本發明涉及一種用于治療耳聾的藥物組合物的制備方法。技術背景：聾啞病人是指聽覺和語言障礙兼有的病人。全世界聾啞人約2億人。我國有聾啞人2700多萬，每年新增2-3萬人。一旦一個家庭有一位聾啞患兒，就會給這個家庭在經濟上、思想上造成嚴重的困難和壓力。感音神經性聾是由于外源性或自身衰老導致的耳蝸毛細胞的變性和逐漸消失，血管紋、螺旋神經節、聽神經或聽覺中樞的退行性病變引起的聽力減退和聽力喪失。目前這被認為是一種不可逆的病變且尚無特效藥物或保守療法能使感音神經性聾病人完全恢復聽力。藥物治療對于改善聽功能有一定療效，但十分有限，有些藥物還有較大的毒副作用。電子耳蝸植入和助聽器的應用均依賴于螺旋神經節神經元的存活，螺旋神經節神經元的缺失會影響其效果。因此，尋找一種有效且低毒或無毒的治聾藥物仍是一條重要途徑。近年來，中藥治聾的研究也取得了很大發展。中國專利CN1775254A公開了一種治療耳聾的藥物制劑及其制備方法(龍膽、黃芩、地黃、澤瀉、川木通、梔子、當歸、九節菖蒲、甘草、羚羊角等中藥原料制成)。但該專利中未公開臨床療效資料及動物實驗資料。中國專利CN101439131A的專利中報道了一種治療感音神經性耳聾的中藥組合物及其應用，該中藥組合物的配方和重量比為：熟地黃22-48份，澤瀉8-18份。該專利中的藥物組合物具有滋陰補腎，利水泄熱的功效，對于感音神經性耳聾有一定的防治功效。眾所周知，中藥的炮制對于藥材的治療效果有著關鍵的影響。然而在前人研究中，對于治療耳聾的藥物，并沒有一種很成熟的制備方法。技術實現要素：：有鑒于此，提出本發明。本發明提供了一種用于治療耳聾的藥物組合物的制備方法。本發明的技術方案為：本發明提供了三種藥物組合物，其中，藥物組合物1由紅花5-40重量份、黃芪10-60重量份、穿山甲5-40重量份、桃仁10-60重量份、川芎4-40重量份、萊菔子5-40重量份、木香5-40重量份、烏藥6-40重量份、熟地15-70重量份，山萸肉15-70重量份、丹皮6-40重量份、云苓6-40重量份、澤瀉5-50重量份、磁石15-80、皂刺5-50重量份、水蛭5-40重量份、知母5-40重量份、黃柏5-40重量份制成；組合物2由黃芪30-90重量份、當歸5-50重量份、川芎3-20重量份、赤芍7-40重量份、桃仁3-30重量份、紅花3-30重量份、肉桂1-10重量份、蘇木5-50重量份、水蛭3-30重量份、王不留10-60重量份、磁石10-60重量份制成。組合物3由銀花15-60重量份、瓜蔞15-60重量份、當歸5-30重量份、元胡15-60重量份、川芎20-90重量份、人參3-30重量份、五靈脂5-40重量份、冰片10-60重量份，麝香(或人工麝香)1-10重量份、磁石15-60重量份、杞果7-60重量份、公英15-60重量份、山萸肉15-60重量份制成。本發明還提供了一種用于制備治療耳聾藥物的藥物組合物，其中，該藥物組合物由組合物2和組合物3組成，使用時將組合物2和組合物3聯用。優選的，組合物2的組方為黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份；組合物3的組方為銀花30重量份、瓜蔞30重量份、當歸10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人參6重量份、五靈脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份。一種用于制備上述藥物組合物的制備方法，其特征在于：組合物2、3的制備步驟包括(1)原料的清洗(2)原料的預處理-炒制(本發明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內，用中火炒制外呈焦黃，內呈黃色的狀態)(3)水煎(4)加入乙醇(5)過濾(6)濃縮包裝。優選的，所述藥材從原產地采購，并按照《中國藥典》的標準對藥材進行篩選，粉碎和切片。優選的，采用低氘水對藥材進行清洗，浸泡10-30min。優選的，清洗前將低氘水中加入0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理。低氘水的氘豐度為20-130×104atm％。優選的，增氧至水中氧含量為15-60ul/L時，停止增氧。優選的，浸泡時經過超聲處理，功率為280w。優選的，炒制過程為中火炒制20min。優選的，水煎的步驟為，將浸泡過的藥材取出，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入100-130℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流10-30min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液。優選的，濃縮包裝的步驟為，將加入乙醇的煎液濃縮，經脫色、調節pH值或除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥。