本發(fā)明具體涉及臘梅屬植物及其提取物在制備預(yù)防/治療由結(jié)核桿菌引起相關(guān)疾病的藥物的應(yīng)用，所述的臘梅屬植物包括柳葉臘梅、浙江臘梅和山臘梅，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
：

蠟梅屬柳葉蠟梅(chimonanthussalicifoliuss.y.hu)、浙江蠟梅(chimonanthuszhejiangensism.c.liu)或山臘梅(chimonanthusnitensoliv.)等為畬族民間習(xí)用藥,從北宋年間起其干燥葉就作為服用的食涼茶，近千年來用于治療和預(yù)防感冒?，F(xiàn)代研究又有進(jìn)展，其中，山臘梅提取物制備的顆粒制劑，有良好治療/預(yù)防感冒功效，已在市場(chǎng)銷售；柳葉蠟梅和浙江臘梅已載入2005和2015年的《浙江省中藥炮制規(guī)范》，主要成分為揮發(fā)油，含有1.8-桉葉素、β-蒎烯、α-萜品烯醇、芳樟烯、欖香醇等40多種成分。傳統(tǒng)用途：性味微苦，辛，涼，歸肺、脾、胃經(jīng)，用于治療感受風(fēng)寒而引起肚脹、肚痛腹瀉，因飲食不當(dāng)引起的消化不良、腹部脹痛和小兒疳積等癥狀。

結(jié)核病(tuberculosis，tb)是由結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis，mtb)引起的一種慢性致死性疾病，是危害人類健康和導(dǎo)致人類死亡的重大傳染性疾病，其致死率僅次于艾滋病(acquiredimmunodeficiencysyndrome，aids)。由于抗結(jié)核藥物的大量使用和抗結(jié)核作用位點(diǎn)的突變，導(dǎo)致耐多藥結(jié)核病(multidrug-resistanttuberculosis，mdr-tb)不斷出現(xiàn)。2011年全球有870萬人罹患tb，并有140萬人死亡(其中非艾滋病患者約100萬)。我國是全球22個(gè)tb流行最嚴(yán)重的國家之一，據(jù)2010年全國第五次結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查估計(jì)年發(fā)病人數(shù)為130萬，占全球新發(fā)病人數(shù)的14.3％，是全球第二大結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家。

目前結(jié)核病的治療周期較長，患者順應(yīng)性較差。一線抗結(jié)核藥物和二線抗結(jié)核藥物在臨床上廣泛使用，出現(xiàn)耐多藥結(jié)核桿菌，不能達(dá)到有效控制結(jié)核病。中藥的資源豐富、治療時(shí)重視整體協(xié)同、毒副作用小以及不易產(chǎn)生耐藥等特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì),使得抗結(jié)核中藥在日益嚴(yán)峻的結(jié)核治療方面展現(xiàn)出了越來越光明的應(yīng)用前景。

檢索藥理研究信息，未見柳葉蠟梅、浙江臘梅和山臘梅抗結(jié)核菌的研究報(bào)道。在研究過程中發(fā)現(xiàn)臘梅的提取物對(duì)結(jié)核桿菌有很好的抗菌活性。臘梅提取物多為簡(jiǎn)單的水提、醇提和水蒸氣蒸餾所得，僅見賀建云采用超臨界co2不加夾帶劑提取柳葉蠟梅中的物質(zhì)，因其具有低溫、快速、效率高、無污染、提取物純度高、易分離等優(yōu)點(diǎn)，適用于揮發(fā)油的提取。

本發(fā)明是研究臘梅提取物的制備方法和蠟梅提取物用于結(jié)核桿菌感染的治療、預(yù)防，并且研究適合其提取物的噴霧劑、吸入劑、軟膠囊、滴丸等制劑類型。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明概述

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種新的抗結(jié)核桿菌的藥物，具體而言，本發(fā)明提供了一種臘梅屬植物、臘梅屬植物提取物在制備抗結(jié)核桿菌的藥物中的應(yīng)用。

所述的臘梅科臘梅屬植物包括：柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅。

在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述的提取物為以下一種或多種：(1)水提物；(2)醇水混合提取物；(3)水蒸氣蒸餾揮發(fā)油；(4)超臨界二氧化碳萃取。

