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小鼠ECM的制備方法及得到的不同來源的小鼠ECM和小鼠卵巢體內再生的方法與流程

文檔序號:11059329閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種小鼠ECM的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)取出小鼠的不同組織,將其置于不同濃度的洗滌劑中,處理不同的時間,然后使用滅菌水和PBS清洗洗滌劑,保證ECM中不含有洗滌劑;

(2)對制備的ECM進行組織學分析和生化分析,優選出最好的小鼠ECM。

2.根據權利要求1所述的小鼠ECM的制備方法,其特征在于,所述步驟(1)中洗滌劑為SDS和Triton中的一種或兩種組合。

3.根據權利要求1所述的小鼠ECM的制備方法,其特征在于,所述組織為小鼠卵巢組織。

4.根據權利要求1所述的小鼠ECM的制備方法,其特征在于,所述步驟(2)包括對ECM的組織切片進行H&E和DAPI染色,并對ECM的彈性蛋白、膠原和sGAG三種成分含量的測定以及殘留DNA量對比分析。

5.如權利要求1所述的小鼠ECM的制備方法制得不同來源的小鼠ECM。

6.一種小鼠卵巢體內再生的方法,其特征在于,將權利要求5獲得的小鼠ECM,移植回小鼠卵巢原位,不同時間點取出ECM,觀察其再生情況,并且對再生卵巢從再生效率、組織學分析、免疫組織化學分析、基因表達情況和生殖能力檢測五方面進行分析鑒定。

7.根據權利要求6所述的小鼠卵巢體內再生的方法,其特征在于,所述小鼠ECM移植回小鼠卵巢原位的方法:腹腔注射麻醉受體小鼠,用手術剪刀在背中線中部開口,用鑷子在背側將肌肉層扎破并伸入到體腔內,夾出與卵巢相連的脂肪組織,撕破卵巢包膜,夾取出卵巢,將制備好的ECM重新放回到卵巢包膜中,將其放回到體內,縫合傷口,做好標記。

8.根據權利要求6所述的小鼠卵巢體內再生的方法,其特征在于,所述再生效率=回收再生卵巢數量/移植小鼠卵巢數量×100%,計算再生效率;所述的組織學分析使用常規H&E染色的方法。

9.根據權利要求6所述的小鼠卵巢體內再生的方法,其特征在于,所述免疫組織化學分析包括使用脫蠟、脫水、微波加熱抗原修復、血清封閉、一抗孵育、二抗孵育、AP顯色、復染、脫水、透明、封片、鏡檢。

10.根據權利要求6所述的小鼠卵巢體內再生的方法,其特征在于,所述基因表達情況采用PCR和qPCR兩種實驗方法驗證不同基因的表達情況;所述生殖能力檢測包括雌雄小鼠比例為2:1合籠,檢查陰栓,觀察其生仔情況。

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