優選的，所述組合物1的制備方法為：制備方法：(1)將上述藥材從原產地采購；(2)清洗，將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為20×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為25ul/L時，停止增氧；在所得含微量元素的低氘增氧水中加入步驟(1)中的產地藥材進行清洗，浸泡15min；(3)藥材的挑選，將水洗浸泡后的藥材照2010年版《中國藥典》中藥一部的標準，對藥材進行篩選、粉碎和切片；(4)藥材的浸泡，將已經粉碎或切片的紅花、黃芪、穿山甲、桃仁、川芎、萊菔子、木香、烏藥、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、澤瀉、皂刺、知母、黃柏于40℃的低氘水中浸泡20min；將已經粉碎的磁石、水蛭于60℃的低氘水中浸泡20分鐘；(5)水煎，將步驟(4)中浸泡過的藥材取出，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得煎液濃縮，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為50-150ml。優選的，所述組合物2的制備方法為：(1)清洗，將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為20×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為25ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡20min；將已經粉碎的磁石、水蛭于60℃的低氘水中浸泡20分鐘；(2)炒制：(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為30-60％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.1-1.3g/ml，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為50-150ml。優選的，所述組合物3的制備方法為：(1)清洗，將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為20×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為25ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的銀花、瓜蔞、當歸、元胡、川芎、人參、五靈脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉量份于40℃的低氘水中浸泡20min；將已經粉碎的磁石于60℃的低氘水中浸泡20分鐘；(2)炒制：(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為30-60％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.1-1.3g/ml，調節pH值至6，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為50-150ml。優選的，所述組合物2的制備方法為：炒制的步驟為，中火對黃芪，當歸，桃仁，蘇木這幾味藥材進行炒制。優選的，所述組合物3的制備方法為：炒制的步驟為，中火對銀花，當歸，元胡，公英，山萸肉這幾味藥材進行炒制。優選的，所述組合物2的清洗的步驟為：將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為20×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為25ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w。優選的，所述組合物3的清洗的步驟為：將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為20×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為25ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的銀花、瓜蔞、當歸、元胡、川芎、人參、五靈脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w。本發明的有益效果為：1.采用經過特殊處理的水對藥材進行清洗，能夠活化藥材中的有效成分，易于藥物發揮藥性。2.將不同的藥材分開浸泡超聲，便于藥材中的有效成分更好的逸出。3.將不同的藥材分開浸泡，炒制，便于藥材中的有效成分更好的逸出。4.經動物實驗證明，本發明方法所得的藥物組合物，在治療因感音毛細胞損傷或缺失導致的耳聾有良好的治療效果，治愈率高。附圖說明圖1是本發明中對照組致聾90天后毛細胞的電鏡觀察圖(20KV×1500)；圖2是本發明中對照組致聾90天后毛細胞的電鏡觀察圖(20KV×3000)；圖3是本發明實驗組5致聾實驗后治療90天毛細胞再生的電鏡觀察圖(20KV×1500)；圖4是本發明實驗組5致聾實驗后治療90天毛細胞再生的電鏡觀察(20KV×3000)。具體實施方式實驗例1本實驗例目的在于驗證炒制對于制備復聰湯的有益效果。以組合物2的制備方法為例：實驗中，以藥材提取后，藥液的溶質質量作為檢測指標，溶質質量越高，有效成分提取的量越大，推測該制備方法的治療效果越好。