本發明涉及一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒及其制備方法與應用。

背景技術：

據世界衛生組織報道，癌癥已經成為威脅人類生命健康的一個主要原因，目前每年在全球奪去700多萬人的生命。癌癥治療的方法目前主要有如下幾種，如：化學治療、放射療法、外科手術、生物療法、基因治療、光動力學治療、癌癥疫苗等。發展比較早且使用廣泛的治療方法是化學治療和放射療法，其主要缺點在于：治療手段對癌細胞的靶向性不高，不能有效區分癌細胞和正常細胞，特別是化療及一些蛋白質藥物具有很高的細胞毒性，在治療的同時也對正常機體器官造成很大損傷。按照傳統的給藥方式，小分子藥物在體內隨機分布，真正蓄積到病患部位進而發揮藥效的只是少部分藥物，多數都被代謝排出體外，生物利用度很低。

靶向性藥納米物傳遞是一種既可以提高治療靶向性又比較容易實現的治療途徑，主要依靠藥物分子通過靶向特異性到達病變部位，殺滅致病病毒、修復受損組織或消除疾病癥狀。概括而言，靶向性藥物輸送體系具有如下主要優點：高度靶向性，減少毒副作用；增加非水溶性藥物在體內的分散量，穩定藥物在體內的存在；濃集藥物并能夠調節藥物的釋放速度；改變藥物給藥途徑，如將需要靜脈注射的藥物制成方便的口服藥物。目前關于體內靶向功能的藥物載體成功用于臨床報道極其少見，導致靶向藥物的臨床應用進展緩慢。

介孔二氧化硅納米粒子(MSNs)由于其緩釋、控釋的特點，被公認為是一種優良的抗癌藥物載體系統。介孔二氧化硅具有良好的生物相容性和生物可降解性，在人體無毒，無積累。由于其高比表面和大孔隙度的特點，介孔二氧化硅擁有高的藥物包封率和載藥量。因此它在生物醫學領域具有很誘人的應用前景和極高的商業價值，廣泛應用于負載抗癌藥的納米藥物。另外，通過對硅球表面的修飾，可以較方便引入其他基團，增加藥物性能。但是這種納米藥物不具有主動靶向的功能。靶向治療已經成為癌癥納米技術領域非常重要的研究方向。與正常細胞相比，腫瘤細胞表面常會出現一些受體的表達異常，這為靶向治療提供了基礎。

腫瘤細胞表面存在特異的葉酸受體((Folate Receptor，FR)，可專一性識別含有葉酸的載體，并與之特異性結合，通過細胞內吞作用進入肝癌細胞并釋放藥物。靶向配體的導入要求納米粒子表面有可鏈接的反應官能團，在納米藥物表面修飾一層聚多巴胺(polydopamine，pD，PDA)被認為是一種在納米藥物表面引入化學反應官能團較簡單的方法，多巴胺的分子結構如下：

技術實現要素：

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒。

本發明的第二個目的是提供一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的制備方法。

本發明的第三個目的是提供一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的應用。

本發明的技術方案概述如下：

本發明一個方面提供了一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的制備方法，其特征是包括如下步驟：

1)將介孔二氧化硅和藥物溶于溶劑中，反應至完全，分離獲得載有藥物的介孔二氧化硅初始納米粒；

2)將步驟1)所得介孔二氧化硅初始納米粒加入溶液中，并加入多巴胺鹽酸鹽，反應至完全，分離獲得載有藥物的被聚多巴胺包裹的介孔二氧化硅納米粒；

3)將步驟2)所得載有藥物的被聚多巴胺包裹的介孔二氧化硅納米粒加入弱堿水溶液，依次加入還原劑和靶向配體巰基-聚乙二醇-葉酸，反應至完全后分離獲得葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒。

