本發(fā)明涉及重組人成纖維細(xì)胞生長因子-21的新用途，特別涉及重組人成纖維細(xì)胞生長因子-21在預(yù)防和治療缺血性心律失常中的應(yīng)用。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

全球每年有1700萬人死于心血管疾病，其中一半以上死于心肌梗死。我國每年死于心肌梗死及其并發(fā)癥的人數(shù)已超過100萬。隨著溶栓和冠脈介入治療技術(shù)的發(fā)展，顯著提高了急性心肌梗死(AMI)患者的生存率，但心肌梗死急性發(fā)作后仍然存在較高的室性心律失常發(fā)生率，并已成為心肌梗死后患者死亡的主要原因。心肌電重構(gòu)是心肌梗死后發(fā)生惡性室性心律失常的關(guān)鍵。心梗后心肌細(xì)胞膜表面離子(鈉、鈣、鉀等)通道表達(dá)和功能失衡引起了心肌電重構(gòu)。此外，心肌纖維化是心肌梗死的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，隨著心肌纖維化程度加深，進(jìn)一步誘發(fā)周圍心肌細(xì)胞發(fā)生電重構(gòu)。因此，如何預(yù)防或逆轉(zhuǎn)心肌梗死后發(fā)生心臟電生理重構(gòu)已成為當(dāng)前臨床心律失常治療中亟待解決的難點(diǎn)問題。傳統(tǒng)抗心律失常藥物在臨床治療中仍存在許多不足之處：(1)一種抗心律失常藥物只選擇性激動(dòng)或阻斷某一特定類型離子通道，影響心肌動(dòng)作電位時(shí)程及有效不應(yīng)期，從而發(fā)揮其抗心律失常作用，但其作用機(jī)制并不能有效改善心臟電重構(gòu)所引起的離子通道功能失衡這一病理生理學(xué)基礎(chǔ)，因此仍處于對癥治療階段；(2)傳統(tǒng)的四類抗心律失常藥長期或過量應(yīng)用均可發(fā)生致心律失常副作用，因此長期應(yīng)用的安全性均較差。

重組人成纖維細(xì)胞生長因子(Recombinant Human fibroblast growth factor，rhbFGF)參與機(jī)體多種系統(tǒng)和器官的病理生理過程。近年來，越來越多的成纖維細(xì)胞生長因子(FGFs)作為人類疾病的生物標(biāo)志物、最佳藥靶及治療藥物被發(fā)現(xiàn)，但在心臟疾病的預(yù)防和治療領(lǐng)域中卻仍存在空白。目前已有研究證實(shí)，F(xiàn)GF家族成員FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF9、FGF16、FGF21及FGF23分別在心臟疾病中，如心肌缺血、心肌梗死、心衰、心肌肥厚、心肌纖維化、房顫及心肌氧化應(yīng)激性損傷等，通過調(diào)控不同的信號通路參與其病理生理過程。其中，F(xiàn)GF21在心衰、心肌肥厚、心肌氧化應(yīng)激損傷、心肌缺血及糖尿病心臟病動(dòng)物模型中，具有抑制心肌細(xì)胞凋亡、抗缺血損傷等方面的心臟保護(hù)作用，但目前尚未有研究發(fā)現(xiàn)FGF21在心律失常發(fā)生過程中的作用。因此，本發(fā)明通過在體動(dòng)物模型及離體細(xì)胞水平研究，發(fā)現(xiàn)重組人成纖維細(xì)胞生長因子21(Recombinant Human fibroblast growth factor21，rhbFGF21)能夠有效地抑制心梗后心律失常的發(fā)生。通過形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)等技術(shù)證實(shí)其作用機(jī)制為：rhbFGF21能夠靶向性調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞鈉(Nav1.5)，鉀(Kir2.1、Kv4.3)及鈣(CaV1.2)離子通道m(xù)RNA及蛋白表達(dá)水平。rhbFGF21能夠顯著抑制心肌梗死缺血區(qū)心肌膠原生成，抑制心肌梗死后心肌纖維化發(fā)生。

