的免疫學特征的改善相關的至少一種生物化學、組織學或免疫學標志物的增加。其中標志物的量的增加與腫瘤微環境的免疫學特征的改善相關的標志物包括但不限于干擾素-α；干擾素-γ；干擾素誘導蛋白；tnf-α；趨化因子(如ccl2、ccl3、ccl4、cxcl2)；激活的t細胞；激活的b細胞；激活的nk細胞；腫瘤特異性t細胞、激活的與腫瘤相關的巨噬細胞；趨化因子受體(如ccr6)；或與腫瘤相關的淋巴聚集體。

可以例如通過分析來自腫瘤、局部腫瘤區域或腫瘤引流淋巴結的活組織檢查(例如針吸活組織檢查)來確定與腫瘤微環境相關的標志物?？梢允褂脴藴始夹g例如通過組織學(hne染色)、流式細胞術、基因表達試驗(定量pcr)、免疫化學技術、以及本領域普通技術人員通常已知的其他技術來進行標志物的分析。

將具有化學式(i)的化合物或免疫檢查點抑制劑化合物直接注射到腫瘤中涉及將配制品直接注射到腫瘤塊的內部。通常使用18至26規格的注射器針頭，并且為了更精確地遞送配制品，可以使用醫學成像技術(例如超聲波)用于遞送引導來實現針頭的插入。在一些實施例中，將注射器針頭插入腫瘤塊中，這樣使得位于注射器針尖處的整個流體通道開口位于腫瘤塊的內部。一旦針尖處于腫瘤塊中的期望位置，可以將配制品注射到腫瘤中。

本披露提供了包括具有化學式(i)的irm化合物和免疫檢查點抑制劑化合物的治療組合。本發明的治療組合還包括具有化學式(i)的irm化合物與一種或多種免疫檢查點抑制劑化合物的組合。治療組合可以是單一藥物配制品的一部分，其中具有化學式(i)的irm化合物和免疫檢查點抑制劑化合物在該單一配制品中一起被給予。在本披露的一個優選實施例中，將具有化學式(i)的irm化合物和免疫檢查點抑制劑化合物的治療性組合物摻入單獨的藥物配制品中，并且因此單獨給予，例如在不同的時間以及通過不同的給藥途徑進行給予。

在本披露的一些實施例中，將irm化合物(i)的配制品和免疫檢查點抑制劑化合物的配制品都注射到同一腫瘤中或注射到緊鄰腫瘤外緣的區域中。

除非另有指示，對化合物的提及可以包括任何藥學上可接受的形式的化合物，其包括任何異構體(例如非對映異構體或對映異構體)、鹽、溶劑化物、多晶型物等。特別地，如果化合物是光學活性的，則對該化合物的提及可以包括每種對映異構體連同這些對映異構體的外消旋混合物。

本披露的藥物配制品可以進一步包括一種或多種添加劑，該添加劑包括但不限于抗氧化劑、抗微生物劑、佐劑、增稠劑、助懸劑、表面活性劑和分散劑。在一些實施例中，該配制品可以包括添加的抗氧化劑，例如丁羥茴醚(bha)或丁羥甲苯(bht)。該配制品中添加的抗氧化劑濃度可以為至少10ppm、50ppm、100ppm、200ppm、以及高達300ppm。

能以任何合適的方式評價特定化合物的tlr激動作用。例如，用于檢測tlr激動作用的合適測定法描述于美國專利公開號us2004/0132079中，并且適合用于這類測定法的重組細胞系描述于例如國際專利公開號wo04/053057中。

本披露還提供了一種用于治療腫瘤的試劑盒。該試劑盒可以包含至少一種檢查點抑制劑化合物；n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺，或其藥學上可接受的鹽；和一組使用說明書。

在該試劑盒的一些實施例中，將n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺或其藥學上可接受的鹽儲存在與該至少一種免疫檢查點抑制劑化合物不同的容器中。

在該試劑盒的一些實施例中，該至少一種免疫檢查點抑制劑化合物是ctla-4受體抑制劑、pd-1受體抑制劑、pd-l1抑制劑或pd-l2抑制劑、lag-3受體抑制劑、tim-3受體抑制劑、btla受體抑制劑、kir受體抑制劑、或任何前述免疫檢查點抑制劑化合物的組合。