在本發明的技術方案中，所述藥物為抗腫瘤藥物，優選為紫杉醇、多烯紫杉醇、阿霉素、香豆素-6、順鉑、5-氟尿嘧啶、喜樹堿、布洛芬或10-羥基喜樹堿。

在本發明的技術方案中，權利要求1中的溶劑選自能夠溶解藥物的溶劑，優選為水溶液或有機試劑，更優選為水、緩沖鹽溶液、丙酮、二氧六環、二甲基亞砜、二氯甲烷、乙腈、四氫呋喃或N,N-二甲基甲酰胺。

在本發明的技術方案中，步驟1)中介孔二氧化硅與藥物的比例為，介孔二氧化硅：藥物＝10：1-10，優選地，步驟1)中藥物加入溶液中的濃度為0.2mg/ml-5mg/ml。

在本發明的技術方案中，步驟2)中加入多巴胺鹽酸鹽至其濃度為0.2-1.0mg/mL。

在本發明的技術方案中，步驟2)中的溶液選自pH＝8-9的PBS緩沖溶液、Tris緩沖溶液、碳酸鈉水溶液、碳酸氫納水溶液或氫氧化鈉水溶液。

在本發明的技術方案中，步驟3)中弱堿性溶液的pH為8.5～12，優選地，弱堿性溶液選自PBS緩沖溶液、Tris緩沖溶液、碳酸鈉水溶液、碳酸氫納水溶液或氫氧化鈉水溶液；

在本發明的技術方案中，步驟3)中的還原劑選自三(2-羧乙基)膦。

在本發明的技術方案中，步驟3)中加入還原劑至其濃度為0.1～1mg/mL，加入巰基-聚乙二醇-葉酸至其濃度為0.1～10mg/mL；優選地，步驟1)和步驟2)中納米粒加入溶液中的濃度為0.1mg/ml-1mg/ml。

在本發明的技術方案中，步驟1)或步驟2)中的分離為機械分離，選自離心分離、過濾分離。

本發明另一個方面提供了前述制備方法制備獲得的葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒。

本發明再一個方面提供了葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米在制備治療抗腫瘤的藥物中的用途，或在作為藥物靶向傳遞載體的藥物中的用途。

在本發明的一個具體技術方案中，提供了一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的制備方法，包括如下步驟：

(1)按比例，稱取100mg介孔二氧化硅和10～100mg的親水或疏水性藥物，溶于8～10ml去離子水(親水性藥物)或2～8ml有機溶劑(疏水性藥物)中，在攪拌條件下，反應6～24小時，10000～20000rpm離心15～30min，棄上清液，洗滌，沉淀經真空干燥得載有藥物的介孔二氧化硅初始納米粒；

(2)按1mg～10mg:1mL的比例將所述初始介孔二氧化硅納米粒重懸于10mM，pH＝8.5的Tris緩沖液中，加入多巴胺鹽酸鹽使濃度為0.2～1.0mg/mL，反應3～12小時，10000～20000rpm離心15～30min，收集沉淀，用去離子水洗滌，真空干燥，獲得載有藥物的被聚多巴胺包裹的介孔二氧化硅納米粒；

(3)按1mg～10mg:1mL的比例將載有藥物的被聚多巴胺包裹的納米粒分散在pH為8.5～12的弱堿水溶液中，加入三(2-羧乙基)膦使濃度為0.1～1mg/mL，加入靶向配體巰基-聚乙二醇-葉酸使濃度為0.1～10mg/mL，反應3～12小時，10000～20000rpm離心15～30min，收集納米粒子，用去離子水洗滌，冷凍干燥得葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒。

在本發明中所用的巰基-聚乙二醇-葉酸為市售產品，其分子量為1000-5000，優選為2000。

有益效果

本發明的葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向納米粒的制備方法簡單，無污染。所獲得的葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向納米粒具有良好腫瘤靶向性、生物相容性以及生物可降解性，實驗證明，可靶腫瘤細胞，并對腫瘤有治療作用。