由于rhbFGF21可調(diào)控多個(gè)參與心梗后心律失常發(fā)生的離子通道基因的表達(dá)并抑制缺血區(qū)心肌膠原生成，使得開發(fā)針對rhbFGF21為靶點(diǎn)的藥物成為可能，并可以成為一種新的缺血性心律失常的預(yù)防及治療藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于確定rhbFGF21在重大心臟疾病(慢性缺血性心臟病，心肌梗死)中抗心律失常的作用，并將其作為一種新型藥物以及生物標(biāo)志物，應(yīng)用于預(yù)防和治療缺血性心律失常等相關(guān)心臟疾病中。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)手段：

本發(fā)明通過建立大鼠心肌梗死模型，對重組人成纖維細(xì)胞生長因子-21(rhbFGF21)的抗心律失常作用、對心肌梗死大鼠模型心臟的保護(hù)作用以及對心肌細(xì)胞離子通道的影響進(jìn)行了研究，本發(fā)明經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)在急性心肌梗死動(dòng)物模型室性心律失常的發(fā)生率明顯增高，同時(shí)伴有離子通道蛋白CaV1.2、Nav1.5、Kir2.1、Kv4.3表達(dá)異常下調(diào)。分別于術(shù)前和術(shù)后給予心肌梗死模型大鼠注射rhbFGF21，可顯著逆轉(zhuǎn)上述的病理過程，降低大鼠心臟急性心肌梗死后心律失常的發(fā)生率，同時(shí)降低了室顫發(fā)生的可能性，恢復(fù)大鼠缺血邊緣區(qū)心室肌離子通道相關(guān)蛋白CaV1.2、Nav1.5、Kir2.1、Kv4.3的表達(dá)異常。該結(jié)果表明：1)rhbFGF21在心肌梗死動(dòng)物模型心梗前預(yù)防給藥，能夠顯著降低心肌梗死后急性期心律失常的發(fā)生率。2)rhbFGF21在心肌梗死動(dòng)物模型心梗前預(yù)防給藥及心梗后1周持續(xù)腹腔注射給藥，能夠顯著降低心肌梗死后慢性期(1周及4周)心律失常的發(fā)生率。3)rhbFGF21在心肌梗死動(dòng)物模型心梗前預(yù)防給藥及心梗后1周持續(xù)腹腔注射給藥，能夠顯著預(yù)防心肌梗死后心肌纖維化及心衰的并發(fā)癥。

在上述研究的基礎(chǔ)上，本發(fā)明提出了重組人成纖維細(xì)胞生長因子-21在制備預(yù)防和治療缺血性心律失常藥物中的應(yīng)用。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例中，所述的藥物能夠顯著降低心肌梗死后急性期或慢性期心律失常的發(fā)生率。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例中，所述的藥物能夠顯著預(yù)防心肌梗死后心肌纖維化及心衰的并發(fā)癥。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的rhbFGF21可與適當(dāng)載體，例如膽固醇，納米顆粒，殼聚糖，脂質(zhì)體等，連接形成藥物。通過靜脈或肌肉注射方式，用于急、慢性心肌缺血后心律失常的預(yù)防和治療，并預(yù)防心梗后心肌纖維化及心臟功能衰竭。

相交于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明經(jīng)研究證明了rhbFGF21能夠預(yù)防和治療急性心肌梗死后室性心律失常的發(fā)生，從而提供了一種安全、有效的保護(hù)心臟并具有良好的抗心律失常作用的治療方法和藥物，同時(shí)也為rhbFGF21能夠成為預(yù)防和治療缺血性心律失常藥物提供了有力的理論依據(jù)。

附圖說明

圖1為rhbFGF21對心肌梗死大鼠心律失常發(fā)生率的影響；

A.肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖檢測心肌梗死大鼠急性期(15mins)及慢性期(1week，4week)心律失常的發(fā)生；B.心肌梗死后大鼠急性期(15mins)及慢性期(1week，4week)心律失常發(fā)生頻率；

圖2為rhbFGF21對哇巴因誘導(dǎo)的心律失常潛伏期的影響；

圖3為rhbFGF21對心肌梗死大鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能的影響；

A.心肌梗死后1周及4周大鼠左心室超聲心動(dòng)檢測。B-E.心肌梗死后1周及4周大鼠心臟射血分?jǐn)?shù)(EF)及左心室縮短分?jǐn)?shù)(FS)檢測；