本發(fā)明第二方面提供了上述臘梅屬植物提取物的制備方法。

本發(fā)明第三方面公開含有臘梅屬植物提取物的制劑，所述的藥物與藥學(xué)上接受的輔料制成藥劑學(xué)上接受的口服制劑。

發(fā)明詳述

本發(fā)明第一方面提供了一種臘梅屬植物、臘梅屬植物提取物在制備抗結(jié)核桿菌的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明中所述的藥材或原藥材是指臘梅屬植物，具體包括柳葉臘梅、浙江臘梅、山臘梅。本發(fā)明中所述的生藥也是指臘梅屬植物，具體包括柳葉臘梅、浙江臘梅、山臘梅。

本發(fā)明的臘梅屬植物包括臘梅屬植物的鮮品或干品；臘梅屬植物的藥用部位選自臘梅屬植物的全株、地上部分、地下部分、莖、莖皮、花、葉、種子或任意組合；優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的地上部分、莖、莖皮、葉或任意組合；更優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的莖或葉；最優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的葉。

本發(fā)明的第二方面提供了臘梅屬植物提取物的制備方法。

在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述的中藥提取物為以下用水提、醇提、水蒸氣蒸餾及超臨界二氧化碳提取一種或多種：(1)水提物；(2)醇提物；(3)水蒸氣蒸餾揮發(fā)油；(4)超臨界二氧化碳提取物。

為了加快提取速度，提高提取收率，可以對(duì)臘梅屬原藥材進(jìn)行粉碎，粉碎后的平均粒徑優(yōu)選10-80目，更優(yōu)先是20-65目，最優(yōu)選是30-50目。

本發(fā)明提供的提取物的第一種制備方法：

所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材臘梅屬植物加入溶劑提取，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。

所述的溶劑：本領(lǐng)域常用的溶劑均可以用于本發(fā)明。優(yōu)選溶劑水和c1-c5的醇類。c1-c5的醇類選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或其混合物。選自水、無水乙醇、乙醇水溶液；更優(yōu)選溶劑選自乙醇水溶液。乙醇或乙醇水溶液和其他溶劑相比，具有低毒，防腐，污染小，價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，更適合于本發(fā)明應(yīng)于用醫(yī)藥工業(yè)化大生產(chǎn)。

乙醇水溶液的濃度(乙醇水溶液中含有的乙醇的體積百分比)：優(yōu)選30％-100％的乙醇水溶液，更優(yōu)選50％-95％的乙醇水溶液，最優(yōu)選60％-80％的乙醇水溶液，，最優(yōu)選75％的乙醇水溶液。

溶劑的量是指提取每公斤原藥材所用的溶劑量，即提取每公斤藥材計(jì)使用溶劑的重量(單位kg)或體積(單位l)。溶劑用量是原藥材用量的2-30倍；更優(yōu)選5-16倍；進(jìn)一步優(yōu)選6-15倍；最優(yōu)選8-10倍。

提取的溫度：優(yōu)選是室溫到溶劑回流的溫度；更優(yōu)選是40℃-溶劑回流的溫度；進(jìn)一步優(yōu)選是50℃-溶劑回流的溫度；最優(yōu)選是溶劑回流的溫度。

提取的次數(shù)：可以是1～5次；優(yōu)選是2～3次。

提取的時(shí)間：每次0.5～5小時(shí)；優(yōu)選每次0.5～3小時(shí)；更優(yōu)選每次1～3小時(shí)。

濃縮的溫度：可以是55～90：；優(yōu)選62～80優(yōu)；更優(yōu)選65～75以。

濃縮后稠膏的相對(duì)密度為1.1～1.5，優(yōu)選1.2～1.4。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)水提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的水提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-16倍的水提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-16倍的水提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)乙醇提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的65％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的60％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的60％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加入5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的水、無水乙醇、乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加入5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的水、無水乙醇、乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過濾并合并提取液，經(jīng)濃縮至相對(duì)密度為1.1～1.5(包括1.2～1.4)的稠膏，減壓干燥，即得。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的30～99％的乙醇水溶液回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過濾并合并提取液，60～90℃(包括65～75))濃縮至相對(duì)密度為1.1～1.5(包括1.2～1.4)的稠膏，減壓干燥，即得。