在該試劑盒的一些實施例中，該免疫檢查點抑制劑化合物是抗體或抗體片段。

在該試劑盒的一些實施例中，該至少一種免疫檢查點抑制劑化合物是抗ctla-4受體抗體、抗pd-1受體抗體、抗lag-3受體抗體、抗tim-3受體抗體、抗btla受體抗體、抗kir受體抗體、抗pd-l1抗體、或抗pd-l2抗體、或任何前述抗體的組合。

在該試劑盒的一些實施例中，該至少一種免疫檢查點抑制劑化合物呈凍干固體的形式。

在一些實施例中，該試劑盒進一步包含水性復溶溶劑。

在該試劑盒的一些實施例中，將該至少一種免疫檢查點抑制劑化合物摻入第一藥學上可接受的配制品中，并將n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺摻入第二藥學上可接受的配制品中。

在該試劑盒的一些實施例中，將n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺摻入包含芝麻油和乙醇的配制品中。

本披露的方法、組合和試劑盒的某些實施例在以下實施例列表中陳述。

實施例

實施例1是一種用于治療患有腫瘤的受試者的方法，該方法包括向該受試者給予治療有效量的第一免疫檢查點抑制劑化合物；以及向該受試者給予治療有效量的irm化合物；其中該irm化合物是n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺，或其藥學上可接受的鹽。

實施例2是一種用于治療腫瘤的治療組合，該治療組合包含：

治療有效量的第一免疫檢查點抑制劑化合物；以及治療有效量的irm化合物，其中該irm化合物是n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺，或其藥學上可接受的鹽。

實施例3是如實施例1所述的方法或如實施例2所述的治療組合，其中將該第一免疫檢查點抑制劑化合物摻入第一藥學上可接受的配制品中。

實施例4是如實施例3所述的方法或治療組合，其中該第一藥學上可接受的配制品是水性配制品。

實施例5是如實施例3或4所述的方法，其中將該第一藥學上可接受的配制品直接注射到腫瘤中。

實施例6是如實施例3或4所述的方法，其中將該第一藥學上可接受的配制品通過靜脈內輸注給予。

實施例7是如實施例1和3-6中任一項所述的方法或實施例2-4中任一項所述的治療組合，其中將該irm化合物摻入第二藥學上可接受的配制品中。

實施例8是如實施例7所述的方法或治療組合，其中該第二藥學上可接受的配制品包含芝麻油和乙醇。

實施例9是如實施例8所述的方法或治療組合，其中該乙醇以從1wt-％至9wt-％的量存在于該第二藥學上可接受的配制品中。

實施例10是如實施例9所述的方法或治療組合，其中該乙醇以從7wt-％至8wt-％的量存在于該第二藥學上可接受的配制品中。

實施例11是如實施例7所述的方法或如實施例7所述的治療組合，其中將該irm化合物摻入脂質體配制品中。

實施例12是如實施例7-11中任一項所述的方法或治療組合，其中將該第二藥學上可接受的配制品直接注射到腫瘤中。

實施例13是如實施例1和3-12中任一項所述的方法或如實施例2-4和7-11中任一項所述的治療組合，其中該免疫檢查點抑制劑化合物是ctla-4受體抑制劑、pd-1受體抑制劑、pd-l1抑制劑、pd-l2抑制劑、lag-3受體抑制劑、tim-3受體抑制劑、btla受體抑制劑或kir受體抑制劑。

實施例14是如實施例1和3-13中任一項所述的方法或如實施例2-4、7-11和13中任一項所述的治療組合，其中該免疫檢查點抑制劑化合物是抗體或抗體片段。

實施例15是如實施例14所述的方法或治療組合，其中該免疫檢查點抑制劑化合物是抗ctla-4受體抗體、抗pd-1受體抗體、抗pd-l1抗體或抗pd-l2抗體。

實施例16是如實施例1和3-15中任一項所述的方法，其中該腫瘤是乳腺癌腫瘤、膀胱癌腫瘤、頭頸癌腫瘤、非小細胞肺癌腫瘤、小細胞肺癌腫瘤、結腸直腸癌腫瘤、胃腸道間質瘤、胃食管癌、腎細胞癌腫瘤、前列腺癌腫瘤、肝癌腫瘤、結腸癌腫瘤、胰腺癌腫瘤、卵巢癌腫瘤、淋巴瘤、或皮膚t細胞淋巴瘤、或黑色素瘤。