圖4為心肌梗死模型大鼠心肌梗死區(qū)心肌缺血損傷面積TTC染色結(jié)果；

圖5為形態(tài)學(xué)觀察rhbFGF21對心肌梗死大鼠左心室缺血邊緣區(qū)心肌細(xì)胞形態(tài)及纖維化的影響；

A.心肌梗死模型大鼠心肌梗死邊緣區(qū)心肌組織H&E和Masson染色；B.心肌梗死模型大鼠心肌梗死邊緣區(qū)心肌組織H&E和Masson染色統(tǒng)計(jì)圖；

圖6為心肌梗死模型大鼠心肌梗死邊緣區(qū)心肌細(xì)胞電鏡觀察結(jié)果；

圖7為rhbFGF21對大鼠H9C2心室肌細(xì)胞系及原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞活力的影響；

A.MTT法檢測大鼠H9C2心肌細(xì)胞系細(xì)胞活力；B.MTT法檢測原代培養(yǎng)大鼠心臟成纖維細(xì)胞活力；C.細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測原代培養(yǎng)大鼠心臟成纖維細(xì)胞活力；

圖8為rhbFGF21對心肌梗死大鼠缺血區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道m(xù)RNA表達(dá)水平的影響；

A-D.rhbFGF21對心肌梗死1周后大鼠缺血區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道CaV1.2，Nav1.5，Kv4.3，Kir2.1 mRNA表達(dá)水平的影響；E-H.rhbFGF21對心肌梗死4周后大鼠缺血區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道CaV1.2，Nav1.5，Kv4.3，Kir2.1 mRNA表達(dá)水平的影響；

圖9為rhbFGF21對心肌梗死大鼠缺血邊緣區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道蛋白表達(dá)水平的影響；

A-E.rhbFGF21對心肌梗死1周大鼠缺血邊緣區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道CaV1.2，Nav1.5，Kv4.3，Kir2.1蛋白表達(dá)水平的影響；F-J.rhbFGF21對心肌梗死4周大鼠缺血邊緣區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道CaV1.2，Nav1.5，Kv4.3，Kir2.1蛋白表達(dá)水平的影響；

圖10為rhbFGF21對心室肌H9C2細(xì)胞系離子通道m(xù)RNA表達(dá)水平的影響。

A-D.rhbFGF21對H₂O₂處理的大鼠心室肌細(xì)胞系(H9C2)離子通道Nav1.5，CaV1.2，Kir2.1，Kv4.3 mRNA表達(dá)水平的影響。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的抗心肌梗死后心律失常作用的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)。但實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，并不對本發(fā)明的保護(hù)范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。

本發(fā)明實(shí)施例所涉及的材料及其來源：

1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性SD大鼠，體重180±10g；豚鼠，雌雄各半，體重200g-250g，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2、主要藥品與儀器：0.9％生理鹽水；rhbFGF21(為現(xiàn)有商品化的產(chǎn)品，可通過市場購買得到，本實(shí)施例中所使用的rhbFGF21由溫州醫(yī)科大學(xué)提供)；哇巴因(Sigma)。

3、主要儀器：自動(dòng)灌流系統(tǒng)、細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)儀器、分子生物學(xué)檢測設(shè)備(Western blot odssay掃膜分析儀、Real-Time PCR system)

實(shí)施例一、rhbFGF21抗心律失常作用

1.rhbFGF21降低心肌梗死大鼠的急性期(15mins)及慢性期(1周，4周)心律失常的發(fā)生率

1)建立心肌梗死大鼠模型：本實(shí)驗(yàn)選取SD大鼠180±10g，經(jīng)3％異戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，通過開胸后結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，成功建立大鼠心肌梗死模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為假手術(shù)組(Sham組)，只開胸不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈；心梗組(MI組)，開胸并結(jié)扎冠狀動(dòng)脈；心梗給藥組(MI+rhbFGF21組)，開胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前1小時(shí)心室內(nèi)注射rhbFGF21(7μg/kg)和術(shù)后每天腹腔給藥(7μg/kg)。

