本發明屬于食品、營養制劑和醫藥制劑技術領域，具體提供了一種脂質體口服制劑及其制備方法，尤其是涉及一種阿可拉定脂質體口服制劑及其制備方法。

背景技術：

阿可拉定，又名淫羊藿素或者淫羊藿苷元，是從中藥淫羊藿的干燥葉中提取的淫羊藿苷經酶轉化得到的衍生物單體物質，具體結構式如式(1)所示：

在申請號為201510127652.6和201510126477.9的中國專利申請中提到了阿可拉定在制備用于治療gp130和gp80相關肝癌藥物中的用途。在申請號為201410472236.5的中國專利申請中提到了阿可拉定在制備用于抑制肝癌干細胞藥物中的用途。在申請號201480039760.1的中國專利中提到阿可拉定在制備用于治療急性髓性白血病、急性淋巴白血病或者自身免疫系統疾病的藥物中的用途。阿可拉定在水中溶解性極差，易受光照降解，且口服時生物利用度非常低，在申請號為201310526018.0的中國專利中提到利用植物油和助懸劑來制備阿可拉定混懸劑或者軟膠囊，但大量油脂攝入對于病人的營養健康極為不利，因此需要制備一種既能提高阿可拉定的生物利用度，同時可通過風味調香等手段提高產品口感的水相口服制劑。

脂質體傳遞系統具有良好的水分散性和生物相容性、毒性小、安全性高、無免疫抑制作用、緩釋性和靶向釋放性等諸多優勢，經由口服攝入進入人體胃腸道后可與分泌的膽汁鹽組成膽汁鹽微粒，可同時將包埋的水溶性和脂溶性生物活性物質擴散到小腸上皮黏膜細胞，提高人體對功能因子的吸收能力。因此，開發阿可拉定脂質體口服制劑，可成為解決口服阿可拉定生物利用度不高等問題的良好途徑。

在申請號為200910025047.2的中國專利中公開了一種淫羊藿苷元脂質體及其制備方法，其質量組成為大豆卵磷脂50％～85％，膽固醇10％～35％，淫羊藿苷元2％～25％，淫羊藿苷元脂質體物理穩定性較好，放置較長時間后未見分層絮凝現象。但淫羊藿苷元與阿可拉定在分子結構上有較大差異，在甲醇和乙醇中的溶解性不同，且其主要針對的是骨質疏松癥的治療。在申請號201110061635.9的中國專利中公開了淫羊藿素脂質體及其制備方法，主要含有0.01～5％淫羊藿素、0.05～8％磷脂、0～8％增塑材料、0～20％支撐劑，余量為注射用水，通過ph值調節得到淫羊藿素脂質體注射液制劑，而目前阿可拉定脂質體口服制劑專利尚屬空白。

技術實現要素：

本發明公開的是一種阿可拉定脂質體口服制劑及其制備方法，該劑型一方面克服了現有的阿可拉定油懸制劑在攝食中產生的高油脂攝入問題，另一方面也解決了阿可拉定直接口服進入消化系統后被胃液環境直接破壞，同時提供優質大豆卵磷脂和蛋黃卵磷脂的攝入，使阿可拉定能夠有效傳遞到小腸吸收部位，拓展其在口服制劑中的應用。

本發明的目的是提供一種阿可拉定脂質體口服制劑及其制備方法，該制劑主要包括阿可拉定、卵磷脂、膜結構調節劑和非離子型表面活性劑，所述口服制劑為含阿可拉定脂質體的磷酸鹽緩沖水相溶液。

本發明公開的阿可拉定脂質體口服制劑，包括以下質量比例的原料：

每100ml液體制劑中，阿可拉定0.2～2.4％，卵磷脂0.4～12％，膜結構調節劑0.1～1.2％，非離子型表面活性劑0.2％，以上均為質量比；

所述的卵磷脂為食品級大豆或蛋黃卵磷脂，磷脂純度達到80％以上；

所述的膜結構調節劑為膽固醇或β-谷甾醇；

所述的非離子型表面活性劑為吐溫-80、司盤-20、司盤-40或蔗糖酯，hlb值為6～16。

本發明阿可拉定脂質體口服制劑的制備方法，包括如下步驟：

1)將粉狀結晶型阿可拉定、卵磷脂、膜結構調節劑按比例加入到適量有機溶劑中，短時熱水浴超聲處理促進溶解，得到有機相溶液；

2)將適量表面活性劑加入100ml磷酸鹽緩沖溶液(0.01mol/l，ph7.4)中使其充分溶解，并水浴加熱至40～50℃(高于磷脂的相變溫度)，形成水相溶液；

3)將有機相溶液通過真空濃縮法除去有機溶劑(溫度45～55℃，轉速100～500rpm)，在圓底玻璃燒瓶底部形成均勻的脂質膜后，加入預熱的水相溶液，通過手搖法或者水浴超聲處理將脂質膜洗脫下來并充分水化，得到粗阿可拉定脂質體混懸液；

