本發明涉及一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，屬于天然產物提取技術領域。
背景技術：
黃酮類化合物廣泛存在于自然界中，屬于植物在長期自然選擇過程中產生的一些次級代謝產物。黃酮類化合物可以分為10多個類別：黃酮、黃烷醇、異黃酮、雙氫黃酮、雙氫黃酮醇、噢弄、黃烷酮、花色素、查耳酮、色原酮等，現已發現約4000余種黃酮類化合物，主要存在于植物的葉、果實、根、皮中。黃酮類化合物具有：抗氧化、清除氧自由基；調節心血管系統；抗癌、防癌作用；抗炎、免疫及抗衰老作用；對內分泌系統作用；生物類黃酮還具有吸收紫外輻射、止咳、祛痰、瀉下、解痙、提高記憶力、抗過敏、活血化瘀、利膽及肝臟保護作用等。
黃酮類化合物的提取純化方法很多，常用的提取方法有水提取法、有機溶劑萃取法、微波萃取法、超聲波提取法、超臨界流體萃取法等。常用的分離純化黃酮類化合物的方法有硅膠柱層析法、聚酰胺柱層析法、葡聚糖凝膠柱層析、紙層析法、薄層層析法、鉛鹽沉淀、大孔樹脂吸附分離法等。其中大孔樹脂吸附分離法在工業上用來制備富含黃酮類化合物提取物的應用最為廣泛。
大孔吸附樹脂是20世紀60年代發展起來的有機高聚物吸附劑。大孔吸附樹脂為吸附和篩選原理相結合的分離材料，它的吸附性是由于范德華引力或生成氫鍵的結果，篩選原理是由于其本身多孔性結構所決定。有機化合物根據吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹脂上經一定的溶劑洗脫而分開，這使得有機化合物尤其是水溶性化合物的提純得以大大簡化。大孔吸附樹脂具有物理化學穩定性高、吸附選擇性強、不受無機物存在的影響、再生簡便、解吸條件溫和，使用周期長、節省費用等優點，避免了用有機溶劑提取分離而造成的有機溶劑回收難、損耗大、成本高、易燃易爆、對環境污染嚴重等缺點。大孔吸附樹脂已在環保、食品、醫藥領域得到了廣泛的應用，大孔吸附樹脂在中草藥有效成分精制純化中的應用也逐年增加，在中草藥化學成分的分離、富集中的應用也越來越受到人們的重視。
技術實現要素：
針對上述現有技術存在的問題，本發明提供一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，操作方便，提取效果好。
為了實現上述目的，本發明采用的一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，具體包括以下步驟，
1）大孔樹脂的預處理：將大孔樹脂用無水乙醇浸泡40-60 h，使其充分溶脹，裝入層析柱中，再用乙醇沖洗層析柱，洗至洗出液中加入適量的蒸餾水無白色渾濁為止，然后用蒸餾水洗至無醇味，濾取備用；
2）總黃酮的提取：將牡丹籽皮提取液緩慢通過由步驟1）中大孔樹脂組成的樹脂柱，用蒸餾水洗去柱中殘留的溶液，再用洗脫劑溶液以0.20-0.40 ml/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即得牡丹籽皮總黃酮。
作為改進，所述步驟1）洗出液中蒸餾水的加入量為洗出液體積的4-6倍。
作為改進，所述步驟1）中采用HZ802、HZ801大孔樹脂中任一種或其混合。
作為改進，所述步驟2）中采用的洗脫劑溶液為50%-70%體積濃度的乙醇溶液。
作為進一步改進，所述步驟2）中，采用濃度為60%的乙醇溶液以0.29mL/s的流速流過樹脂柱。
本發明中牡丹籽皮提取液的制備可采用常用提取技術獲得如可采用超聲波提取方法，以60%乙醇為提取劑，按牡丹籽皮原料與提取劑的料液質量比1:20，提取1.5h后過濾即得牡丹籽皮提取液。
與現有技術相比，本發明采用HZ802、HZ801系列大孔樹脂進行吸附提取，該系列大孔吸附樹脂是以苯乙烯和丙酸酯為單體，加入乙烯苯為交聯劑，甲苯、二甲苯為致孔劑，它們相互交聯聚合形成了多孔骨架結構。大孔吸附樹脂利用的是物理吸附原理，吸附性是由于范德華力或產生氫鍵的結果。在牡丹籽皮黃酮類物質的制備上，大孔吸附樹脂具有兩個獨特優點：一是，大孔吸附樹脂流速較快，生產效率高；二是，大孔吸附樹脂價格便宜，生產成本低。本發明操作簡單，成本低，易于工業化，得到的總黃酮含量較高，分離流速快，分離效率高。
具體實施方式