1.不用炒制方法制備：按重量份數稱取如下藥材：黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，總計100g。量取1000ml氘豐度為20×104atm％的低氘水，加入0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為25ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡20min；將已經粉碎的磁石、水蛭于60℃的低氘水中浸泡20分鐘。將清洗過的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液。將煎液靜置12h，過濾，濾液減壓干燥獲得粉末，稱重。2.采用炒制方法制備：按重量份數稱取如下藥材：黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，總計100g。量取1000ml氘豐度為20×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為25ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡20min；將已經粉碎的磁石、水蛭于60℃的低氘水中浸泡20分鐘。將清洗過的藥材晾干，放入鍋中，中火炒制20min。隨后按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液。將煎液靜置12h，過濾，濾液減壓干燥獲得粉末，稱重。實驗結果如表1所示，可以發現，經過炒制步驟的煎液，其溶質質量更大，可以推測煎液中的有效成分更多。表1經炒制步驟與不經炒制步驟獲得的煎液的溶質質量粉末質量(g)未經炒制5.7經過炒制6.8隨后的實驗中，申請人意外的發現，并非所有藥材都適合炒制，經過大量實驗發現，組合物2中炒制黃芪，當歸，桃仁，蘇木這幾味藥材，獲得的煎液溶質質量最大。組合物3中炒制銀花，當歸，元胡，公英，山萸肉這幾味藥材，獲得的煎液溶質質量最大。實驗數據如表2-3所示。表2組合物2中不同炒制方案中表3組合物3中不同炒制方案中實驗例2本實驗例目的在于驗證超聲對于制備復聰湯的有益效果。以組合物2的制備方法為例：實驗中，以藥材提取后，藥液的溶質質量作為檢測指標，溶質質量越高，有效成分提取的量越大，推測該制備方法的治療效果越好。1.不用超聲方法制備：按重量份數稱取如下藥材：黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，總計100g。量取1000ml氘豐度為20×104atm％的低氘水，加入0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為25ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡20min；將已經粉碎的磁石、水蛭于60℃的低氘水中浸泡20分鐘。將清洗過的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液。將煎液靜置12h，過濾，濾液減壓干燥獲得粉末，稱重。2.采用超聲方法制備：按重量份數稱取如下藥材：黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，總計100g。量取1000ml氘豐度為20×104atm％的低氘水，加入0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為25ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w。隨后按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液。將煎液靜置12h，過濾，濾液減壓干燥獲得粉末，稱重。實驗結果如表4所示，可以發現，經過超聲步驟的煎液，其溶質質量更大，可以推測煎液中的有效成分更多。表4經超聲步驟與不經超聲步驟獲得的煎液的溶質質量粉末質量(g)未經超聲6.7經過超聲12.3對比例1按照CN1775254A中的制備方法，制備治療耳聾藥劑。稱取龍膽125g，黃芩125g，地黃125g，澤瀉125g，川木通125g，梔子125g，當歸125g，九節菖蒲125g，甘草125g，羚羊角6.25g。當歸、羚羊角分別粉碎成細粉；其余龍膽等八味加乙醇回流提取二次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并乙醇提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏狀；藥渣加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.30～1.35(50℃)的清膏，與上述稠膏合并，攪勻，真空干燥，粉碎成細粉，加入當歸、羚羊角細粉，混勻，加入適量淀粉及2％微粉硅膠，混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。對比例2按照CN101439131A中的制備方法，制備治療耳聾藥劑。稱取熟地黃24g、澤瀉9g，加入10倍量雙蒸水浸泡2h，武火煮沸后，文火煎煮0.5h，取藥液。