2)觀察結(jié)果：分別記錄大鼠心臟結(jié)扎后15mins、1周、4周以及給藥后心電圖中QT間期及R-R間期變化，以及心律失常的發(fā)生頻率。在大鼠左心室結(jié)扎15mins后，心律失常頻繁發(fā)生，同時(shí)出現(xiàn)了二聯(lián)律和三聯(lián)律。結(jié)扎前給予心室注射rhbFGF21(7ug/kg)組中，心律失常的發(fā)生頻率明顯降低。在模型組大鼠左心室結(jié)扎1周后，ST段抬高，表現(xiàn)出明顯的心肌缺血的現(xiàn)象，rhbFGF21腹腔注射給藥組大鼠左心室冠狀動(dòng)脈結(jié)扎1周后，心電圖檢測顯示未出現(xiàn)明顯的ST段抬高，表明無明顯的心肌缺血現(xiàn)象(見圖1A)。MI組大鼠左心室結(jié)扎4周后，心電圖顯示仍有室性早搏的產(chǎn)生，而MI+rhbFGF21組心電圖檢測未發(fā)現(xiàn)心律失常的現(xiàn)象。此結(jié)果說明，rhbFGF21參與大鼠心梗后心律失常發(fā)生的病理過程。心肌梗死大鼠急性期(15mins)及慢性期(1周及4周)的心律失常發(fā)生率經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，rhbFGF21預(yù)處理組心肌梗死大鼠心律失常的發(fā)生頻率明顯低于未處理組(見圖1B)。

2.rhbFGF21延長哇巴因誘導(dǎo)大鼠心律失常發(fā)生的潛伏期

1)建立哇巴因誘導(dǎo)大鼠心律失常模型：選取260-300g豚鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為生理鹽水組(Control)和rhbFGF21組(10μg/kg，20μg/kg)。建立頸外靜脈插管，給藥1h后，采用恒流泵勻速(1000μl/h)注射哇巴因(0.2mg/ml)誘導(dǎo)豚鼠的心律失常模型，心電示波器連續(xù)監(jiān)測心電圖的變化，直至出現(xiàn)室顫后死亡。記錄注射哇巴因0時(shí)到心律失常第一次出現(xiàn)的時(shí)間(心律失常出現(xiàn)潛伏期)。

2)心電監(jiān)測結(jié)果顯示，在rhbFGF21濃度為20μg/kg時(shí)，顯著延長心律失常的出現(xiàn)的潛伏期，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(見圖2)。

實(shí)施例二、rhbFGF21對心肌梗死大鼠模型心臟的保護(hù)作用

1.建立心肌梗死大鼠模型：方法同實(shí)施例一所述。

2.觀察結(jié)果：

1)rhbFGF21對心肌梗死后心臟功能的保護(hù)作用

心動(dòng)超聲技術(shù)檢測各組動(dòng)物手術(shù)前及術(shù)后1周和4周心臟功能及左心室結(jié)構(gòu)變化(見圖3)。Sham組大鼠左心室容積及心室壁厚度于術(shù)后1周及4周較術(shù)前相比均無顯著變化；MI組大鼠心梗術(shù)后1周左心室容積較心梗前明顯擴(kuò)張，心室壁變薄；心梗術(shù)后4周左心室容積較心梗術(shù)后1周顯著擴(kuò)張，左室前壁變薄，說明心梗模型大鼠術(shù)后1周及4周已出現(xiàn)顯著的心室重構(gòu)，心腔擴(kuò)張。MI+rhbFGF21組大鼠，術(shù)后1周及4周后大鼠心室容積及心室壁厚度均無顯著變化，說明rhbFGF21對心肌梗死大鼠心臟具有保護(hù)作用(見圖3A)。血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)顯示(見圖3B-E)，心肌梗死后1周及4周，MI組大鼠心臟射血分?jǐn)?shù)(EF)值及左心室縮短分?jǐn)?shù)(FS)與Sham組相比均顯著性降低(P<0.01)。MI+rhbFGF21組大鼠心肌梗死術(shù)后1周及4周心臟射血分?jǐn)?shù)及左心室縮短分?jǐn)?shù)較MI組相比顯著增加(P<0.05)。結(jié)果表明心肌梗死后心肌細(xì)胞因缺血缺氧，逐漸發(fā)生左心室重構(gòu)表現(xiàn)為心室容積擴(kuò)大，同時(shí)伴有心功能下降，最終發(fā)展為心力衰竭。rhbFGF21能有效的保護(hù)心梗后心臟結(jié)構(gòu)重構(gòu)及心功能損傷。

