本發明涉及眼科疾病的藥物，尤其是涉及一種丹皮酚磺酸鈉眼用制劑。
背景技術：
：丹皮酚磺酸鹽廣泛應用于治療手術后疼痛、風濕、類風濕以及果實保鮮等方面，在臨床上有著廣泛的應用。目前市售劑型為丹皮酚磺酸鈉注射劑，未見用丹皮酚磺酸鈉制備眼部制劑的應用及報道。中國專利CN102166205B公開了丹皮酚及其衍生物的醫藥用途，顯示丹皮酚磺酸鈉具有治療或預防免疫性結膜炎、干眼、葡萄膜炎和鞏膜炎的作用。美國專利US2008/0194700A1公開了丹皮酚或一個藥學可接受鹽可用于預防、改善或治療與血管生成相關性疾病，如新生血管性青光眼、糖尿病視網膜病、因血管生成導致的角膜疾病、黃斑變性、翼狀胬肉、視網膜變性等眼病，其描述的治療機理是抑制血管生成。另外，丹皮酚磺酸鈉具有較強的清除氧自由基的活性和抗UV誘導的紅細胞溶血的作用，還對一些植物病原細菌和真菌等有較強的抑制作用。其對果實保鮮的作用就來自丹皮酚磺酸鈉保護超氧化物歧化酶、清除自由基的作用密切相關。研究發現，白內障是世界首位致盲因素，同時也是我國第一位的致盲眼病。在白內障發生發展過程度中，自由基以及與其相關的氧化應激是導致晶狀體生理功能改變、最終導致白內障的樞紐。因此，丹皮酚磺酸鈉有望對白內障的發生發展產生一定藥理作用。鑒于以上丹皮酚磺酸鈉的顯著眼部藥理作用，目前僅有注射劑劑型存在，開發丹皮酚磺酸鈉的眼部制劑需要解決以下問題：提高丹皮酚磺酸鈉的穩定性、增強丹皮酚磺酸鈉的角膜及結膜透過性、延長丹皮酚磺酸鈉的眼部滯留時間、提高丹皮酚磺酸鈉的眼部生物利用度。技術實現要素：本發明的目的是提供一種丹皮酚磺酸鈉新的制劑品種，即丹皮酚磺酸鈉眼用制劑，該丹皮酚磺酸鈉眼用制劑增加了藥物的有效吸收、提高了藥物的穩定性、延長了眼部滯留時間、降低了藥物的毒副作用、提高了藥物的眼部生物利用度。本發明的目的是這樣實現的：一種丹皮酚磺酸鈉眼用制劑，特征是：在丹皮酚磺酸鈉中加入眼用制劑藥用輔料制成，所含丹皮酚磺酸鈉的重量百分比為0.01-30％，余量為眼用制劑藥用輔料。本發明的丹皮酚磺酸鈉眼用制劑包括丹皮酚磺酸鈉滴眼液、丹皮酚磺酸鈉脂質體滴眼劑、丹皮酚磺酸鈉包合物滴眼液、丹皮酚磺酸鈉眼膏、丹皮酚磺酸鈉眼用凝膠、丹皮酚磺酸鈉原位凝膠劑、丹皮酚磺酸鈉眼用脂質體凝膠劑、丹皮酚磺酸鈉眼用注射劑、丹皮酚磺酸鈉眼用脂質體注射劑，上述各種制劑的組成如下：1、一種丹皮酚磺酸鈉滴眼劑，由以下百分比計的原料組成：2、一種丹皮酚磺酸鈉脂質體滴眼劑，由以下百分比計的原料組成：3、一種丹皮酚磺酸鈉包合物滴眼液，由以下百分比計的原料組成：4、一種丹皮酚磺酸鈉眼膏，由以下百分比計的原料組成：5、一種丹皮酚磺酸鈉眼用凝膠，由以下百分比計的原料組成：6、一種丹皮酚磺酸鈉原位凝膠劑，由以下百分比計的原料組成：、7、一種丹皮酚磺酸鈉脂質體凝膠劑，由以下百分比計的原料組成：8、一種丹皮酚磺酸鈉眼用注射劑，由以下百分比計的原料組成：9、一種丹皮酚磺酸鈉眼用脂質體注射劑，由以下百分比計的原料組成：所述pH調節劑為NaOH、HCl、枸櫞酸、三乙醇胺、三羥甲基氨基甲烷、硼酸、硼酸鈉、醋酸和醋酸鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉中的一種或多種。所述pH值為3.0-10.0。所述保濕劑為甘油、透明質酸鈉中的一種或兩種。所述等滲調節劑為氯化鈉、甘油、葡萄糖、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硼酸、硼砂、甘露醇和丙二醇中的一種或多種。所述防腐劑為硫柳汞、山梨酸、醋酸苯汞、苯扎氯胺、苯扎溴胺、苯甲酸鈉、苯氧乙醇、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和三氯叔丁醇中的一種或多種。