實施例17是如實施例3-16中任一項所述的方法或實施例3-4、7-11和13中任一項所述的治療組合，進一步包含第二免疫檢查點抑制劑化合物。

實施例18是如實施例17所述的方法或治療組合，其中將該第二免疫檢查點抑制劑化合物摻入第三藥學上可接受的配制品中。

實施例19是如實施例18所述的方法或治療組合，其中該第三藥學上可接受的配制品是水性配制品。

實施例20是如實施例18所述的方法，其中將該第三藥學上可接受的配制品直接注射到腫瘤中。

實施例21是如實施例18所述的方法，其中將該第三藥學上可接受的配制品通過靜脈內輸注給予。

實施例22是如實施例17所述的方法或治療組合，其中該第一和第二免疫檢查點抑制劑兩者都摻入該第一藥學上可接受的配制品中。

實施例23是一種用于治療腫瘤的試劑盒，該試劑盒包括至少一種免疫檢查點抑制劑化合物；irm化合物；

其中該irm化合物是n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺，或其藥學上可接受的鹽；

以及一組使用說明書。

實施例24是如實施例23所述的試劑盒，其中該至少一種免疫檢查點抑制劑化合物是ctla-4受體抑制劑、pd-1受體抑制劑、pd-l1抑制劑、pd-l2抑制劑、lag-3受體抑制劑、tim-3受體抑制劑、btla受體抑制劑、kir受體抑制劑、或任何前述免疫檢查點抑制劑化合物的組合。

實施例25是如實施例23所述的試劑盒，其中該免疫檢查點抑制劑化合物是抗體或抗體片段。

實施例26是如實施例24所述的試劑盒，其中該至少一種免疫檢查點抑制劑化合物是抗ctla-4受體抗體、抗pd-1受體抗體、抗pd-l1抗體、抗pd-l2抗體、或任何前述抗體的組合。

實施例27是如實施例22-25中任一項所述的試劑盒，其中該至少一種免疫檢查點抑制劑化合物呈凍干固體的形式。

實施例28是如實施例22-26中任一項所述的試劑盒，該試劑盒進一步包含水性復溶溶劑。

實施例29是如實施例22-27中任一項所述的試劑盒，其中將該至少一種免疫檢查點抑制劑化合物摻入第一藥學上可接受的配制品中，并且將n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺摻入第二藥學上可接受的配制品中。

實施例30是如實施例22-28中任一項所述的試劑盒，其中將n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺摻入包含芝麻油和乙醇的配制品中。

本披露的目的和優點通過以下實例進一步進行闡明，但是在這些實例中引述的具體材料及其量連同其他條件和細節不應被解釋為不適當地限制本發明的披露內容。

本文引用的專利、專利文獻和出版物的完整披露內容通過引用以其全部內容而并入，就如同各自單獨并入一樣。在本申請的披露內容和通過引用并入本文的任何文獻的披露內容之間存在任何不一致的情況下，應以本申請的披露內容為準。在不背離本發明的精神和范圍的情況下，本發明的各種修改和改變對于本領域技術人員將變得顯而易見。應當理解的是，本發明并不旨在由本文陳述的說明性實施例和實例不當地限制，并且這些實例和實施例僅通過舉例的方式呈現，本發明的范圍旨在僅由本文陳述的權利要求書限定。

實例

材料

c57bl/6小鼠獲自美國健康和人類服務部的國家癌癥研究所(nationalcancerinstituteoftheunitedstatesdepartmentofhealthandhumanservices)(貝塞斯達，馬里蘭州)。所有小鼠為6-12周齡。

將b16.f10黑色素瘤細胞系在補充有10％熱滅活的fbs、l-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、非必需氨基酸和青霉素-鏈霉素的rpmi-1640中培養。

針對pd-l1(10f.9g20)、ctla-4(9h10)的小鼠特異性抗體和各自的同種型對照、大鼠igg2b(ltf-2)和倉鼠igg(be0091)獲自bio-x-cell(西黎巴嫩，新罕布什爾)。將所有抗體配制在ph7的pbs中。

n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺如美國專利申請號2013/0230578中所述制備，并被配制為在芝麻油/5wt-％乙醇中的溶液。將配制品通過聚醚砜0.2μm過濾器(密理博公司，比爾里卡，馬薩諸塞州(millipore，billerica，ma))過濾。所用的配制品中的藥物含量為0.5mg/ml，如通過hplc確定的。將不含n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺作為組分的過濾的芝麻油/5wt-％乙醇配制品充當實例1-3的媒介物對照。