2)rhbFGF21對心肌梗死后心肌組織缺血性損傷的保護(hù)作用

TTC染色檢測心梗模型大鼠心肌梗死區(qū)面積，取各組大鼠心臟，沿左室長軸將心室水平切為3-4mm的心肌切片并進(jìn)行TTC染色。結(jié)果顯示，MI+rhbFGF21組大鼠心肌梗死術(shù)后1周和4周后左心室梗死區(qū)的面積較MI組顯著降低(見圖4)。結(jié)果表明rhbFGF21能夠保護(hù)心肌梗死邊緣區(qū)心肌細(xì)胞，減少心肌缺血損傷面積。

形態(tài)學(xué)方法(H&E和Masson染色)觀察心肌梗死區(qū)及缺血邊緣區(qū)心肌結(jié)構(gòu)和膠原纖維增生。結(jié)果顯示，H&E染色中，MI組大鼠心梗后1周和4周左心室缺血區(qū)心肌與Sham組相比，細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞體積變大，同時(shí)梗死區(qū)可見大量的炎性細(xì)胞浸潤。Masson染色結(jié)果顯示，MI組大鼠心梗后1周和4周左心室缺血區(qū)心肌均呈現(xiàn)出不同程度的纖維化，并且伴有大量膠原的生成。rhbFGF21給藥組心梗大鼠與MI組相比心梗1周和4周后，心肌細(xì)胞排列整齊，炎性細(xì)胞浸潤少，心肌纖維化和膠原生成減少(見圖5A、5B)。

透射電鏡觀察心肌梗死后缺血區(qū)心肌細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，MI組大鼠心梗1周后，缺血區(qū)心肌細(xì)胞出現(xiàn)明顯的細(xì)胞核腫脹，肌絲斷裂，肌節(jié)紊亂，橋粒消失，閏盤斷裂，線粒體腫脹。心梗術(shù)后4周，呈現(xiàn)肌絲完全斷裂或溶解，Z線消失，線粒體脊腫脹破裂。rhbFGF21給藥組心梗大鼠心梗邊緣區(qū)心肌組織與MI組相比較，肌絲排列整齊，線粒體形態(tài)完好，未發(fā)現(xiàn)線粒體腫脹及結(jié)構(gòu)改變，橋粒及縫隙連接未見明顯損傷。說明rhbFGF21對缺血心肌組織具有較好的保護(hù)作用(見圖6)。

實(shí)施例三、rhbFGF21對于心肌細(xì)胞及成纖維細(xì)胞活力的影響

1.細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組：

培養(yǎng)成年大鼠的心室肌細(xì)胞系(H9C2)及原代培養(yǎng)大鼠心肌成纖維細(xì)胞,經(jīng)rhbFGF21(25、50、75、100、200、400ng/ml)預(yù)處理2h，37℃，5％CO₂孵箱培養(yǎng)24小時(shí)后收集細(xì)胞，進(jìn)行MTT檢測。

2.觀察結(jié)果：

MTT法檢測心肌細(xì)胞活力。顯示rhbFGF21(25，50，75及100ng/ml)顯著增加心肌細(xì)胞的活力，促進(jìn)心肌細(xì)胞增殖(見圖7A)。同時(shí)，原代培養(yǎng)大鼠成纖維細(xì)胞，不同濃度rhbFGF21孵育48h后分別通過細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT法檢測成纖維細(xì)胞活力。結(jié)果顯示，75ng/ml rhbFGF21對成纖維細(xì)胞增殖呈現(xiàn)抑制作用趨勢，但與對照組相比無顯著差異。說明rhbFGF21能夠增加心肌細(xì)胞的活力，但不影響或輕度抑制成纖維細(xì)胞的活力(見圖7B、7C)。

實(shí)施例四、rhbFGF21對心肌細(xì)胞離子通道的影響

1.動(dòng)物模型建立、細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組：

建立心肌梗死大鼠模型：方法同實(shí)施例一。

體外心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激模型建立：培養(yǎng)成年大鼠的心室肌細(xì)胞系(H9C2),經(jīng)rhbFGF21(25、50、75ng/ml)預(yù)處理2h后，給予H₂O₂(100μM)，建立心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激模型，經(jīng)37℃，5％CO₂孵箱培養(yǎng)24小時(shí)后收集細(xì)胞，提取總mRNA，檢測心肌細(xì)胞經(jīng)H₂O₂及rhbFGF21處理后離子通道CaV1.2，Nav1.5，Kir2.1，Kv4.3mRNA表達(dá)變化。提取總蛋白，采用Western blot技術(shù)檢測離子通道Scn5a、Kcnj2、Kcnd3及Cacna1c蛋白表達(dá)變化。