附圖說明

圖1為動態光散射測的實施例1制備的葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向納米粒MSN-DOX@PDA-PEG-FA(載阿霉素)粒度分布。

圖2為實施例1制備的葉酸和聚多巴胺修飾的宮頸癌靶向納米粒MSN-DOX@PDA-PEG-FA(載阿霉素)的透射電子顯微鏡(TEM)圖譜。

圖3為載阿霉素(DOX)的MSNs、MSNs-DOX和MSNs-DOX@PDA的氮氣吸附/脫附曲線。

圖4為載阿霉素MSNs-DOX、MSNs-DOX@PDA、MSNs-DOX@PDA-PEG-FA的體外粒釋放曲線。

圖5為空白MSNs、MSNs@PDA-PEG-FA納米粒(與載藥納米粒相同納米粒懸液濃度)在72小時對Hela細胞的細胞活性實驗結果。

圖6為載阿霉素MSNs-DOX、MSNs-DOX@PDA、MSNs-DOX@PDA-PEG-FA與空白MSNs、MSNs@PDA、MSNs@PDA-PEG-FA納米粒(與載藥納米粒相同納米粒懸液濃度)72小時內對Hela細胞的細胞活性實驗結果，商品化的阿霉素DOX做對比。

圖7為激光共聚焦掃描電子顯微鏡(CLSM)觀察用載阿霉素的納米粒孵育2小時的Hela細胞。細胞核用DAPI染成藍色，載阿霉素納米顆粒是紅色的，分別通過DAPI通道和Cy3通道觀察細胞攝取情況。

圖8為載阿霉素的納米粒對腫瘤的抑制效果圖。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步闡述，但本發明并不限于以下實施例。所述方法如無特別說明均為常規方法。所述原材料如無特別說明均能從公開商業途徑而得。

實施例1

一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱取100mg介孔二氧化硅MSNs和10mg的阿霉素，溶于8ml去離子水中，在攪拌條件下，避光反應6小時，20000rpm離心15min，棄上清液，用去離子水洗滌，以除去游離的阿霉素，沉淀經真空干燥得載阿霉素的介孔二氧化硅初始納米粒MSNs-DOX；

(2)按5mg:1mL的比例將所述初始介孔二氧化硅納米粒MSNs-DOX重懸于10mM，pH＝8.5的Tris緩沖液中，加入多巴胺鹽酸鹽至其濃度為0.5mg/mL，避光反應3小時，10000rpm離心30min，收集沉淀，用去離子水洗滌，以除去未反應的多巴胺鹽酸鹽，真空干燥后獲得載阿霉素的被聚多巴胺包裹的介孔二氧化硅納米粒MSNs-DOX@PDA；

(3)按5mg:1mL的比例將步驟(2)獲得的MSNs-DOX@PDA分散在pH為8.5的碳酸氫鈉水溶液中，加入三(2-羧乙基)膦使濃度為0.1mg/mL，加入靶向配體巰基-聚乙二醇-葉酸(M＝2000)使濃度為5mg/mL，避光反應3小時，10000離心30min，收集納米粒子，用去離子水洗滌，冷凍干燥得葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒MSNs-DOX@PDA-PEG-FA(載阿霉素(Doxorubicin，DOX))。

步驟(1)，步驟(2)，步驟(3)獲得的納米粒的Zeta電位(Zetasizer Nano ZS)分別在-16mV、-7mV和-5mV左右，表面電荷的絕對值比較高，顆粒之間相互排斥作用較強，因而在分散相中高度穩定。

為測試納米粒子的載藥量，在制備納米粒子的過程中，所有的上清液和清洗液均被收集混合，收集的樣品經0.45μm濾膜過濾后，用HPLC測試溶液中藥品濃度。HPLC使用反相C-18色譜柱，流動相為磷酸鹽緩沖溶液(25mmol/L Na₂HPO₄ 30mmol/L NaH₂PO₄,pH 5.0)：乙腈：水(30:50:20,v/v/v)，流動相使用前經0.45μm濾膜過濾，并超聲處理。每次進樣20μl，流動相流速為1mL/min，紫外波長為233nm。測得三種納米粒子的載藥量分別為10.53％、8.76％、7.82％。