本發(fā)明提供的提取物的第二種制備方法：所述提取物是原藥材臘梅屬植物經(jīng)水蒸氣蒸餾并獲得的水蒸氣蒸餾揮發(fā)油。

本發(fā)明提供的提取物的第三種制備方法：所述提取物是原藥材經(jīng)超臨界二氧化碳提取并獲得。

本發(fā)明的超臨界提取物，其特征在于，所述提取物是原藥材臘梅屬植物經(jīng)二氧化碳超臨界提取，在分離釜中獲得提取物，提取的條件可以是一種或多種，例如：

(1)不加夾帶劑的提取物；

(2)加夾帶劑的提取物；

(3)不加夾帶劑提取后再加夾帶劑的提取物。

超臨界二氧化碳提取的條件如下：

萃取釜:

萃取溫度為30-70℃；優(yōu)選為35-60℃；更優(yōu)選為40-50℃；最優(yōu)選43-47℃。萃取溫度可以選自40℃，42℃，45℃，47℃，50℃。

萃取壓力為10-40mpa；優(yōu)選為13-35mpa；優(yōu)選為16-24mpa；更優(yōu)選為18-22mpa。萃取壓力可以選自15mpa，20mpa，20.6mpa，29.6mpa，30mpa。

萃取釜可以是1個(gè)或多個(gè)分離釜，例如1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)，4個(gè)，5個(gè)或更多。如果是多個(gè)萃取釜的，可以是并聯(lián)或串聯(lián)。為了盡量節(jié)約原藥材的加料和卸料時(shí)間，提高生產(chǎn)效率，優(yōu)選是多個(gè)萃取釜并聯(lián)。在一部分萃取釜加料或卸料的時(shí)候，另外的萃取釜同事進(jìn)行萃取。

萃取劑流速：

萃取劑二氧化碳的流速會(huì)對(duì)本發(fā)明的生產(chǎn)效率產(chǎn)生重大的影響。如果二氧化碳的流速過快，二氧化碳和萃取溶質(zhì)不能充分接觸，會(huì)降低每體積二氧化碳的萃取效率；如果二氧化碳的流速過慢，會(huì)降低單位時(shí)間的生產(chǎn)效率。因此，萃取劑二氧化碳的流速需要一個(gè)合適的流速。

萃取劑二氧化碳的流速為每公斤藥材每小時(shí)20-150升(以每公斤藥材每小時(shí)計(jì)，單位為l/h·kg生藥)，即20-150l/h·kg；優(yōu)選的萃取劑二氧化碳的流速為23-125l/h·kg；更優(yōu)選為33-80l/h·kg；進(jìn)一步優(yōu)選為50-70l/h·kg；最優(yōu)選為55-65l/h·kg。

萃取劑二氧化碳的流速可以選自23.1l/h·kg；23.8l/h·kg；28.5l/h·kg；32.3l/h·kg；32.8l/h·kg；36.2l/h·kg；38.3l/h·kg；35.3l/h·kg；44.8l/h·kg；50.7l/h·kg；55.4l/h·kg；75.6l/h·kg；82.2l/h·kg。

萃取時(shí)間分鐘(min)：30-400min，優(yōu)選120-160min，更優(yōu)選120-160min，最優(yōu)選120-160min。萃取時(shí)間可以是60-70min，70-80min，80-100min，110-120min，120-130min，140-150min，155-165min。例如萃取時(shí)間可以是62min，70min，83min，100min，120min，132min，145min，160min。

夾帶劑:

本發(fā)明的超臨界提取方案中，可以選擇性的使用夾帶劑或不使用夾帶劑；優(yōu)先是使用夾帶劑。

本領(lǐng)域常用的溶劑均可以作為本發(fā)明的夾帶劑。例如本發(fā)明的夾帶劑可以選自：0％-100％v/v的乙醇水溶液、甲醇，乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。本文中100％v/v的乙醇水溶液表示無水乙醇；本文中0％v/v的乙醇水溶液表示沒有醇的水。例如本發(fā)明的夾帶劑可以選自：水、無水乙醇、30％-100％v/v的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮。優(yōu)選的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％v/v的乙醇水溶液。更優(yōu)選的夾帶劑選自75％-95％v/v的乙醇水溶液。最優(yōu)選的夾帶劑選自95％v/v的乙醇水溶液。