再次加入8倍量的雙蒸水，浸泡1h，武火煮沸后，文火煎煮0.5h，取藥液。將兩次藥液合并，90℃水浴濃縮。按體積比2∶3加入無水乙醇，充分混勻，4℃靜置24h，1500rpm離心15min，取上清，棄沉淀。90℃水浴揮發乙醇，三蒸水定容至270ml液體。0.22μm小濾器過濾除菌，制得藥劑。對比例3按照組合物2的組方，稱取黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共計100g。將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡20min；將已經粉碎的磁石、水蛭于60℃的低氘水中浸泡20分鐘；將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；將上一步所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為100ml。對比例4按照組合物2的組方，稱取黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共計100g。將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；將上一步所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為100ml。對比例5按照組合物2的組方，稱取黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共計100g。將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留浸泡于40℃的低氘水中；將已經粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中；中火對黃芪、當歸、桃仁、蘇木這幾味藥材進行炒制；將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；將上一步所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為100ml。制備例1組合物2的組方：黃芪30重量份、當歸5重量份、川芎3重量份、赤芍7重量份、桃仁3重量份、紅花3重量份、肉桂1重量份、蘇木5重量份、水蛭3重量份、王不留10重量份、磁石10重量份，共稱取藥材100g。制備方法：(1)清洗，將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為20×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為15ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、赤芍、川芎、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，當歸，桃仁，蘇木這幾味藥材進行炒制；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為30％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.1g/ml，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為100ml。制備例2組合物2的組方：黃芪90重量份、當歸50重量份、川芎20重量份、赤芍40重量份、桃仁30重量份、紅花30重量份、肉桂10重量份、蘇木50重量份、水蛭30重量份、王不留60重量份、磁石60重量份，共稱取藥材100g。制備方法：(1)清洗，將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為130×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為60ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，當歸，桃仁，蘇木這幾味藥材進行炒制；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為60％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.3g/ml，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為100ml。制備例3組合物2的組方：黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共稱取藥材100g。制備方法：(1)清洗，將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，當歸，桃仁，蘇木這幾味藥材進行炒制；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為100ml。制備例4組合物3的組方：銀花15重量份、瓜蔞15重量份、當歸5重量份、元胡15重量份、川芎20重量份、人參3重量份、五靈脂5重量份、冰片10重量份，麝香(或人工麝香)1重量份、磁石15重量份、杞果7重量份、公英15重量份、山萸肉15重量份，共稱取藥材100g。