所述抗氧劑為亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、硫脲、維生素E、維生素A、維生素C和胡蘿卜素中的一種或多種。所述金屬螯合劑為乙二胺四乙酸(EthyleneDiamineTetraaceticAcid，EDTA)、EDTA-2Na、EDTA-Ca和EDTA-2K中的一種或多種。所述眼膏基質為脂肪醇、黃凡士林、白凡士林、羊毛脂和液體石蠟的一種或多種。所述脂質體材料為磷脂酰膽堿類、磷脂酰甘油類、磷脂酰肌醇類、磷脂酰乙醇胺類、神經鞘磷脂類、單鏈或雙鏈磷脂(二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二軟脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二軟脂酸磷脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰絲氨酸、二亞油酸磷脂酰肌醇、二棕櫚酸磷脂酰膽堿(DPPC)、二月桂酸磷脂酰膽堿(DLPC)、二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、單肉蔻酸磷脂酰甘油、單月桂酸磷脂酰甘油、單軟脂酸磷脂酰甘油、單硬脂酸磷脂酰甘油、單肉蔻酸磷脂酸、單月桂酸磷脂酸、單軟脂酸磷脂酸、單硬脂酸磷脂酸、單油酸磷脂酰絲氨酸、單亞油酸磷脂酰肌醇、單棕櫚酸磷脂酰膽堿(MPPC)、單月桂酸磷脂酰膽堿(MLPC)、單肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(MMPC)、單硬脂酰磷脂酰膽堿(MSPC)中的一種或多種。所述包覆材料為聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙烯醇、環糊精、殼聚糖、殼寡糖、羧甲基殼聚糖、三甲基殼聚糖中的一種或多種。所述凝膠基質為具有pH值、溫度或離子敏感特性的高分子材料，選自卡波姆、結冷膠、海藻酸鈉、瓜兒膠、果膠質、聚乙二醇、泊洛沙姆、玻璃酸鈉、羥丙甲纖維素(HPMC)、甲基纖維素(MC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚乙烯醇(PVA)中的一種或多種。所述丹皮酚磺酸鈉包合物滴眼液中的包合物材料為環糊精、β-環糊精、羥丙基-β-環糊精中的一種或多種。本發明是以丹皮酚磺酸鈉為活性有效成分、加眼用制劑藥用輔料按常規制備方法制成。丹皮酚磺酸鈉制成眼科用藥，增加了藥物的有效吸收、提高了藥物的穩定性、延長了眼部滯留時間、降低了藥物的毒副作用、提高了藥物的眼部生物利用度。本發明的制備方法工藝可行、質量可控，有非常廣闊的產業化前景。具體實施方式為了更好地理解本發明，下面結合實施例進一步闡明本發明的內容，但本發明的內容不僅僅局限于下面的實施例。實施例1：丹皮酚磺酸鈉滴眼液取注射用水50mL，加入NaCl0.7g，硼酸1.9g，亞硫酸氫鈉0.2g，EDTA-2Na0.03g，苯扎氯銨0.03g，透明質酸鈉0.1g，攪拌使溶解，再加入丹皮酚磺酸鈉3.5g，待溶解完全后，加入注射用水至100mL，用枸櫞酸調節pH至6.0。0.22μm微孔濾膜過濾，無菌分裝于棕色塑料滴眼瓶中，包裝即得。