本發明屬于生物醫藥，具體涉及一種靶向多發性骨髓瘤的納米微球及其應用。

背景技術：

1、多發性骨髓瘤(multiple?myeloma，mm)是一種克隆漿細胞異常性增殖的惡性血液疾病，它是繼白血病和非霍奇金淋巴瘤之后的第三大最常見的血液疾病。mm的特征是骨髓中單克隆漿細胞不受調控地增殖，導致產生無功能完整的免疫球蛋白或免疫球蛋白鏈。mm好發于老年人，男性的中位發病年齡為71歲，女性為74歲。這種疾病的病因仍不清楚，與年齡、性別、家族史、生活習慣有一定關聯。

2、mm常見的癥狀包括骨髓及相關器官功能損傷的表現即“crab”癥狀：血鈣增高、腎功能損害、貧血、骨病以及繼發淀粉樣變性等相關表現。mm目前仍然無法治愈，治療目標是控制、緩解“crab”癥狀，提高多發性骨髓瘤患者緩解率及無病生存期。在mm的分型中，復發性/難治性多發性骨髓瘤的治療尤為棘手。隨著各專家近些年對發病機制的研究進展，新的靶向針對發病機制藥物的出現，以新藥為基礎的聯合療法治療難治復發性多發性骨髓瘤患者獲得較好的治療效果。

3、多發性骨髓瘤mm表面上雖然是一種血液疾病，但是癌細胞很多都根植在骨髓中，藥物很難到達骨骼中的病灶，難以清除此類病灶，直接造成了mm的難治性，易復發的特點。藥物只循環在血液環境中，無法在骨髓中富集形成有效濃度，治療效果將受到限制，如何將藥物富集到骨髓中是本領域面臨的一個問題。

4、目前一般研究，均為單靶頭靶向細胞表面受體的藥物遞送體系。多發性骨髓瘤的治療難點在于難治性和高復發性。原有的單靶頭策略，如靶向細胞表面受體，可以清除循環外周系統的癌細胞，但是對骨髓中的難治性病灶很難清除，因為很難進入到骨骼，在骨骼內達到高有效濃度，殺傷骨髓內的病灶；如果是利用靶向骨骼的藥物遞送策略，那也會造成藥物遞送到骨骼，但只貼合到骨表面，對骨髓內的細胞沒有選擇性，靶向癌細胞傾向性差，而且容易誤傷的骨骼內的細胞，造成骨破壞，而且此種單靶向骨骼的策略，對外周癌細胞殺傷性差。

技術實現思路

1、為了解決現有單靶頭藥物遞送策略難以解決多發性骨髓瘤的難治性和高復發性問題，本發明創造性地提出靶向雙系統的mm治療策略，構建既能靶向mm癌細胞，又能靶向mm深入的骨髓病灶的藥物遞送系統，具體如下：

2、本發明第一方面的目的，在于提供一種靶向多發性骨髓瘤的遞送系統。

3、本發明第二方面的目的，在于提供本發明第一個方面的靶向多發性骨髓瘤的遞送系統的制備方法。

4、本發明第三方面的目的，在于提供一種藥物組合物。

5、本發明第四方面的目的，在于提供本發明第一個方面的遞送系統和本發明第三個方面的藥物組合物在制備治療多發性骨髓瘤產品中的應用。

6、為了實現本發明上述的目的，本發明采取的技術方案是：

7、本發明的第一個方面，提供一種靶向多發性骨髓瘤的遞送系統，其特征在于：

8、所述遞送系統包括納米骨架、靶向分子和藥物；

9、所述靶向分子包括骨靶向分子和腫瘤靶向因子；

10、所述骨靶向分子包括焦磷酸鹽；

11、所述腫瘤靶向因子包括葉酸、cd38中的至少一種。

12、在本發明的一些實施方式中，所述納米骨架包括乙二醇殼聚糖納米粒。

13、在本發明的一些實施方式中，所述金屬鹽包括堿金屬鹽、堿土金屬鹽。

14、在本發明的一些實施方式中，所述堿金屬鹽包括鈉鹽、鉀鹽中的至少一種。

15、在本發明的一些實施方式中，所述堿土金屬鹽包括鈣鹽、鎂鹽、鋇鹽、鋁鹽中的至少一種。

16、在本發明的一些實施方式中，所述與有機堿形成的鹽包括與下列有機堿形成的鹽：三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、環己胺、二環己基胺、n,n'-二芐基乙二胺中的至少一種。

17、在本發明的一些實施方式中，所述與無機堿形成的鹽包括與下列無機堿形成的鹽：氫氧化鉀、氫氧化鋇、氫氧化鈣、氫氧化鋁、氫氧化鋰、氫氧化鎂、氫氧化鋅、氫氧化銅、氫氧化鐵、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀中的至少一種。