制備方法：(1)清洗，將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為20×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為25ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的銀花、瓜蔞、當歸、元胡、川芎、人參、五靈脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對銀花，當歸，元胡，公英，山萸肉這幾味藥材進行炒制；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為30％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.1g/ml，調節pH值至6，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為100ml。制備例5組合物3的組方：銀花60重量份、瓜蔞60重量份、當歸30重量份、元胡60重量份、川芎90重量份、人參30重量份、五靈脂40重量份、冰片60重量份，麝香(或人工麝香)10重量份、磁石60重量份、杞果60重量份、公英60重量份、山萸肉60重量份，共稱取藥材100g。制備方法：(1)清洗，將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為130×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為60ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的銀花、瓜蔞、當歸、元胡、川芎、人參、五靈脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對銀花，當歸，元胡，公英，山萸肉這幾味藥材進行炒制；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為60％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.3g/ml，調節pH值至6，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為100ml。制備例6組合物3的組方：銀花30重量份、瓜蔞30重量份、當歸10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人參6重量份、五靈脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份，共稱取藥材100g。制備方法：(1)清洗，將1000ml去離水照常規方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，0.0001％亞硒酸鈉，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經粉碎或切片的銀花、瓜蔞、當歸、元胡、川芎、人參、五靈脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對銀花，當歸，元胡，公英，山萸肉這幾味藥材進行炒制；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，調節pH值至6，除菌后用無菌軟包、玻璃瓶或塑料瓶包裝成藥，裝量為100ml。效果例1動物實驗1.造模選用健康青年雜色豚鼠，耳廓反射正常，體重250-300g，雌雄各半。隨機分為慶大霉素致聾組(Gentamyci,GM組)，正常對照組。動物用戊巴比妥鈉80mg/Kg劑量麻醉，進行腦干誘發電位(ABR)和畸變耳聲發射(DPOAE)測定。測定后的GM組每天肌注慶大霉素(山東魯抗辰欣藥業有限公司，批準文號：國藥準字H37021973)按80mg/kg。連續肌肉注射14-20天，測定慶大霉素注射動物的ABR閾值在50dBSPL以上，DPOAE幅值明顯下降后，再分為致聾后對照組、致聾后中藥治療組和對比例治療組。正常對照組肌肉注射生理鹽水同樣時間。注射后的所有動物進行ABR和DPOAE測定。2.聽功能測定方法美國InteligentHearingSmart聽覺誘發電位-耳聲發射儀(腦干誘發電位、耳蝸電圖、多頻穩態)。動物麻醉后，用針電極插入顱頂為記錄電極，同側為參考電極，對側接地。刺激率19.1/ms,高通300，低通3000，平均疊加256-512次。DPOAE記錄是將大小合適的探頭塞入外耳道，使外耳道密封，當刺激信號平穩后進行測試，重復兩次。每個受試者均接受兩個初始音強度分別為為L1＝70dBSPL，L2＝70dBSPL的純音信號刺激，初始音的頻率比為f1/f2＝1.22，f1、f2的幾何均數的范圍位于0.5～8.0kHz。分別選擇f2為0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，16，32kHz各點進行測試，測量不同刺激強度時DPOAE的幅值，以引出反應幅值高出本底噪聲3dB時的最小刺激強度作為DPOAE有無的指標，確定檢出率。