夾帶劑的量(以每公斤藥材計(jì)為l/kg，kg/kg；或以每克藥材計(jì)為ml/g，g/g)：

夾帶劑的量為0.10-2.5l/kg；；優(yōu)選0.20-1.5l/kg；，更優(yōu)選0.30-0.80l/kg；最優(yōu)選0.40-0.60l/kg；

分離釜：

分離釜的溫度為25-70℃，優(yōu)選為30-60℃；更優(yōu)選為35-55℃，最優(yōu)選為40-50℃，。

分離釜的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃，41℃，42℃，43℃，44℃，45℃，46℃，47℃，48℃，49℃，50℃，51℃，52℃，53℃，54℃，55℃，56℃，57℃。

分離釜的壓力為2-17mpa；優(yōu)選為3-15mpa；更優(yōu)選為4-12mpa；最優(yōu)選為4.5-10mpa。

分離釜的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa，5.6mpa，5.7mpa，5.8mpa，6mpa，7mpa，8mpa，8.5mpa，9mpa，9.5mpa，10mpa。

分離釜可以是1個(gè)或多個(gè)分離釜，例如1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)，4個(gè)，5個(gè)或更多。如果是多個(gè)分離釜的，可以是并聯(lián)或串聯(lián)，為了盡量提高提取物的回收率，優(yōu)選是多個(gè)分離釜串聯(lián)。

分離釜i壓力和溫度：

分離釜i的溫度為30-70℃，優(yōu)選為50-60℃；更優(yōu)選為53-57℃；最優(yōu)選為55℃。分離釜i的溫度可以選自53℃，54℃，55℃，56℃，57℃。

分離釜i的壓力為4-17mpa；優(yōu)選為5-15mpa；更優(yōu)選為6-12mpa；最優(yōu)選為8-10mpa。分離釜i的壓力可以選自8mpa，8.5mpa，9mpa，9.5mpa，10mpa。

分離釜ii壓力和溫度：

分離釜ii的溫度為25-50℃，優(yōu)選為30-45℃；更優(yōu)選為32-42℃；最優(yōu)選為35-40℃。分離釜ii的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃。

分離釜ii的壓力為2-8mpa；優(yōu)選為3-7mpa；更優(yōu)選為4-6mpa；最優(yōu)選為4.5-5.5mpa。分離釜ii的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa。

分離iii壓力和溫度：

分離釜iii的溫度為25-50℃，優(yōu)選為30-45℃；更優(yōu)選為32-42℃；最優(yōu)選為35-40℃。分離釜iii的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃。

分離釜iii的壓力為2-8mpa；優(yōu)選為3-7mpa；更優(yōu)選為4-6mpa；最優(yōu)選為4.5-5.5mpa。分離釜iii的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa。

分離釜中的得到的提取物，就是本發(fā)明的臘梅屬植物提取物。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對(duì)原藥材不加夾帶劑的進(jìn)行超臨界提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為100-250kg/小時(shí)，萃取時(shí)間為90-300分鐘，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa，分離釜中的得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對(duì)原藥材加夾帶劑進(jìn)行超臨界提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa,加入夾帶劑，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為100-250kg/小時(shí)，萃取時(shí)間為90-300分鐘，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa；分離釜中的得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。

所述的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對(duì)原藥材先不加夾帶劑進(jìn)行超臨界提取后再加夾帶劑的進(jìn)行提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa；二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為100-250l/h·kg，萃取時(shí)間為90-300分鐘；放出分離釜中的提取物；再加入夾帶劑，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的保持流量為100-250l/h·kg，再萃取90-300分鐘；分離釜中再次得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。

所述的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。

本領(lǐng)域常用的干燥均可以用于本發(fā)明，例如：減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥、熱風(fēng)干燥、遠(yuǎn)紅外線干燥或微波干燥。或聯(lián)合使用上述一種或多種干燥方式。

本發(fā)明提供的提取物的第四種制備方法：所述提取物是原藥材經(jīng)二氧化碳超臨界提取后，其剩余的藥材再加入溶劑提取，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。具體的提取方法可以第一種方式相同。