4)將粗阿可拉定脂質體混懸液靜置冷卻至室溫后，利用超聲均質機的冰浴超聲處理或者通過高壓均質機的乳化得到粒徑較小且分布均勻的阿可拉定脂質體口服制劑。

本發明的效果在于，通過對阿可拉定進行脂質體包埋后，使其在被人體攝食進入消化系統后免受胃液低酸環境的破壞，能夠有效傳遞到小腸吸收部位，提高阿可拉定脂質體口服制劑的生物利用度。

本發明制備的阿可拉定脂質體口服制劑在大鼠灌胃體內吸收研究中，較阿可拉定植物油混懸劑，血漿藥物濃度達峰時間(tmax)略低，說明脂質體口服制劑吸收較快，起效更迅速，最高血漿藥物濃度(cmax)、血漿生物半衰期(t1/2)、藥時曲線下面積(auc0～24)和生物利用度(f％)均偏高，說明阿可拉定脂質體口服制劑在大鼠灌胃吸收中表現良好。

本發明制備的阿可拉定脂質體口服制劑在比格犬(與人體有類似的低吸收率)灌胃體內吸收研究中，較阿可拉定植物油混懸劑，最高血漿藥物濃度(cmax)、血漿生物半衰期(t1/2)和藥時曲線下面積(auc0～24)均偏高，說明脂質體口服制劑顯著提高了阿可拉定在體內的吸收。

本發明制備的阿可拉定脂質體口服制劑表現出良好的物理穩定性。

附圖說明

圖1阿可拉定脂質體口服制劑樣品照片。

圖2阿可拉定脂質體turbiscan物理穩定性掃描圖譜。

圖3阿可拉定脂質體口服制劑體外模擬消化前后的掃描電鏡照片。

圖4阿可拉定脂質體口服制劑與玉米油混懸制劑的sd大鼠灌胃后血漿中藥物濃度隨時間的變化曲線比較。

圖5阿可拉定脂質體口服制劑與玉米油混懸制劑的比格犬灌胃后血漿中藥物濃度隨時間的變化曲線比較。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明做進一步闡述說明，但本發明的保護范圍并不局限于下述的實施例。

除非另外說明，本文中的“非離子型表面活性劑”指的是溶于水中時不發生解離，其分子中的親油基團與離子型表面活性劑的親油基團大致相同，其親水基團主要是由一定數量的含氧基團組成，如羥基或聚氧乙烯鏈。

本文中考察脂質體粒度分布采用的是動態光散射法(dynamiclightscattering，dls)進行測定，其原理是基于粒子在介質中因不規則的布朗運動所產生的散射光強的波動推算出粒子的大小，測定前對樣品進行稀釋處理，減少多重光散射所造成的測量誤差。

本文中考察阿可拉定脂質體口服制劑的物理穩定性采用的是靜態光散射法(staticlightscattering，sls)進行測定，儀器工作原理是基于樣品投射光和被散射光隨時間動態變化關系，測試溫度為30℃，測試時長為12h。

本文中考察脂質體體在外模擬胃腸液中的穩定性，方法如下：取等量阿可拉定脂質體與模擬胃液混合，調節ph值為1.2，37℃恒溫水浴震蕩1h，再取適量經模擬胃液消化后的混合物與等量模擬腸液混合，調節ph值為7.0，37℃恒溫水浴震蕩2h；以1l模擬胃液為例，其中包括3.2g胃蛋白酶和2gnacl；以1l模擬腸液為例，其中包括6.8gk2hpo4、8.775gnacl、0.4g胰脂肪酶和5g膽鹽。

本文中sd大鼠和比格犬灌胃代謝實驗的考察方法如下：12只sd大鼠或比格犬，分成2組，每組6只，雌雄各半，第一組為阿可拉定玉米油混懸制劑組(對照組)，第二組為阿可拉定脂質體口服制劑組，灌胃前讓老鼠或比格犬適應環境至少3天，灌胃阿可拉定脂質體口服制劑，sd大鼠灌胃量為40mg(阿可拉定)/kg(體重)，比格犬灌胃量為20mg(阿可拉定)/kg(體重)；sd大鼠于灌胃前及灌胃后15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12小時和24小時進行靜脈穿刺采血，比格犬于灌胃前及灌胃后10分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12小時和24小時進行靜脈穿刺采血；血液樣品在2～8℃條件下離心10分鐘，轉速2000×g，獲得血漿并通過高效液相色譜測定血漿中阿可拉定含量。

實施例1

稱取阿可拉定100mg，大豆卵磷脂1g，膽固醇100mg，用20ml乙醚渦旋震蕩并充分溶解，形成有機相；將200mg吐溫-80溶解于100ml的磷酸鹽緩沖溶液(0.01mol/l，ph7.4)中并充分溶解，形成水相；將有機相通過減壓旋蒸除去乙醚，再利用預熱至50℃的水相水化蒸干的脂質膜，并用水浴超聲清洗機將其從圓底燒瓶中洗脫下來形成粗阿可拉定脂質體混懸液，并經超聲均質機冰浴乳化，超聲功率400w，超聲時間10min，得到阿可拉定脂質體口服制劑。