如圖1所示，動態光散射測的實施例1制備的納米粒MSNs-DOX@PDA-PEG-FA(載阿霉素)粒度分布較均勻，平均粒徑大約在200nm左右。

如圖2所示，實施例1制備的納米粒MSNs-DOX@PDA-PEG-FA(載阿霉素)的透視電鏡結果，可以看出納米粒子粒徑呈單一分布，形狀為球形，表面有規則分布的孔道，粒子粒徑大約在200nm左右。

如圖3所示，通過BJH法計算出的納米粒子的孔徑大小。可以看出，空白納米粒MSNs的孔徑約為2.56nm，載入阿霉素(DOX)以后MSNs-DOX的孔徑減小至2.32nm，當載藥以后的納米粒包被多巴胺得到的MSNs-DOX@PDA孔徑進一步減小到了2.07nm。

如圖4所示，透析法測定納米粒的粒緩釋曲線，實施例1各步驟獲得的三種納米粒子各15mg分別分散于5ml釋放介質PBST溶液(由8.5g NaCl、2.2g Na₂HPO₄、0.3g NaH₂PO₄、1.0g吐溫-80和去離子水1000ml組成，并經高壓滅菌而得，調節pH為5.6。)中，形成懸液。將納米顆粒懸液置于透析袋中，封好袋口。密閉的透析袋放入50ml離心管中，加入15ml PBST，置于恒溫水浴搖床中于37℃，120rpm振蕩。在一定時間間隔內，從離心管中取出10ml溶液用于分析，同時補充等量的新鮮PBST于離心管中。收集的樣品經0.45μm濾膜過濾后，用HPLC測試溶液中藥品濃度，測試條件和測載藥量時所用HPLC的條件相同。根據數據繪制載藥納米顆粒體外釋放曲線，所得結果見圖4。圖4顯示載阿霉素MSNs-DOX、MSNs-DOX@PDA、MSNs-DOX@PDA-PEG-FA的體外粒釋放曲線，由圖可見，7天后，三種納米粒產品的體外粒釋放率分別達到了46.9％,37.2％和38.3％，三種納米粒具有相似的釋放曲線，呈兩相釋放特征并伴隨初始的“突釋效應”，易滿足臨床要求。

如圖5和圖6分別為納米粒在24小時和48小時對宮頸癌細胞Hela細胞毒性結果，采用MMT發測定該納米粒子的細胞毒性：將Hela細胞(ATCC,Rockville,MD)接種于96孔細胞培養板中，細胞培養12h貼壁后，棄去陳舊培養基，用PBS沖洗一次，加入待測樣品、陽性對照、陰性對照分別培養24h、48h。在規定的時間間隔后，棄去陳舊培養基，用PBS沖洗一次，每孔加入100μl含MTT 1mg/ml的細胞培養基，37℃孵育4h后，棄去MTT，每孔加入100μl的二甲基亞砜(DMSO)，黑暗37℃培養2h，振蕩10min，用酶標儀測定490nm波長的吸光度。

結果表明，不載藥的納米粒MSN@PDA-PEG-FA具有良好的生物相容性，因為在不同納米粒懸液濃度下它對Hela細胞沒有明顯的毒性；而載阿霉素的三種納米粒具有明顯的細胞毒性。