實施例2：丹皮酚磺酸鈉脂質體滴眼液采用薄膜分散法，取大豆卵磷脂1g、膽固醇0.75g溶于氯仿中作為油相，使用旋轉蒸發儀55℃蒸干成膜，除去氯仿，停止旋轉保持真空繼續抽吸2h后停止，加入含有亞硫酸鈉0.15g、EDTA-2Na0.03g、苯扎溴銨0.02g及丹皮酚磺酸鈉0.2g的磷酸鹽緩沖液50mL中(pH6.0)，劇烈振搖40min，洗膜后在4℃條件下高壓均質機勻化(均質壓力80Mpa，循環次數5次)，即得丹皮酚磺酸鈉脂質體滴眼液。將制得的丹皮酚磺酸鈉脂質體滴眼液緩慢滴入殼寡糖(50kDa)的磷酸鹽緩沖液(1％，w/v)50ml中，10℃攪拌混勻60min，即得殼寡糖包覆丹皮酚磺酸鈉脂質體混懸液，采用NaCl調節至等滲，用枸櫞酸調節pH至7.4，測定包封率>49.8％。0.22μm微孔濾膜過濾，充氮，無菌分裝于棕色塑料滴眼瓶中，包裝即得。實施例3：丹皮酚磺酸鈉包合物滴眼液取HP-β-環糊精1g，加入注射用水75mL，加熱使溶解，加入丹皮酚磺酸鈉0.1g，攪拌使溶解，置超聲振蕩器超聲10min，再依次加入氯化鈉0.6g，硼酸0.4g，硼砂1.3g，尼泊金甲酯0.1g，尼泊金丙酯0.02g，EDTA-2K0.04g，亞硫酸氫鈉0.1g攪拌使溶解，用HCl調節pH至6.5。0.22μm微孔濾膜過濾，無菌分裝于棕色塑料滴眼瓶中，包裝即得。實施例4：丹皮酚磺酸鈉眼膏眼膏基質：取白凡士林50g，液體石蠟10g，無水羊毛脂10g，加熱至150℃熔化，攪拌均勻，加入維生素E0.5g，胡蘿卜素1.5g，冷卻備用。取注射用水20mL，加入亞硫酸鈉0.2g，EDTA0.05g，維生素C0.2g，三氯叔丁醇0.02g，攪拌使溶解，再加入丹皮酚磺酸鈉6.0g，得到丹皮酚磺酸鈉水溶液，備用。取上述眼膏基質與丹皮酚磺酸鈉水溶液研成細膩糊狀，再分次遞增眼膏基質至總量100g，分裝，包裝即得。實施例5：丹皮酚磺酸鈉眼用凝膠取氯化鈉0.9g，硼酸1.9g，亞硫酸鈉0.2g，EDTA-2Na0.03g，攪拌使溶解于注射用水100mL，再加入丹皮酚磺酸鈉3g，待溶解完全后，加入HPMCK4M1.2及尼泊金乙酯0.03g，加熱，攪拌溶解至室溫，放置過夜，用HCl調節pH至7.0。0.22μm微孔濾膜過濾，檢查澄明度合格后，充氮，無菌分裝于棕色塑料滴眼瓶中，包裝即得。實施例6：丹皮酚磺酸鈉眼用凝膠取注射用水約60mL，加入苯氧乙醇0.3g，加熱攪拌使溶解，加熱至80℃，加入羥丙甲基纖維素HPMCK4M1.5g，攪拌均勻，再加入2g丹皮酚磺酸鈉，EDTA0.04g，維生素C0.1g，攪拌使形成透明溶液，過濾，分次將0.2g卡波姆940加入，邊加邊攪拌至完全分散溶脹，加入注射用水40mL，加入0.1M氫氧化鈉調節pH至7.5，0.22μm微孔濾膜過濾，檢查澄明度合格后，充氮，無菌分裝于棕色塑料滴眼瓶中，包裝即得。實施例7：丹皮酚磺酸鈉原位凝膠劑取注射用水約70mL，加入苯扎氯銨0.005g，加熱攪拌使溶解，再加入2g丹皮酚磺酸鈉，亞硫酸氫鈉0.1g，EDTA-2K0.03g，維生素C0.1g，攪拌使形成透明溶液，加入泊洛沙姆P1887g，于室溫下攪拌溶解，再加入泊洛沙姆P40721g，攪拌分散均勻后，至4℃冰箱中冷藏48h以上，得到澄明溶液，補水致使成100mL。實施例8：丹皮酚磺酸鈉脂質體凝膠劑采用薄膜分散法，取蛋黃卵磷脂3g、膽固醇0.8g、維生素E0.6g、維生素A1.5g，溶于氯仿中作為油相，使用旋轉蒸發儀60℃蒸干成膜，除去氯仿，停止旋轉保持真空繼續抽吸2h后停止，加入含有EDTA-2Na0.03g及丹皮酚磺酸鈉0.6g的磷酸鹽緩沖液50mL中(pH6.8)，劇烈振搖40min，洗膜后在4℃條件下高壓均質機勻化(均質壓力80Mpa，循環次數5次)，即得丹皮酚磺酸鈉脂質體混懸液。將制得丹皮酚磺酸鈉脂質體混懸液緩慢滴入三甲基殼聚糖的磷酸鹽緩沖液(1％，w/v)50ml中，10℃攪拌混勻60min，采用NaCl調節至等滲，即得三甲基殼聚糖包覆丹皮酚磺酸鈉脂質體混懸液。