本發(fā)明涉及免疫血清制備方法，具體涉及一種治療豬支原體肺炎的血清制備方法。
背景技術(shù)：
：豬支原體肺炎，又稱豬氣喘病、豬地方流行性肺炎、豬霉形體肺炎，豬是由豬肺炎支原體引起豬的一種慢性呼吸道傳染病，主要癥狀為咳嗽和氣喘，病變的特征是融合性支氣管肺炎。本病廣泛分布于世界各地，在我國(guó)許多地區(qū)的豬場(chǎng)都有發(fā)生，由于帶菌病豬的存在和分布面較廣，除直接發(fā)生死亡外，病豬生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，生長(zhǎng)率降低15％左右，飼料利用率降低20％，造成飼料和人力的浪費(fèi)，有的成為僵豬或繼發(fā)感染死亡，所造成的經(jīng)濟(jì)損失很大，是危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要疫病之一。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種治療豬支原體肺炎的血清制備方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案為，一種治療豬支原體肺炎的血清制備方法，包括以下步驟：（1）從豬場(chǎng)選取健康、非免疫15日齡仔豬，飼養(yǎng)于消毒后的飼養(yǎng)室中，飼養(yǎng)期間，每天灌喂水葫蘆根酶解提取物，灌喂量為20mg/kg，連續(xù)灌喂15天；（2）仔豬長(zhǎng)至35日齡時(shí)，通過氣管接種30mL豬肺炎支原體232毒株，劑量為每頭豬每毫升105變色單位；（3）接種后持續(xù)觀察15天，淘汰病豬，保留未發(fā)病的豬只，每天灌喂水葫蘆根酶解提取物，灌喂量為50mg/kg，連續(xù)灌喂15天；（4）仔豬長(zhǎng)至70日齡時(shí)，通過氣管接種90mL豬肺炎支原體232毒株，劑量為每頭豬每毫升105變色單位；（5）接種后持續(xù)觀察15天，淘汰病豬，保留未發(fā)病的豬只，對(duì)未發(fā)病豬只剖殺放血，分離血清，經(jīng)無菌檢測(cè)及生物學(xué)安全檢測(cè)后，按3-5ml/每支分裝入容器中，4℃保存。其中，飼養(yǎng)期間，每隔1天對(duì)飼養(yǎng)室消毒一次。其中，所述水葫蘆根酶解提取物制作方法為，將粉碎的水葫蘆根浸泡在加有纖維素酶、木聚糖酶的55%乙醇中，在42-45℃、pH值等于6的條件下進(jìn)行酶解提取，所述酶解提取時(shí)間為8-10小時(shí)；55%乙醇用量為水葫蘆根重量的8-10倍；纖維素酶的用量為3-5mg/g水葫蘆根；木聚糖酶的用量為1-1.2mg/g水葫蘆根。在確診豬感染呼吸道疾病后，對(duì)病豬腹腔注射5ml/頭本發(fā)明所得到的治療豬呼吸道疾病的血清，具有顯著的治療效果，在仔豬斷奶前一周腹腔注射3ml/頭，有顯著的預(yù)防效果。本發(fā)明在仔豬生長(zhǎng)期間通過向仔豬灌喂水葫蘆根酶解物，能有效提高仔豬抗豬肺炎支原體感染的能力，仔豬經(jīng)2次攻毒后，血清內(nèi)抗豬肺炎支原體抗體含量極高。附圖說明圖1為本發(fā)明對(duì)照試驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組豬只ELISA抗體動(dòng)態(tài)變化圖。具體實(shí)施方式實(shí)施例1、從豬場(chǎng)選取健康、非免疫15日齡仔豬50頭，飼養(yǎng)于消毒后的飼養(yǎng)室中，飼喂常規(guī)配制得到的全價(jià)日糧，全價(jià)日糧中不摻加任何抗病毒或抗生素類成分，飼養(yǎng)期間，每天灌喂水葫蘆根酶解提取物，灌喂量為20mg/kg，連續(xù)灌喂15天，停止灌喂；仔豬長(zhǎng)至35日齡時(shí)，通過氣管接種30mL豬肺炎支原體232毒株，劑量為每頭豬每毫升105變色單位；接種后持續(xù)觀察15天，僅有一只豬出現(xiàn)感染癥狀，表現(xiàn)為咳嗽、氣喘，淘汰病豬，保留剩余未發(fā)病的豬只49頭，每天灌喂水葫蘆根酶解提取物，灌喂量為50mg/kg，連續(xù)灌喂15天，停止灌喂；仔豬長(zhǎng)至70日齡時(shí)，通過氣管接種90mL豬肺炎支原體232毒株，劑量為每頭豬每毫升105變色單位；接種后持續(xù)觀察15天，未見有豬只發(fā)病，保留未發(fā)病的49頭豬只，隨機(jī)從未發(fā)病豬只中挑選5頭剖殺放血，分離血清，經(jīng)無菌檢測(cè)及生物學(xué)安全檢測(cè)后，按3-5ml/每支分裝入容器中，4℃保存，得到治療豬支原體肺炎的血清。