此外，MTT實驗結果說明載阿霉素的MSN-DOX、MSN-DOX@PDA和MSN-DOX@PDA-PEG-FA對Hela細胞的毒性具有時間和濃度依賴性。

將Hela細胞懸液均勻接種于6孔細胞培養板中，再加入1ml培養基，37℃、5％CO₂孵箱中培養24h。于Hela細胞中加入5μg/ml的載阿霉素的納米顆粒，繼續培養2h。另外，在MSN-DOX@PDA-PEG-FA組同時加入葉酸作為受體競爭實驗觀測細胞對納米粒子的攝取情況，來觀察MSN-DOX@PDA-PEG-FA的靶向情況。納米粒子與細胞孵育相應的時間后，去除培養基，用冰冷的PBS沖洗三次，加入多聚甲醛固定細胞20min，棄去多聚甲醛，加入DAPI染液孵育5min，再用PBS沖洗三次，可以在細胞攝取實驗中通過對細胞核的定位來確定載阿霉素納米粒在細胞中的位置。

圖7是用激光共聚焦掃描電子顯微鏡觀察Hela細胞對載阿霉素的兩種納米顆粒(MSN-DOX@PDA和MSN-DOX@PDA-PEG-FA)的攝取結果。從圖中可以看出，僅僅在與細胞孵育2h后，納米粒就已經被細胞所攝取，并且與沒有葉酸修飾的納米粒子MSN-DOX@PDA相比，加入載阿霉素的葉酸和聚多巴胺修飾的MSNs-DOX@PDA-PEG-FA一組顯示出更強的熒光信號。但是當MSN-DOX@PDA-PEG-FA同時加入葉酸后，則熒光減弱。這些結果表明制備的MSN-DOX@PDA-PEG-FA有較好的肝臟靶向性。

實施例2

一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱取100mg介孔二氧化硅MSNs和2mg阿霉素，溶于8ml去離子水中，在攪拌條件下，反應6小時，20000rpm離心15min，棄上清液，用去離子水洗滌，以除去游離的阿霉素，沉淀真空干燥得載阿霉素的介孔二氧化硅初始納米粒MSNs-DOX；

(2)按1mg:1mL的比例將所述初始介孔二氧化硅納米粒MSNs-DOX重懸于10mM，pH＝8.5的PBS緩沖液中，加入多巴胺鹽酸鹽使濃度為0.2mg/mL，反應5小時，20000rpm離心15min，收集沉淀，用去離子水洗滌，以除去未反應的多巴胺鹽酸鹽，真空干燥后得載阿霉素的被聚多巴胺包裹的介孔二氧化硅納米粒MSNs-DOX@PDA；

(3)按1mg:1mL的比例將步驟(2)獲得的MSNs-DOX@PDA分散在pH為10的PBS緩沖溶液中，加入三(2-羧乙基)膦使濃度為0.2mg/mL，加入靶向配體巰基-聚乙二醇-葉酸(M＝2000)使濃度為10mg/mL，反應5小時，20000離心15min，收集納米粒子，用去離子水洗滌，冷凍干燥得葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒MSNs-DOX@PDA-PEG-FA(載阿霉素)。

圖8顯示的是載阿霉素的納米粒子(MSNs-DOX@PDA-PEG、MSNs-DOX@PDA-PEG-FA)體內抑制腫瘤生長的效果。將實驗動物(4-5周齡)隨機分為五組，每只動物右側腋下注射2×106Hela細胞，待腫瘤長到體積約80mm3左右的時候開始腹腔注射治療，一組注射saline作為空白對照，一組注射商業化的阿霉素，其他三組分別注射不載藥的空白納米粒子MSNs@PDA-PEG-FA和載DOX的MSNs-DOX@PDA-PEG、MSNs-DOX@PDA-PEG-FA分別在0、4、8、12天進行注射，16天后將實驗動物處死，分離出移植瘤。如圖8所示，可以看出DOX和兩種載藥的納米粒子都較為明顯的抑制了腫瘤的生長，兩種載藥的納米粒子的抑制效果要比DOX抑制效果好，其中載DOX的MSNs-DOX@PDA-PEG-FA表現出最好的治療效果。