本實例制得的阿可拉定口服脂質體制劑包埋率為77.7％，平均粒徑為249.6±2.7nm，zeta電位為-43.3±2.2mv。

圖1和圖2分別是本實例制備的阿可拉定脂質體實物圖和基于靜態光散射法測定的turbiscan物理穩定性圖譜。

實施例2

稱取阿可拉定1g，大豆卵磷脂5g，膽固醇500mg，用50ml乙醚渦旋震蕩并充分溶解，形成有機相；將200mg吐溫-80溶解于100ml磷酸鹽緩沖溶液(0.01mol/l，ph7.4)中并充分溶解，形成水相；將有機相通過減壓旋蒸除去乙醚，再利用預熱至50℃的水相水化蒸干的脂質膜，并用水浴超聲清洗機將其從圓底燒瓶中洗脫下來形成粗阿可拉定脂質體混懸液，并經超聲均質機冰浴乳化，超聲功率400w，超聲時間10min，得到阿可拉定脂質體口服制劑。

本實例制得的阿可拉定口服脂質體制劑包埋率為84.8％，平均粒徑為284.3±26.3nm，zeta電位為-38.3±1.2mv。

圖3是本實例制備的阿可拉定脂質體及其經模擬胃腸液消化后的掃描電鏡照片。

實施例3

稱取阿可拉定1.2g，大豆卵磷脂12g，膽固醇1.2g，用30ml乙醚渦旋震蕩并充分溶解，形成有機相；將200mg吐溫-80溶解于100ml磷酸鹽緩沖溶液(0.01mol/l，ph7.4)中并充分溶解，形成水相；將有機相通過減壓旋蒸除去乙醚，再利用預熱至50℃的水相水化蒸干的脂質膜，并用水浴超聲清洗機將其從圓底燒瓶中洗脫下來形成粗阿可拉定脂質體混懸液，并經高壓均質機乳化，均質壓力50mpa，循環均質2次，得到阿可拉定脂質體口服制劑。

本實例制得的阿可拉定口服脂質體制劑包埋率為85.2％，平均粒徑為249.1±2.1nm，zeta電位為-46±2.4mv。

以實施例3制備得到的阿可拉定脂質體口服制劑灌胃sd大鼠，考察阿可拉定脂質體口服制劑的生物利用度。

實驗結果：第一組最高血漿藥物濃度cmax為6350±3105ng/ml，血漿藥物濃度達峰時間tmax＝1.1±0.7h，血漿生物半衰期t1/2＝4.1±2.3h，藥時曲線下面積auc0～24＝42492±17601ng*h/ml；第二組最高血漿藥物濃度cmax為12880±4629ng/ml，血漿藥物濃度達峰時間tmax＝0.8±0.2h，血漿生物半衰期t1/2＝5.3±2.8h，藥時曲線下面積auc0～24＝57183±29513ng*h/ml。

實驗結論：從上述實驗結果中可以看出，阿可拉定脂質體口服制劑比其玉米油混懸制劑吸收更快，進入sd大鼠體內的藥量更高，且藥物在體內的保留時間更長，有利于其在體內的營養及治療作用。

以實施例3制備得到的阿可拉定脂質體口服制劑灌胃比格犬，考察阿可拉定脂質體口服制劑的生物利用度，其中阿可拉定在比格犬中的吸收率偏低，與人體低吸收率相似。

實驗結果：第一組雌性最高血漿藥物濃度cmax為88±4.7ng/ml，血漿藥物濃度達峰時間tmax＝1.3±0.6h，血漿生物半衰期t1/2＝2.0±0.1h，藥時曲線下面積auc0～24＝295±68ng*h/ml；第一組雄性最高血漿藥物濃度cmax為80.6±20.8ng/ml，血漿藥物濃度達峰時間tmax＝1.3±0.6h，血漿生物半衰期t1/2＝5.3±1.4h，藥時曲線下面積auc0～24＝295±68ng*h/ml；第二組雌性最高血漿藥物濃度cmax為300±89ng/ml，血漿藥物濃度達峰時間tmax＝1.7±0.6h，血漿生物半衰期t1/2＝3.5±0.4h，藥時曲線下面積auc0～24＝1313±609ng*h/ml；第二組雄性最高血漿藥物濃度cmax為306±99ng/ml，血漿藥物濃度達峰時間tmax＝5.0±6.1h，血漿生物半衰期t1/2＝4.2h，藥時曲線下面積auc0～24＝2262±1369ng*h/ml。

實驗結論：從上述實驗結果中可以看出，阿可拉定脂質體口服制劑比其玉米油混懸制劑在比格犬體內吸收更快，進入體內的藥量更高，且藥物在體內的保留時間更長，有利于其在體內的營養及治療作用。

最后應當說明的是，以上實施例并非是對本發明保護范圍的限制，盡管參照實施例對本發明進行了詳細說明，但可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。