其中，飼養(yǎng)期間，每隔1天對(duì)飼養(yǎng)室消毒一次。其中，所述水葫蘆根酶解提取物制作方法為，將粉碎的水葫蘆根浸泡在加有纖維素酶、木聚糖酶的55%乙醇中，在44℃、pH值等于6的條件下進(jìn)行酶解提取，所述酶解提取時(shí)間為9小時(shí)；55%乙醇用量為水葫蘆根重量的9倍；纖維素酶的用量為4mg/g水葫蘆根；木聚糖酶的用量為1.1mg/g水葫蘆根。將上述得到的治療豬支原體肺炎的血清用于預(yù)防和治療豬支原體肺炎。治療試驗(yàn)：2015年7月30日，長(zhǎng)豐縣水家湖某豬場(chǎng)購進(jìn)仔豬500頭，均重16.22kg，隨機(jī)將仔豬等分為A、B兩組并人工標(biāo)記，對(duì)A組豬只腹腔注射3ml/頭由實(shí)施例1得到的治療豬支原體肺炎的血清后，將A、B兩組豬混合飼養(yǎng)；飼養(yǎng)期間B組豬只中有35頭仔豬于9月12號(hào)開始發(fā)病，至9月18日確診有豬支原體感染，將確診病豬隔離治療，治療期間仍按之前相同飼養(yǎng)方法飼喂，對(duì)病豬腹腔注射5ml/頭由實(shí)施例1得到的治療豬支原體肺炎的血清，每天注射一次，連續(xù)注射3天，隔離治療期間，每天早、中、晚仔細(xì)觀察豬只的臨床癥狀，根據(jù)治療效果分為有效和無效，注射3天后，已出現(xiàn)臨床癥狀的豬，癥狀完全消失或在停藥后15天內(nèi)沒有新的病豬出現(xiàn)，判定為有效，用藥6天，原來出現(xiàn)臨床癥狀的豬仍有明顯臨床癥狀或死亡，停藥15天后又復(fù)發(fā)判定為無效。試驗(yàn)結(jié)果：組別有效率（%）A100%飼養(yǎng)期間，A組豬只未見有豬支原體感染病豬出現(xiàn)。以下結(jié)合具體對(duì)照試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明：其中，實(shí)驗(yàn)組從豬場(chǎng)選取健康、非免疫15日齡仔豬100頭，飼養(yǎng)于消毒后的飼養(yǎng)室中，飼喂常規(guī)配制得到的全價(jià)日糧，全價(jià)日糧中不摻加任何抗病毒或抗生素類成分，飼養(yǎng)期間，每天灌喂水葫蘆根酶解提取物，灌喂量為20mg/kg，連續(xù)灌喂15天，停止灌喂；仔豬長(zhǎng)至35日齡時(shí)，通過氣管接種30mL豬肺炎支原體232毒株，劑量為每頭豬每毫升105變色單位；接種后持續(xù)觀察15天，僅有2只豬出現(xiàn)感染癥狀，表現(xiàn)為咳嗽、氣喘，淘汰病豬，保留剩余未發(fā)病的豬只98頭，每天灌喂水葫蘆根酶解提取物，灌喂量為50mg/kg，連續(xù)灌喂15天，停止灌喂；仔豬長(zhǎng)至70日齡時(shí)，通過氣管接種90mL豬肺炎支原體232毒株，劑量為每頭豬每毫升105變色單位；接種后持續(xù)觀察15天，未見有豬只發(fā)病，保留未發(fā)病的98頭豬只。其中，飼養(yǎng)期間，每隔1天對(duì)飼養(yǎng)室消毒一次。其中，所述水葫蘆根酶解提取物制作方法為，將粉碎的水葫蘆根浸泡在加有纖維素酶、木聚糖酶的55%乙醇中，在44℃、pH值等于6的條件下進(jìn)行酶解提取，所述酶解提取時(shí)間為9小時(shí)；55%乙醇用量為水葫蘆根重量的9倍；纖維素酶的用量為4mg/g水葫蘆根；木聚糖酶的用量為1.1mg/g水葫蘆根。對(duì)照組從豬場(chǎng)選取健康、非免疫15日齡仔豬100頭，飼養(yǎng)于消毒后的飼養(yǎng)室中，飼喂常規(guī)配制得到的全價(jià)日糧，全價(jià)日糧中不摻加任何抗病毒或抗生素類成分，；仔豬長(zhǎng)至35日齡時(shí)，通過氣管接種30mL豬肺炎支原體232毒株，劑量為每頭豬每毫升105變色單位；接種后持續(xù)觀察15天，有82只豬出現(xiàn)感染癥狀，表現(xiàn)為咳嗽、氣喘，淘汰病豬，保留剩余未發(fā)病的豬只18頭，檢測(cè)未發(fā)病豬只體內(nèi)抗體水平；剩余18頭仔豬長(zhǎng)至70日齡時(shí)，通過氣管接種90mL豬肺炎支原體232毒株，劑量為每頭豬每毫升105變色單位；接種后持續(xù)觀察15天，有15頭豬只發(fā)病，保留未發(fā)病的3頭豬只。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組試驗(yàn)期間，分別于第15天、30天、35天、50天、65天、70天、85天對(duì)未淘汰豬只采血，用間接ELISA測(cè)定豬肺炎支原體抗體；結(jié)果見圖1。當(dāng)前第1頁1 2 3