HPMCK4M1.5g及尼泊金乙酯0.03g分散于50mL的注射用水中，加熱，攪拌溶解至室溫，放置過夜，得到HPMC溶液。將三甲基殼聚糖包覆丹皮酚磺酸鈉脂質體混懸液與HPMC溶液混合，用已過濾除菌的注射用水定量，灌裝即得。實施例9：丹皮酚磺酸鈉眼用注射劑取注射用水50mL，加入氯化鈉0.9g，亞硫酸鈉0.2g，EDTA-2K0.03g，苯扎氯銨0.03g，攪拌使溶解，再加入丹皮酚磺酸鈉2g，待溶解完全后，加入注射用水至100mL，用枸櫞酸調節pH至6.5。0.22μm微孔濾膜過濾，檢查澄明度合格后，充氮，無菌分裝于棕色安瓿中，包裝即得。實施例10：丹皮酚磺酸鈉脂質體注射劑采用薄膜分散法，取大豆卵磷脂1g、膽固醇0.75g溶于氯仿中作為油相，使用旋轉蒸發儀55℃蒸干成膜，除去氯仿，停止旋轉保持真空繼續抽吸2h后停止，加入含有焦亞硫酸鈉0.25g，EDTA-2Na0.03g，尼泊金甲酯0.03g及丹皮酚磺酸鈉4g的磷酸鹽緩沖液50mL中(pH6.0)，劇烈振搖40min，洗膜后在4℃條件下高壓均質機勻化(均質壓力80Mpa，循環次數5次)，采用NaCl調節至等滲，調節pH至7.5。0.22μm微孔濾膜過濾，檢查澄明度合格后，充氮，無菌分裝于棕色安瓿中，包裝即得。以下通過實驗例證明本發明的有益效果。含量測定：儀器：高效液相色譜儀Waterse2695；色譜柱：InertsilODS-3柱(150×4.6mm，5μm)；柱溫：35℃；流動相：0.12％磷酸二氫銨溶液-乙腈-甲醇(82∶10∶8，用磷酸調至pH3.5)；流速：1.0ml/min；檢測波長：274nm；進樣量：20μl樣品配制：取丹皮酚磺酸鈉樣品以甲醇稀釋適當倍數，注入高效液相色譜儀中測量粒徑及分布；粒徑及分布測定；儀器：馬爾文ZS90；樣品配制：取丹皮酚磺酸鈉制劑以超純水稀釋適當倍數，注入粒度儀中測量粒徑及分布。實驗例1丹皮酚磺酸鈉眼用凝膠的質量評價0.5g卡波姆934經甘油潤濕，加入HPMCK4M0.5g以及取注射用水約60mL，常溫放置24h，使其充分溶脹，再加入2g丹皮酚磺酸鈉，焦亞硫酸鈉0.1g，EDTA-2Na0.04g，攪拌使形成透明溶液，至完全分散溶脹，加入注射用水40mL，加入0.1M氫氧化鈉調節pH至7.0，0.22μm微孔濾膜過濾，檢查澄明度合格后，充氮，無菌分裝于棕色塑料滴眼瓶中，包裝即得。1.外觀性狀本法制得丹皮酚磺酸鈉眼用凝膠透明、均勻細膩。2.黏度測定采用旋轉黏度計(AntonPaar公司)測定三批凝膠劑黏度，結果見表1，符合眼用凝膠劑的要求。表1常溫下凝膠劑在淚液稀釋前后(40：7，v/v)的黏度3.離心穩定性分別取不同批次樣品各3g，置于10ml離心試管中，經4000rpm離心30min，凝膠劑氣泡被去除，無分層、沉淀、析出現象，性狀透明、均勻，說明該凝膠穩定性良好。4.HPLC法含量測定取凝膠劑0.1g，加入飽和NaCl溶液50μl，攪拌，流動相稀釋定容，0.22μm濾膜過濾，取續濾液，按上述色譜條件，計算樣品含量，結果見表2。表2樣品含量測定結果實驗例2抗白內障藥效實驗1實驗材料、試劑、儀器受試藥物丹皮酚磺酸鈉凝膠劑、丹皮酚磺酸鈉滴眼液、生理鹽水；實驗動物11日齡大鼠；實驗儀器：UV-2550紫外/可見分光光度計(日本島津公司)，3-18K冷凍高速離心機(德國Sigma公司)。2統計方法用SPSS17.0軟件進行統計分析。數據以均數±標準差表示，組間采用單因素方差分析，方差齊者組間進行LSD檢驗，方差不齊者進行Tamhane’sT2檢驗。