實施例3

一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱取100mg介孔二氧化硅MSNs和20mg的紫杉醇，溶于10ml二甲基亞砜中，在攪拌條件下，反應12小時，15000rpm離心15min，棄上清液，用去離子水洗滌，以除去游離的紫杉醇和溶劑二甲基亞砜，沉淀真空干燥得載紫杉醇的介孔二氧化硅初始納米粒MSNs-DTX；

(2)按10mg:1mL的比例將所述初始介孔二氧化硅納米粒MSNs-DTX重懸于10mM，pH＝8.5的氫氧化鈉水溶液中，加入多巴胺鹽酸鹽使濃度為1.0mg/mL，避光反應12小時，15000rpm離心20min，收集沉淀，用去離子水洗滌，以除去未反應的多巴胺鹽酸鹽，真空干燥后得載紫杉醇的被聚多巴胺包裹的介孔二氧化硅納米粒MSNs-DTX@PDA；

(3)按10mg:1mL的比例將步驟(2)獲得的MSNs-DTX@PDA分散在pH為10的Tris緩沖溶液中，加入三(2-羧乙基)膦使濃度為0.1mg/mL，加入靶向配體巰基-聚乙二醇-葉酸(M＝2000)使濃度為1mg/mL，避光反應3小時，10000離心30min，收集納米粒子，用去離子水洗滌，冷凍干燥得葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒MSNs-DTX@PDA-PEG-FA(載紫杉醇(Paclitaxel，DTX))。

實驗證明，本實施例所獲得的葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒MSNs-DTX@PDA-PEG-FA的表征數據與實施例1無實質性差別。

實施例4

一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱取100mg介孔二氧化硅MSNs和20mg的地昔帕明，溶于10ml二氧六環中，在攪拌條件下，反應24小時，20000rpm離心15min，棄上清液，用去離子水洗滌，以除去游離的地昔帕明，沉淀真空干燥得載地昔帕明的介孔二氧化硅初始納米粒MSNs-DES；

(2)按5mg:1mL的比例將所述初始介孔二氧化硅納米粒MSNs-DES重懸于10mM，pH＝8.5的Tris緩沖液中，加入多巴胺鹽酸鹽使濃度為0.5mg/mL，反應3小時，15000rpm離心20min，收集沉淀，用去離子水洗滌，以除去未反應的多巴胺鹽酸鹽，真空干燥后得載地昔帕明的被聚多巴胺包裹的介孔二氧化硅納米粒MSNs-DES@PDA；

(3)按2mg:1mL的比例將步驟(2)獲得的MSN@PDA分散在pH為10的碳酸鈉水溶液中，加入三(2-羧乙基)膦使濃度為0.1mg/mL，加入配體巰基-聚乙二醇-葉酸(M＝2000)使濃度為1mg/mL，反應2小時，15000離心20min，收集納米粒子，用去離子水洗滌，冷凍干燥得葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒MSNs-DES@PDA-PEG-FA(載地昔帕明(Desipramine，DES))。

實驗證明，本實施例所獲得的葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒MSNs-DES@PDA-PEG-FA的表征數據與實施例1無實質性差別。

實施例5

一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱取100mg介孔二氧化硅MSNs和10mg10-羥基喜樹堿(OPT)粉末溶于10ml乙腈中，在攪拌條件下，反應24小時，10000rpm離心30min，棄上清液，用去離子水洗滌三次以除去游離的10-羥基喜樹堿，沉淀真空干燥得載10-羥基喜樹堿的初始納米粒MSNs-OPT；

(2)按2mg:1mL的比例將所述初始納米粒MSNs-OPT重懸于10mM，pH＝8.5的碳酸氫鈉水溶液中，加入多巴胺鹽酸鹽使濃度為0.5mg/mL，反應3小時，20000rpm離心15min，收集沉淀，用去離子水洗滌，真空干燥后得載10-羥基喜樹堿的被聚多巴胺包裹的納米粒MSNs-OPT@PDA；