為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚明了，下面通過實施例，對本發明進行進一步詳細說明。但是應該理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限制本發明的范圍。除非另有定義，本文所使用的所有的技術術語和科學術語與屬于本發明的技術領域的技術人員通常理解的含義相同，本文中在本發明的說明書中所使用的術語只是為了描述具體的實施例的目的，不是旨在于限制本發明。
實施例一
一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，具體包括以下步驟，
1）大孔樹脂的預處理：采用HZ802大孔樹脂，用無水乙醇浸泡48h，使其充分溶脹，裝入層析柱中，再用無水乙醇沖洗層析柱，洗至洗出液無水乙醇中加入適量的蒸餾水(v/v，1:5)無白色渾濁為止，然后用蒸餾水洗至無醇味，濾取備用；
2）總黃酮的提取：將濃度為1.14 mg/mL的牡丹籽皮提取液緩慢通過由步驟1）中大孔樹脂組成的樹脂床，用1000mL的水洗去柱中殘留的溶液，再用濃度為60%的乙醇溶液以0.29ml/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即得牡丹籽皮總黃酮，含量為70.4%。
實施例二
一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，具體包括以下步驟，
1）大孔樹脂的預處理：采用HZ801大孔樹脂，用無水乙醇浸泡48 h，使其充分溶脹，裝入層析柱中，再用乙醇沖洗層析柱，洗至洗出液中加入適量的蒸餾水(v/v，1:5)無白色渾濁為止，然后用蒸餾水洗至無醇味，濾取備用；
2）總黃酮的提取：將濃度為1.14 mg/mL牡丹籽皮提取液緩慢通過由步驟1）中大孔樹脂組成的樹脂床，用1000mL的水洗去柱中殘留的溶液，再用濃度為60%的乙醇溶液以0.29ml/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即得牡丹籽皮總黃酮，含量為69.8%。
比較例1
一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，具體包括以下步驟，
1）大孔樹脂的預處理：采用DA201大孔樹脂，用無水乙醇浸泡48h，使其充分溶脹，裝入層析柱中，再用乙醇沖洗層析柱，洗至洗出液中加入適量的蒸餾水(v/v，1:5)無白色渾濁為止，然后用蒸餾水洗至無醇味，濾取備用；
2）總黃酮的提取：將濃度為1.14 mg/mL牡丹籽皮提取液緩慢通過由步驟1）中大孔樹脂組成的樹脂床，用1000mL的水洗去柱中殘留的溶液，再用體積濃度為60%的乙醇溶液以0.15ml/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即得牡丹籽皮總黃酮，含量為59.4%。
比較例2
一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，具體包括以下步驟，
1）大孔樹脂的預處理：采用AB-8大孔樹脂，用無水乙醇浸泡48h，使其充分溶脹，裝入層析柱中，再用乙醇沖洗層析柱，洗至洗出液中加入適量的蒸餾水(v/v，1:5)無白色渾濁為止，然后用蒸餾水洗至無醇味，濾取備用；
2）總黃酮的提取：將濃度為1.14 mg/mL牡丹籽皮提取液緩慢通過由步驟1）中大孔樹脂組成的樹脂床，用1000mL的水洗去柱中殘留的溶液，再用體積濃度為60%的乙醇溶液以0.15ml/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即得牡丹籽皮總黃酮，含量為60.3%。
同時，與現有常用的通過聚酰胺吸附的提取工藝相比，本發明采用大孔樹脂進行吸附，與聚酰胺吸附工藝相比，大孔吸附樹脂是以苯乙烯和丙酸酯為單體，加入乙烯苯為交聯劑，甲苯、二甲苯為致孔劑，它們相互交聯聚合形成了多孔骨架結構。而聚酰胺由酰胺聚合而成的一類高分子物質，又叫尼龍、錦綸。其次，原理不同。大孔吸附樹脂利用的是物理吸附原理，吸附性是由于范德華力或產生氫鍵的結果。聚酰胺柱的原理主要是氫鍵和雙重層析兩種。
在牡丹籽皮黃酮類物質的制備上，大孔吸附樹脂具有兩個獨特優點：一是，大孔吸附樹脂流速較快，生產效率高；二是，大孔吸附樹脂價格便宜，生產成本低。
以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換或改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。