2.觀察結(jié)果：

1)rhbFGF21對離子通道m(xù)RNA表達(dá)水平的影響

qRT-PCR技術(shù)檢測大鼠心肌梗死缺血邊緣區(qū)心肌細(xì)胞離子通道Nav1.5、Kir2.1、Kv4.3及CaV1.2mRNA表達(dá)變化。在1周和4周大鼠心梗模型中，心肌梗死組大鼠心室肌缺血區(qū)心肌細(xì)胞CaV1.2，Nav1.5，Kir2.1，Kv4.3 mRNA表達(dá)較假手術(shù)組明顯降低(p<0.05)，MI+rhbFGF21組與MI組相比，CaV1.2，Nav1.5，Kir2.1，Kv4.3 mRNA表達(dá)顯著升高(p<0.05,p<0.01)(圖8A-8H)。結(jié)果表明rhbFGF21能夠恢復(fù)心梗后心肌細(xì)胞中鈉、鈣、鉀等離子通道表達(dá)的下降和功能失衡，從而降低心臟電重構(gòu)和心律失常的發(fā)生率。

Western blot技術(shù)檢測心肌梗死1周及4周大鼠缺血邊緣區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道Scn5a、Kcnj2、Kcnd3及Cacna1c蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示，MI組大鼠心肌梗死術(shù)后1周缺血邊緣區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道Scn5a、Kcnj2、Kcnd3及Cacna1c蛋白表達(dá)水平較Sham組相比顯著下降。表明心肌梗死模型制備成功，心肌梗死術(shù)后1周大鼠心室肌出現(xiàn)心肌電生理重構(gòu)。經(jīng)rhbFGF21預(yù)處理的大鼠心肌梗死術(shù)后1周缺血邊緣區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道Scn5a、Kcnj2、Kcnd3及Cacna1c蛋白表達(dá)水平較MI組相比顯著回升(見圖9A-E)大鼠心肌梗死術(shù)后4周，MI組大鼠心室肌缺血邊緣區(qū)心肌細(xì)胞離子通道Scn5a、Kcnj2、Kcnd3及Cacna1c蛋白表達(dá)水平較Sham組顯著降低；經(jīng)rhbFGF21預(yù)處理的大鼠心肌梗死術(shù)后1周缺血邊緣區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道Scn5a、Kcnj2、Kcnd3及Cacna1c蛋白表達(dá)水平較MI組相比顯著回升(見圖9F-J)。結(jié)果表明心肌梗死后大鼠缺血邊緣區(qū)心室肌細(xì)胞離子通道表達(dá)下降，導(dǎo)致心肌電重構(gòu)，從而誘發(fā)心肌梗死后心律失常。rhbFGF21預(yù)處理組中，心肌缺血缺氧對心肌細(xì)胞離子通道Scn5a、Kcnj2、Kcnd3及Cacna1c蛋白的損傷作用明顯減輕，因此，對大鼠心室肌電生理重構(gòu)具有保護(hù)作用。

2)rhbFGF21對心肌細(xì)胞離子通道蛋白氧化應(yīng)激損傷的影響

qRT-PCR技術(shù)檢測大鼠的心室肌細(xì)胞系(H9C2)在氧化應(yīng)激(由H₂O₂誘導(dǎo))過程中離子通道蛋白Cav1.2，Nav1.5，Kir2.1，Kv4.3 mRNA表達(dá)。結(jié)果顯示H₂O₂組中CaV1.2，Nav1.5，Kir2.1，Kv4.3 mRNA表達(dá)明顯降低(p<0.05)。rhbFGF21處理組與H₂O₂組相比，各組Cav1.2,Nav1.5,Kir2.1,Kv4.3 mRNA表達(dá)顯著升高(p<0.05)(見圖10)。結(jié)果表明在心肌氧化應(yīng)激過程中，rhbFGF21對心肌細(xì)胞Na⁺，K⁺，Ca²⁺離子通道的損傷具有保護(hù)作用。