統計

所有結果均表示為平均值+/-sem。組大小為n＝5，除非另有說明。使用圖板棱柱4(graphpadprism4)軟件(圖板軟件有限公司，拉霍亞，加利福尼亞州(graphpadsoftwareinc.，lajolla，ca))進行統計分析。使用不配對雙尾t檢驗分析數據，并且在p小于0.05時認為差異顯著。圖1-5表示p小于0.05記作“*”、p小于0.005記作“**”、p小于0.005記作“***”的統計顯著性。存活實驗利用對數秩曼特爾-考克斯(mantel-cox)試驗進行存活分析。

實例1

將黑色素瘤細胞系b16.f10經皮下注射在c57bl/6小鼠的左側翼。每只小鼠注射3×10⁵個細胞。腫瘤移植后7天，通過外部檢查可觀察到腫瘤，并且使用外部數字卡尺測定每只小鼠的腫瘤尺寸。腫瘤尺寸(mm²)表示為垂直直徑卡尺測量的乘積。然后將小鼠隨機分成四個治療組，每組五只小鼠(a-d組)。

從腫瘤移植后第7天開始，每組中的小鼠用單獨的方案給藥。a組中的小鼠接受70μl芝麻油/乙醇媒介物對照的注射和200μg抗ctla-4抗體的腹膜內注射；兩者在第7天和第11天給予，其后每隔4天給予重復的200μg抗ctla-4抗體的腹膜內注射。b組中的小鼠接受n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(35μg)的瘤內注射和200μg抗ctla-4抗體的腹膜內注射，兩者在第7天和第11天給藥，其后每隔4天給予重復的200μg抗ctla-4抗體的腹膜內注射。c組中的小鼠作為對照組，并接受70μl芝麻油/乙醇媒介物對照的注射和200μg同種型對照igg的腹膜內注射；兩者在第7天和第11天給藥，其后每隔4天給予重復的200μgigg的腹膜內注射。d組中的小鼠接受n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(35μg)的瘤內注射和200μg同種型對照igg的腹膜內注射；兩者在第7天和第11天給藥，其后每隔4天給予重復的200μgigg的腹膜內注射。在治療期間觀察小鼠，并且對于每只小鼠以規律的間隔測量移植部位處的腫瘤尺寸。在研究中繼續在移植部位處測量的腫瘤尺寸小于200mm²并且沒有皮膚潰瘍跡象的活小鼠繼續研究直到下一個測量時間點。在移植部位處測量的腫瘤大于200mm²或具有皮膚潰瘍跡象的小鼠在腫瘤測量日處死，并記錄為非存活者。將每個時間點的存活數據確定為在移植部位具有小于200mm²的腫瘤的活小鼠的數目。在圖1中，將每組的移植部位的平均腫瘤尺寸(+/-sem)相對于時間(給藥開始后的天數)作圖。在圖2中，將每組中存活的小鼠的百分比相對于時間(給藥開始后的天數)作圖。

實例2

將黑色素瘤細胞系b16.f10經皮下注射在c57bl/6小鼠的左側翼。每只小鼠注射3×10⁵個細胞。腫瘤移植后7天，通過外部檢查可觀察到腫瘤，并且使用外部數字卡尺測定每只小鼠的腫瘤尺寸。腫瘤尺寸(mm²)表示為垂直直徑卡尺測量的乘積。然后將小鼠隨機分成四個治療組，每組五只小鼠(e-h組)。

