本發(fā)明涉及一種靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針及制備和應(yīng)用。具體涉及靶向多肽連接的磷脂包裹油相納米Zn-Fe₃O₄，同時(shí)兼有熒光/核磁雙模態(tài)成像探針的制備方法。本發(fā)明在載藥領(lǐng)域具有應(yīng)用前景。

背景技術(shù)：

腦部腫瘤的生存期短、死亡率高，嚴(yán)重危害人類健康，目前臨床應(yīng)用的藥物制劑和納米藥物均難以奏效。因此，腫瘤早期診斷尤為重要。要實(shí)現(xiàn)腦外科手術(shù)中腫瘤的安全、完整的切除，主要取決于對(duì)腫瘤邊界的精確界定。其中作為顱內(nèi)腫瘤的主要類型，神經(jīng)膠質(zhì)瘤的分化程度差、增殖及侵襲能力強(qiáng)，呈彌漫性生長(zhǎng)、無(wú)明確的邊界，肉眼很難將其與周邊正常組織區(qū)分開(kāi)來(lái)。又由于病灶部位通常與中樞神經(jīng)血管結(jié)構(gòu)毗鄰，不當(dāng)?shù)氖中g(shù)操作可能導(dǎo)致嚴(yán)重的非可逆損傷。因此，我們發(fā)明了一種熒光/磁共振雙模態(tài)探針，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)手術(shù)前腫瘤的精確定位，還能在手術(shù)中幫助指導(dǎo)腫瘤邊緣的精準(zhǔn)界定，同時(shí)生物相容性好，是一種實(shí)時(shí)、精準(zhǔn)的可視化技術(shù)。

磷脂的包裹相對(duì)于單純的無(wú)機(jī)納米顆粒具有更好的生物相容性，增加了體內(nèi)循環(huán)時(shí)間和穩(wěn)定性。多模態(tài)探針顯像技術(shù)能夠克服單個(gè)顯像技術(shù)的自身局限，綜合多種優(yōu)勢(shì)，同時(shí)滿足定量、實(shí)時(shí)以及靈敏度等的要求。因此開(kāi)發(fā)熒光/核磁雙模態(tài)探針具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針及制備和應(yīng)用。以鋅摻雜的納米四氧化三鐵 為主體，使用靶向修飾的磷脂包裹Zn-Fe₃O₄復(fù)合物的制備方法。該方法通過(guò)控制反應(yīng)條件，在磷脂表面連接不同靶向的多肽及抗體分子，成功包裹了油相納米顆粒。具有包裹量大，性能穩(wěn)定，生物相容性好的特點(diǎn)。所得產(chǎn)物具有較好的臨床應(yīng)用前景。

一種靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DSPE-PEG）和靶向分子-DSPE（P-DSPE）溶于氯仿或環(huán)己烷溶液，加入鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒（Zn-Fe₃O₄），使得磷脂與Zn-Fe₃O₄的質(zhì)量比為1:1-10:1；將混合溶液置于圓底燒瓶中，加入適量超純水，超聲混勻，再將上述混合液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，40℃-80℃，10min-30min；通過(guò)磁性吸附鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒于容器底部，去上清，可以將未包覆的磷脂去除，最終得到靶向磷脂包裹的納米四氧化三鐵；

（2）靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針的制備：

將熒光（FITC）修飾好的DSPE（FITC-DSPE），DSPE-PEG和靶向DSPE（P-DSPE）溶于氯仿溶液，加入鋅摻雜的納米四氧化三鐵（Zn-Fe₃O₄），使得磷脂與Zn-Fe₃O₄的質(zhì)量比為1:1-10:1；將混合溶液置于圓底燒瓶中，加入適量超純水，超聲混勻；再將上述混合液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，40℃-80℃，10min-30min，通過(guò)磁性吸附鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒于容器底部，去上清，可以將未包覆的磷脂去除，最終得到靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針。

所述的靶向分子為靶向神經(jīng)鞭毛素蛋白（Neuropilin-1）的多肽分子的一種，或靶向Toll樣受體4抗體（TLR4）。

FITC-DSPE: P-DSPE: DSPE-PEG的質(zhì)量比為0.2:1:10。

磷脂與Zn-Fe₃O₄的質(zhì)量比為1:1-10:1。

一種靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針，其特征在于，根據(jù)上述任一所述方法制備得到。

一種靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針的應(yīng)用。

本發(fā)明的方法具體為：

（1）靶向磷脂的制備

將巰基修飾的多肽分子溶解于磷酸鹽緩沖溶液中（PBS，pH=7.0），馬來(lái)酰亞胺修飾的磷脂分子（DSPE-PEG-MAL）溶解于N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中。然后將DSPE-PEG-MAL溶液加入到多肽溶液中。超聲除去溶液中的氣泡，然后磁力攪拌1小時(shí)。