在本發(fā)明中，術(shù)語“提取”可以是常溫下的浸漬，或者超臨界狀態(tài)下的提取，或者在升高的溫度下的提取(例如煎煮和/或回流)，或者這些操作方式的結(jié)合。還可以進(jìn)一步包括對(duì)提取物進(jìn)行進(jìn)一步處理，例如進(jìn)一步純化，例如除溶劑、沉淀除雜質(zhì)、溶劑萃取、樹脂吸附分離等。

如本文所述的，術(shù)語“提取物”將包括可用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明任何目的的任何純度的提取物，提取物的提取純度可以在較大的范圍內(nèi)變化。

本發(fā)明第三方面公開含有臘梅屬植物提取物的制劑，所述的藥物與藥學(xué)上接受的輔料制成藥劑學(xué)上接受的口服制劑。

本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述的制劑為柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅的提取物制劑。

本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述的制劑的組合物還包含一種或多種無毒生理學(xué)可接受的載體。所述的可接受的載體包括本領(lǐng)域公知的任何輔料及起控釋作用的輔料。常用的輔料包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、致孔劑、增塑劑、填充劑、增溶劑和乳化劑。稀釋劑可以是但不限于淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是但不限于水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是但不限于干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是但不限于滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇；增溶劑和乳化劑可以是但不限于乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油類(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯及它們的混合物。起緩控釋作用的輔料可以選自親水性凝膠材料、蠟脂類材料和不溶性材料的一種或多種。所述的親水性凝膠材料可以選自羥丙基甲基纖維素、卡波普、羧甲基纖維素鈉和海藻酸鹽，所述的蠟脂類材料可以選自十六醇、十八醇、蜂蠟、山崳酸甘油酯、硬脂酸和巴西棕櫚蠟，所述的不溶性材料可以選自乙基纖維素、丙烯酸樹脂、聚氧乙烯和聚乙烯。

本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，可向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。

本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述制劑包含柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅的提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成的制劑?？赏ㄟ^將組合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成適于人或動(dòng)物使用的任何劑型。該制劑可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。

本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述制劑優(yōu)選口服制劑、噴霧劑、吸入劑；更優(yōu)選噴霧劑、吸入劑。

有益技術(shù)效果

柳葉蠟梅超臨界加夾帶劑萃取物(lylj)、柳葉蠟梅超臨界不加夾帶劑萃取物(lylw)、柳葉臘梅揮發(fā)油(lyy)、浙江臘梅揮發(fā)油(zyy)和山臘梅揮發(fā)油(syy)對(duì)結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis)的最低抑菌濃度分別為0.312mg/ml、0.632mg/ml、1.169mg/ml、0.625mg/ml、0.625mg/ml,抑制效果顯著。

本發(fā)明提取物抗結(jié)核桿菌抗效果強(qiáng)度順序分別是：(1)超臨界加夾帶劑萃取物(lylj)>(2)超臨界不加夾帶劑萃取物(lylw)>(3)揮發(fā)油(lyy)>(4)醇提物>(5)水提物。

具體實(shí)施方式

提取物制備例

實(shí)施例1-11

水提：取粉碎后藥材，裝入圓底燒瓶中，分兩次加水回流提取。第一次加10-16倍水倍水，提取1小時(shí)后過濾，第二次加水8-12倍，提取1小時(shí)，合并兩次濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮或水浴鍋上濃縮，水浴75℃、轉(zhuǎn)速80rpm,濃縮至比重為1.18－1.22時(shí)，傾倒入不銹鋼盤中置減壓干燥烘箱65℃，真空烘干后粉碎。

醇提：取粉碎后藥材，裝入圓底燒瓶中，分兩次加乙醇回流提取。第一次加10倍乙醇，提取1小時(shí)后過濾，第二次加乙醇8倍，提取1小時(shí)，合并兩次濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，水浴65℃、轉(zhuǎn)速80rpm,濃縮至比重為1.18－1.22時(shí)，傾倒入不銹鋼盤中置減壓干燥烘箱65℃，真空烘干后粉碎。