從腫瘤移植后第7天開始，每組中的小鼠用單獨的方案給藥。e組中的小鼠接受70μl芝麻油/乙醇媒介物對照的注射和200μg抗pd-l1抗體的腹膜內注射；兩者在第7天和第11天給予，其后每隔4天給予重復的200μg抗pd-l1抗體的腹膜內注射。f組中的小鼠接受n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(35μg)的瘤內注射和200μg抗pd-l1抗體的腹膜內注射，兩者在第7天和第11天給藥，其后每隔4天給予重復的200μg抗pd-l1抗體的腹膜內注射。g組中的小鼠作為對照組，并接受70μl芝麻油/乙醇媒介物對照的注射和200μg同種型對照igg的腹膜內注射；兩者在第7天和第11天給藥，其后每隔4天給予重復的200μgigg的腹膜內注射。h組中的小鼠接受n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(35μg)的瘤內注射和200μg同種型對照igg的腹膜內注射；兩者在第7天和第11天給藥，其后每隔4天給予重復的200μgigg的腹膜內注射。在治療期間觀察小鼠，并且對于每只小鼠以規律的間隔測量移植部位處的腫瘤尺寸。在研究中繼續在移植部位處測量的腫瘤尺寸小于200mm²并且沒有皮膚潰瘍跡象的活小鼠繼續研究直到下一個測量時間點。在移植部位處測量的腫瘤大于或等于200mm²或具有皮膚潰瘍跡象的小鼠在腫瘤測量日處死，并記錄為非存活者。將每個時間點的存活數據確定為在移植部位具有小于200mm²的腫瘤的活小鼠的數目。在圖3中，將每組的移植部位的平均腫瘤尺寸(+/-sem)相對于時間(給藥開始后的天數)作圖。在圖4中，將每組中存活的小鼠的百分比相對于時間(給藥開始后的天數)作圖。

實例3

將黑色素瘤細胞系b16.f10經皮下注射在c57bl/6小鼠的左側翼和右側翼。最初每只小鼠在左側翼中注射3×10⁵個細胞。在左側翼中初次注射細胞后4天，將每只小鼠在右側翼注射3×10⁵個細胞。腫瘤移植后7天，通過外部檢查可觀察到腫瘤，并且使用外部數字卡尺測定每只小鼠的腫瘤尺寸。腫瘤尺寸(mm²)表示為垂直直徑卡尺測量的乘積。然后將小鼠隨機分成四個治療組，每組五只小鼠(i-l組)。

從腫瘤移植后第7天開始，每組中的小鼠用單獨的方案給藥。i組中的所有小鼠接受70μl芝麻油/乙醇媒介物對照的注射(注射在左側翼腫瘤塊中)、100μg抗pd-l1抗體的腹膜內注射和100μg抗ctla-4抗體的腹膜內注射，所有三種組分在第7天和第11天給藥。另外，組i中的所有小鼠在其后每4天給予100μg抗pd-l1抗體的腹膜內注射和100μg抗ctla-4抗體的腹膜內注射。j組中的小鼠接受n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(35μg)的瘤內注射(注射在左側翼腫瘤塊中)、100μg抗pd-l1抗體的腹膜內注射、100μg抗ctla-4抗體的腹膜內注射，所有三種組分在第7天和第11天給藥。另外，在組j中的所有小鼠在其后每隔4天給予100μg抗pd-l1抗體的腹膜內注射和100μg抗ctla-4抗體的腹膜內注射。k組中的小鼠作為對照組，并接受70μl芝麻油/乙醇媒介物對照的注射(注射在左側翼腫瘤塊中)和200μg同種型對照igg的腹膜內注射；兩者在第7天和第11天給藥，其后每隔4天腹膜內注射重復的200μgigg。l組中的小鼠接受n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(35μg)的瘤內注射(注射在左側翼腫瘤塊中)和200μg同種型對照igg的腹膜內注射；兩者在第7天和第11天給藥，其后每隔4天腹膜內注射重復的200μgigg。為了清楚起見，在所有組中，僅向左側翼腫瘤塊注射n-(4-{[4-氨基-2-丁基-1h-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺或芝麻油/乙醇媒介物(即右側翼腫瘤塊從未注射irm或媒介物)。在治療期間觀察小鼠，并且對于每只小鼠以規律的間隔測量移植部位處的腫瘤尺寸。在研究中繼續在移植部位處測量的腫瘤尺寸小于200mm²并且沒有皮膚潰瘍跡象的活小鼠繼續研究直到下一個測量時間點。在腫瘤測量日處死具有在移植部位之一測量的大于或等于200mm²的腫瘤或具有皮膚潰瘍跡象的腫瘤的小鼠，并記錄為非存活者。將每個時間點的存活數據確定為在移植部位具有小于200mm²的腫瘤的活小鼠的數目。在圖5中，將右側翼(即，與注射部位相反的腫瘤塊)上的腫瘤塊的平均腫瘤尺寸(+/-sem)相對于時間(給藥開始后的天數)作圖。與其他組相比，觀察到組j中的腫瘤生長有統計學上顯著的減少。