3實驗動物分組及模型制備取11日齡大鼠隨機分組如下4組，每組6只：空白組，模型組，丹皮酚磺酸鈉滴眼劑組，丹皮酚磺酸鈉眼用凝膠劑組，其中空白組和模型組給予生理鹽水。給藥方案為每天給藥4次，持續給藥8d。除空白組外，各組動物均于首次給藥后30min于大鼠后頸背部皮下注射亞硒酸鈉生理鹽水溶液(19μmol·kg-1)以誘發大鼠白內障形成。給藥結束后，取大鼠晶狀體，以10倍量生理鹽水組織勻漿，測定晶狀體總超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽(GSH)含量。4實驗結果表3各實驗組生化指標實驗組SOD活力(U/mgprotein)MDA(nmol/ml)GSH(mg/gprotein)空白組63.5±12.32.1±0.938.7±12.6模型組20.1±9.8015.7±3.313.6±1.5滴眼液組45.7±11.8*7.8±1.1*22.9±13.4*凝膠劑組51.9±15.4*#4.4±1.2*#29.8±15.3**：P<0.05vs.模型組；#：P<0.05vs.滴眼液組。實驗例3抗免疫性結膜炎藥效實驗1實驗材料、試劑、儀器受試藥物丹皮酚磺酸鈉脂質體滴眼液、丹皮酚磺酸鈉滴眼液、丹皮酚磺酸鈉眼用凝膠劑組、生理鹽水；實驗動物Balb/C小鼠；實驗儀器：酶標儀(美國Bio-Rad公司)，3-18K冷凍高速離心機(德國Sigma公司)。2統計方法用SPSS17.0軟件進行統計分析。數據以均數±標準差表示，組間采用單因素方差分析，方差齊者組間進行LSD檢驗，方差不齊者進行Tamhane’sT2檢驗。3實驗動物分組及模型制備取小鼠隨機分組如下4組，每組6只：空白組，模型組，丹皮酚磺酸鈉滴眼劑組，丹皮酚磺酸鈉脂質體滴眼液組、丹皮酚磺酸鈉眼用凝膠劑組，其中空白組和模型組給予生理鹽水。致敏階段采用致敏原雞卵白蛋白OVA的ALUM溶液0.25ml，給藥方案為每周1次，持續給藥2周。經免疫激發后(OVA5mg/ml)，再持續給藥5d，給藥結束后，眼眶取血，采用ELISA方法測定血清中IL-4、OVA-sIgE、IFN-γ的含量。4實驗結果表4各實驗組血清測定結果實驗組IL-4(pg/ml)OVA-sIgE(μg/ml)IFN-γ(ng/ml)空白組68.7±11.0*0.99±0.12*1578.6±15.6*模型組198.3±12.31.45±0.101130.3±36.5滴眼液組106.4±23.5*1.14±0.13*1346.5±26.8*脂質體滴眼液組75.8±16.1*#1.17±0.14*1499.5±25.1*#凝膠組80.7±11.2*1.00±0.11*#1398.1±23.4**：P<0.05vs.模型組；#：P<0.05vs.滴眼液組。實驗例4抗結膜炎藥效實驗1實驗材料、試劑、儀器受試藥物丹皮酚磺酸鈉眼膏、丹皮酚磺酸鈉原位凝膠、生理鹽水；實驗動物健康成年大耳白兔；實驗儀器：手持裂隙燈(蘇州康捷公司)；2實驗動物分組及模型制備建立慢性結膜炎模型：受試動物全麻后于上方球結膜距角膜緣2mm處行球結膜下埋線術(范圍:上方180°)，線頭不外露。取家兔隨機分組如下4組，每組6只：空白組，模型組，丹皮酚磺酸鈉眼膏，丹皮酚磺酸鈉原位凝膠，其中空白組和模型組給予生理鹽水。給藥方案為每天給藥3次，持續給藥5周。雙盲法觀察，每日手電肉眼及熒光染色裂隙燈觀察、記錄，統一記錄表格，量化計分。結果顯示治療1.5周后，除模型組外各組體征有所緩解，綜合分值下降。用藥2-4周，除模型組外各組明顯好轉，模型組仍有明顯瞼結膜充血。用藥5周各組基本恢復正常，模型組刺激后仍有輕度充血。觀察期內丹皮酚各制劑組無顯著刺激性及不良反應。當前第1頁1 2 3