揮發(fā)油：水提時(shí)，裝好揮發(fā)油提取器，待油產(chǎn)生后收集。柳葉蠟梅提取的揮發(fā)油編號(hào)lyy，浙江臘梅提取的揮發(fā)油編號(hào)zyy，山臘梅提取的揮發(fā)油編號(hào)syy。

詳細(xì)參數(shù)及結(jié)果如下：

實(shí)施例12(超臨界不加夾帶劑)

稱取6.4kgly，置于24l萃取釜中。稱取3.2kg95％乙醇，放置于副泵的儲(chǔ)箱中，開啟副泵(r＝9.1r/min),60min內(nèi)加夾帶劑結(jié)束。萃取釜ii、分離釜i、分離釜ii、分離釜iii的壓力分別為20.7mpa、8.5mpa、5mpa、5mpa，溫度分別為45℃、55℃、40℃、40℃，主泵的轉(zhuǎn)速r＝30.5r/min，二氧化碳流速為220-240l/h。萃取135min，后處理后，分離釜i收集到1.3g產(chǎn)品，分離釜ii收集到產(chǎn)物200.4g，編號(hào)lylj-2(2-6)，總收率3.15％。

實(shí)施例13(超臨界不加夾帶劑)

稱取6.5kgly，置于24l萃取釜中。壓力穩(wěn)定后，萃取開始。萃取釜ii、分離釜i、分離釜ii、分離釜iii的壓力分別為20mpa、8mpa、5mpa、5mpa，溫度分別為45℃、55℃、40℃、40℃，主泵的轉(zhuǎn)速r＝30.5r/min，二氧化碳流速為210-230l/h，萃取103min，后處理后，收集到紅褐色油狀物101g,收率2.05％，編號(hào)lylw(2-2)。

實(shí)施例14

在實(shí)施例13的基礎(chǔ)上，開啟副泵(r＝15.5r/min)，15min加入1.55kg95％乙醇，萃取110min，后處理后，分離釜i收集到產(chǎn)物113.6g，編號(hào)lylwj-1(2-3)，分離釜ii收集到產(chǎn)物25.1g，編號(hào)lylwj-2(2-3)，收率共2.29％。

藥理實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)例1抗結(jié)核菌篩選

1材料

1.1藥物

1.1.1受試樣品

表1.各個(gè)藥物配制濃度

樣品用二甲基亞砜(dmso)配成母液并稀釋成工作溶液備用。貯存溫度：4℃。

1.1.2.陽性對(duì)照：利福平(簡(jiǎn)稱：rif)。失效日期，2017.11；批號(hào)，r0808；amresco公司產(chǎn)品；純度＞95％(hplc)；紅色粉末狀；貯存溫度：-20℃。

1.1.3.陰性對(duì)照：溶劑二甲亞砜(dmso)。貯存溫度：常溫。

1.2菌種：本實(shí)驗(yàn)室制備的無毒力自主發(fā)光標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核菌autoluminescenth37ra(簡(jiǎn)稱alra)。

1.3核心儀器：glomax2020發(fā)光檢測(cè)儀：美國promega公司；生化培養(yǎng)箱(lrh-70)：上海恒科；臺(tái)式恒溫振蕩器(thz-d)：太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；電子天平(je3002)：上海浦春儀器公司。

2方法與結(jié)果

2.1方法：37℃培養(yǎng)alra菌液至對(duì)數(shù)期。用7h9培養(yǎng)基稀釋菌液，使發(fā)光值在15000-25000rlu/ml之間。取稀釋后的菌液195ul與稀釋后的藥液5ul混合，每藥物每個(gè)濃度設(shè)2-3重復(fù)，并設(shè)置陽性對(duì)照(rif：終濃度1ug/ml)和陰性對(duì)照(dmso)。陰性空白對(duì)照的發(fā)光值作為第0天的發(fā)光值，之后每天檢測(cè)樣品發(fā)光值1次，共檢測(cè)3天。

第3天平均發(fā)光值達(dá)到陰性空白對(duì)照組發(fā)光值一半以下的最低濃度為這個(gè)樣品的ic50(ug/ml)；第3天抑制90％菌的生長的濃度為該樣品的mic(ug/ml)。

2.2結(jié)果：如表2所示：

表2.各個(gè)藥物的mic和ic50值