上述測試均疊加100次。3.治療方法及藥物用量3.1將GM致聾豚鼠隨機分組，每組各20只。按陳奇主編的《中藥藥理研究方法學》方法，按成人量(mg/kg)換算成動物劑量的倍數簡表，換算豚鼠為4.5倍的劑量(mg/kg)，計算出豚鼠的口服用藥劑量為10ml。如本發明表1所述，致聾后對照組、致聾后中藥治療組和對比例治療組的小鼠每天服用中藥組合物2，組合物3，二者的組合物，對比例中的中藥組合物，連續治療3個月。慶大霉素致聾后對照組同樣為20只，給予口服同劑量的生理鹽水，時間同治療組。3.2統計學方法：采用MicrosoftOfficeExcel錄入數據，計算平均值，制作數據表格。分析數據均以平均值±標準差(mean±SD)表示。所有數據用SPSS10.0forWindow軟件進行顯著性檢驗。3.3DPOAE實驗結果：根據實驗數據可知(見表6-8)，在高頻區(2844Hz-8040Hz)，組合物2、3單獨使用均有一定的復聰作用，但是當聯用組合物2、3時，如實驗組5的治療方案，藥效最佳(見表6、7)(P＜0.01)。此外，如表5所示，與對比例的五種處方相比，組合物2、3聯用的復聰效果要更好。其中，采用制備例3方法制得的復聰湯，其效果要優于采用對比例3-5方法制備的復聰湯，這說明在藥物炮制過程中，超聲及炒制都是必要步驟。此外，組合物2、3的聯用效果最佳，可使實驗動物聽力的高頻區基本恢復到正常水平。3.4ABR實驗結果：根據表9、表10可知，正常豚鼠的ABR平均閾值應當在20-30dBSPL，GM致聾后ABR閾值上升到43-57dBSPL，與正常豚鼠相比，數據有顯著性差異(P＜0.01)。組合物治療90天后，ABR的平均閾值均有不同程度的下降，其中，采用組合物2、3聯用的治療方案，ABR閾值基本恢復到正常程度，與正常組相比沒有顯著性差異(P＞0.05)。表5：對大慶素致聾豚鼠給藥分組和給藥情況表6：致聾實驗0日時正常組與慶大霉素致聾組致聾后DPOAE各頻率幅值(dBSPL,x±s)表7：致聾實驗90日后正常組與慶大霉素致聾普通組DPOAE各頻率幅值(dBSPL,x±s)表8：致聾實驗90日后對比例組DPOAE各頻率幅值(dBSPL,x±s)表9：致聾實驗0日時各組ABR反應域(dBSPL,x±s)組別耳數ABR反應域14024.64±4.8324052.53±6.12表10：致聾實驗90日后各組ABR反應域(dBSPL,x±s)效果例2掃描電鏡觀察方法：對實驗中，對照組和實驗組5進行掃描電鏡的觀察。步驟如下。將取材的左側耳蝸樣品用緩沖液把組織表面洗凈，在解剖顯微鏡下(OLYMPUS，TOKYO，297261)，用纖細鋼針在耳蝸頂部打一小孔，一定要挑破前庭膜，再挑破圓窗膜和卵圓窗膜，并去除鐙骨及足板，用細滴管將2.5％戊二醛固定液從蝸尖小孔和圓窗卵圓窗反復滴灌3-5次，明顯看到液體從兩窗流出。將樣品浸泡在固定液中，置于4℃冰箱中4小時。置于0.1MPB緩沖液中，在解剖顯微鏡下在耳蝸各回骨壁鉆孔，使耳蝸各回與固定液相通，再浸泡于固定液中4小時。用0.1MPB漂洗三次后，用1％OsO4后固定2小時。用0.1MPB漂洗20-30分鐘。用乙醇梯度脫水，乙醇的濃度依次為30％-50％-70％-90％-100％(3次)，乙醇與乙酸異戊酯1:1的混合液10-20分鐘；純乙酸異戊酯10-20分鐘。臨界點干燥：裝樣：將樣品從乙酸異戊酯中放入濾紙6中，移入臨界點干燥儀的樣品杯(高壓容器)內，蓋上蓋并擰緊以防漏氣。注入液態二氧化碳，依次打開二氧化碳鋼瓶的排氣閥和儀器的進氣閥在0-10℃下，向樣品杯注入液態二氧化碳。當液態二氧化碳充至樣品杯容積的50％時，關閉儀器進氣閥，靜置15-20分鐘，讓乙酸異戊酯向液態二氧化碳中充分擴散，然后打開儀器打開儀器排氣閥門和進氣閥門，讓其邊排氣邊充氣10分鐘，再關閉排氣閥，繼續沖入液態二氧化碳至樣品杯的80％左右關閉進氣閥。加溫置換：將溫度調節設定在20℃處經15-20分鐘后，由于溫度升高，樣品杯內液態二氧化碳逐漸氣化，因此，壓力也隨之上升至7000Pa左右，樣品中的乙酸異戊酯將二氧化碳充分置換。氣化：將溫度旋鈕調至臨界溫度以上(35-40℃)，此時隨著溫度升高，樣品杯內的壓力也逐漸增加達到二氧化碳的臨界點，界面也隨之消失。當壓力達到7134Pa時經5分鐘后，即可排氣。排氣：在保持溫度不變的情況下(即不關電源)打開流量計的排氣閥門，以1.0L/分鐘的速度排氣，經2小時左右排氣完畢，樣品杯的壓力下降到零將溫度調節至室溫約5分鐘后，即可取出樣品。離子濺射鍍膜：將樣品用雙面膠帶樣品臺上(注意樣品觀察的方向性)。將樣品放入離子濺射儀的真空罩內，當真空罩內的真空度抽到10-1Pa時在陰極與陽極中間加上1000-3000V的直流電壓，兩極之間產生弧光放電的電場。在電場的作用下罩內殘余的氣體分子被電離為正離子和電子，正離子被陰極吸引轟擊金屬靶，激發出金屬離子和電子，并被陽極吸引附著在樣品表面而形成金屬導電膜。掃描電鏡觀察在S-2700ScanningElectionMicroscopeHITACHI下進行。實驗結果如圖1-4所示。圖1，圖2為慶大霉素致聾90天后的毛細胞形態，可見毛細胞表面的纖毛破損嚴重且不規則。圖3，圖4為致聾后，采用實驗組5制備的復聰湯進行治療90天后的情況，由圖可見，纖毛數量有了顯著的提升，排列也較為均勻，規則。以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。當前第1頁1 2 3