反應(yīng)液稀釋3-5倍，裝入透析袋透析，以除去DMF，PBS，以及未連接的多肽分子等。得到多肽(P)連接的磷脂分子（P-DSPE）。冷凍干燥得到固體產(chǎn)物。

（2）靶向磷脂包裹鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒

將DSPE-PEG和上述1中靶向DSPE（P-DSPE）溶于氯仿溶液。加入鋅摻雜的納米四氧化三鐵（Zn-Fe₃O₄），使得磷脂與Zn-Fe₃O₄的質(zhì)量比為1:1-10:1。將混合溶液置于圓底燒瓶中，加入適量Q水，超聲混勻。再將上述混合液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，40℃-80℃，10min-30min。通過(guò)磁性吸附鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒于容器底部，去上清，可以將未包覆的磷脂去除，最終得到靶向磷脂包裹的納米四氧化三鐵。

（3）靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針的制備

將熒光（FITC）修飾的DSPE（FITC-DSPE），DSPE-PEG和上述1中靶向DSPE（P-DSPE）溶于氯仿溶液。加入鋅摻雜的納米四氧化三鐵（Zn-Fe₃O₄），使得磷脂與Zn-Fe₃O₄的質(zhì)量比為1:1-10:1。將混合溶液置于圓底燒瓶中，加入適量Q水，超聲混勻。再將上述混合液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，40℃-80℃，10min-30min。通過(guò)磁鐵吸附Zn-Fe₃O₄顆粒于容器底部，去上清，可以將未包覆的磷脂去除，最終得到靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針。

具體涉及靶向多肽連接的磷脂包裹油相納米無(wú)機(jī)顆粒，同時(shí)兼有熒光/核磁雙模態(tài)成像探針的制備方法。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明采用靶向磷脂包裹鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒的結(jié)構(gòu)。所用原料生物安全性高，部分原料已經(jīng)形成商品，具有一定的應(yīng)用前景。）本發(fā)明制備的靶向磷脂包裹的納米顆粒，性質(zhì)穩(wěn)定，生物相容性好，兼具靶向性，熒光和核磁共振成像功能。）本發(fā)明中的制備方法工藝簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)，能進(jìn)一步滿足生產(chǎn)和應(yīng)用。

附圖說(shuō)明

圖1為所制備的靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針的透射電鏡圖。

圖2為所制備靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針的粒度圖。

其中a為油相Zn-Fe₃O₄納米顆粒；b為靶向多肽磷脂包裹的Zn-Fe₃O₄納米顆粒； c為磷脂包裹的Zn-Fe₃O₄納米顆粒。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步描述。以下的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，而不限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1：

將熒光（FITC）修飾好的DSPE（FITC-DSPE），DSPE-PEG和上述1中靶向DSPE（該靶向多肽的序列為CPVTRPPR）溶于氯仿溶液。加入鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒（Zn-Fe₃O₄），使得磷脂與Zn-Fe₃O₄的質(zhì)量比為2:1。將混合溶液置于圓底燒瓶中，加入適量Q水，超聲混勻。再將上述混合液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，70℃，15min。通過(guò)磁鐵吸附鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒于容器底部，去上清，可以將未包覆的磷脂去除，最終得到靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針。

實(shí)施例2：

將熒光（FITC）修飾好的DSPE（FITC-DSPE），DSPE-PEG和上述1中靶向DSPE（該靶向多肽的序列為CRPAKPAR）溶于氯仿溶液。加入鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒（Zn-Fe₃O₄），使得磷脂與Zn-Fe₃O₄的質(zhì)量比為3:1。將混合溶液置于圓底燒瓶中，加入適量Q水，超聲混勻。再將上述混合液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，60℃，20min。通過(guò)磁鐵吸附鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒于容器底部，去上清，可以將未包覆的磷脂去除，最終得到靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針。

實(shí)施例3：

將熒光（FITC）修飾好的DSPE（FITC-DSPE），DSPE-PEG和上述1中靶向DSPE（該靶向多肽的序列為CRGERPPR）溶于氯仿溶液2.5ml。加入鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒（Zn-Fe₃O₄）膠體溶液2.5ml，使得磷脂與Zn-Fe₃O₄的質(zhì)量比為5:1。將混合溶液置于圓底燒瓶中，加入Q水5ml，超聲混勻。再將上述混合液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，80℃，30min。通過(guò)磁鐵吸附鋅摻雜的四氧化三鐵納米顆粒于容器底部，去上清，可以將未包覆的磷脂去除，最終得到靶向磷脂包裹的熒光/核磁雙模態(tài)探針。