(3)按2mg:1mL的比例將步驟(2)獲得的MSNs-OPT@PDA分散在pH為9的碳酸鈉水溶液中，加入靶向配體巰基-聚乙二醇-葉酸(M＝2000)使濃度為1mg/mL，反應2小時，15000rpm離心20min，收集納米粒子，用去離子水洗滌，冷凍干燥得葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向納米粒MSNs-OPT@PDA-PEG-FA(載10-羥基喜樹堿)。

實驗證明，本實施例所獲得的葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒MSNs-OPT@PDA-PEG-FA的表征數據與實施例1無實質性差別。

實施例6

一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱取100mg介孔二氧化硅MSNs和2mg布洛芬(Brufen)，溶于8ml二氯甲烷中，在攪拌條件下，反應6小時，20000rpm離心15min，棄上清液，用去離子水洗滌，以除去游離的布洛芬，沉淀真空干燥得載布洛芬的介孔二氧化硅初始納米粒MSNs-Brufen；

(2)按1mg:1mL的比例將所述初始介孔二氧化硅納米粒MSNs-Brufen重懸于10mM，pH＝8.5的PBS緩沖液中，加入多巴胺鹽酸鹽使濃度為0.2mg/mL，反應5小時，20000rpm離心15min，收集沉淀，用去離子水洗滌，以除去未反應的多巴胺鹽酸鹽，真空干燥后獲得載布洛芬的被聚多巴胺包裹的介孔二氧化硅納米粒MSNs-Brufen@PDA；

(3)按1mg:1mL的比例將步驟(2)獲得的MSNs-Brufen@PDA分散在pH為10的PBS緩沖溶液中，加入三(2-羧乙基)膦使濃度為0.2mg/mL，加入靶向配體葉酸巰基-聚乙二醇-葉酸(M＝2000)使濃度為10mg/mL，反應5小時，20000離心15min，收集納米粒子，用去離子水洗滌，冷凍干燥得葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒MSNs-Brufen@PDA-PEG-FA(載布洛芬)。

實施例7

一種葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱取100mg介孔二氧化硅MSNs和2mg 5-氟尿嘧啶(5-FU)，溶于10ml N,N-二甲基甲酰胺中，在攪拌條件下，避光反應12小時，20000rpm離心15min，棄上清液，用去離子水洗滌三次以除去游離的5-氟尿嘧啶，沉淀真空干燥得載5-氟尿嘧啶的初始納米粒MSNs-5-FU；

(2)按2mg:1mL的比例將所述初始納米粒MSNs-5-FU重懸于10mM，pH＝8.5的Tris緩沖液中，加入多巴胺鹽酸鹽使濃度為1.0mg/mL，反應3小時，20000rpm離心15min，收集沉淀，用去離子水洗滌，真空干燥后獲得載5-氟尿嘧啶的被聚多巴胺包裹的納米粒MSNs-5-FU@PDA；

(3)按2mg:1mL的比例將步驟(2)獲得的MSNs5-FU@PDA分散在pH為10的碳酸氫鈉水溶液中，加入三(2-羧乙基)膦使濃度為0.2mg/mL，加入靶向配體巰基-聚乙二醇-葉酸(M＝2000)使濃度為1mg/mL，反應2小時，15000rpm離心20min，收集納米粒子，用去離子水洗滌，冷凍干燥得葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向納米粒MSNs-5-FU@PDA-PEG-FA(載5-氟尿嘧啶)。

實驗證明，本實施例所獲得的葉酸和聚多巴胺修飾的腫瘤靶向介孔二氧化硅納米粒MSNs5-FU@PDA-PEG-FA的表征數據與實施例1無實質性差別。

本實施例中還可以采用四氫呋喃和N,N-二甲基甲酰胺等有機溶劑。