18、在本發明的一些實施方式中，所述與堿性氨基酸形成的鹽包括與下列堿性氨基酸形成的鹽：精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸中的至少一種。

19、在本發明的一些實施方式中，所述遞送系統還包括藥物。

20、優選地，所述藥物包括selinexor、belamaf、melflufen中的至少一種。

21、優選地，所述藥物為selinexor。

22、在本發明的一些實施方式中，所述遞送系統具體為：gcnp@fa/ppi。

23、在本發明的一些實施方式中，所述遞送系統具體為：gcnp@cd38/ppi。

24、本發明第二方面的目的，在于提供本發明第一個方面的靶向多發性骨髓瘤的遞送系統的制備方法，包括以下步驟：

25、將乙二醇殼聚糖與2-(二異丙胺基)乙基甲基丙烯酸酯、過硫酸銨反應，得到乙二醇殼聚糖納米粒；

26、將殼聚糖納米粒與腫瘤靶向分子混合，加入催化劑反應，得到腫瘤靶向殼聚糖納米粒；

27、將骨靶向分子與腫瘤靶向的乙二醇殼聚糖納米粒混合，調節ph，反應，得到同時具有骨靶向和腫瘤靶向的雙靶向乙二醇殼聚糖納米粒。

28、在本發明的一些實施方式中，所述步驟中：乙二醇殼聚糖與2-(二異丙胺基)乙基甲基丙烯酸酯的比例為(5～20)：1g/l；所述反應避光進行。

29、在本發明的一些實施方式中，所述步驟中：腫瘤靶向因子與殼聚糖納米粒的質量比例為1：(1～3)。

30、在本發明的一些實施方式中，所述催化劑包括hatu、hoat。

31、在本發明的一些實施方式中，所述步驟中：所述骨靶向因子為da-peg-ppi。

32、在本發明的一些實施方式中，所述da-peg-ppi與腫瘤靶向殼聚糖納米粒的質量比例為1：(1～3)。

33、在本發明的第二個方面中，分別制備得到了gcnp@fa/ppi和gcnp@cd38/ppi。

34、對于gcnp@fa/ppi，其制備方法具體為：

35、取10mg?da-peg-ppi，用1～3ml水溶解，攪拌24～72h，使其多巴胺中的酚羥基自氧化成羰基(或者加入naoh，讓多巴胺在堿性條件下ph＝8氧化1～3h，然后加入冰醋酸中和)，然后加入gcnp?10～30mg，pda-peg-fa?10～30mg，將混合物以100w超聲處理10min，攪拌均勻，逐滴加入醋酸，使其溶液ph＝5，讓gcnp中的氨基和氧化的da-peg-ppi和pda-peg-fa中羰/醌基發生席夫堿反應，室溫下攪拌48h，然后使用naoh逐滴加入，中和ph至中性，然后進行利用分子量mwco為14kda的透析袋，用dd水透析2天，冷凍干燥，獲得fa&ppi修飾的乙二醇殼聚糖gcnp@fa&ppi。

36、對于gcnp@cd38/ppi，其制備方法具體為：

37、gcnp@cd38：取20mg?gcnp用1～3ml?pbs溶解，加入cd38?pep(10～30)mg，加入催化劑hatu(5～10)mg，hoat(1～5)mg，將混合物以100w超聲處理10min，攪拌均勻。在室溫下攪拌(24～72)h，把乙二醇殼聚糖中的氨基和多肽中的羧基進行縮合成酰胺鍵。然后進行利用分子量mwco為14kda的透析袋，用dd水透析2天，冷凍干燥，獲得多肽修飾的乙二醇殼聚糖gcnp@cd38。

38、gcnp@cd38&ppi：取10mg?da-peg-ppi，用2ml?dd水溶解，攪拌48h，使其多巴胺中的酚羥基自氧化成羰基(或者加入naoh，讓多巴胺在堿性條件ph＝8下氧化2h，然后加入冰醋酸中和)，然后加入gcnp@cd38納米顆粒(10～30)mg，將混合物以100w超聲處理10min，攪拌均勻，逐滴加入醋酸，使其溶液ph＝5，讓gcnp@cd38中的氨基和氧化的da-peg-ppi羰基發生席夫堿反應，室溫下攪拌(24～72)h，然后使用naoh逐滴加入，中和ph至中性，然后進行利用分子量mwco為14kda的透析袋，用dd水透析2天，冷凍干燥，獲得cd38&ppi雙修飾的乙二醇殼聚糖gcnp@cd38&ppi。

39、本發明的第三個方面，提供一種藥物組合物，包括gcnp@fa/ppi-selinexor和gcnp@cd38/ppi-selinexor。

40、本發明的第四個方面，提供本發明第一個方面的靶向多發性骨髓瘤的遞送系統在制備治療多發性骨髓瘤產品中的應用。

41、在本發明的一些實施方式中，所述產品包括藥品。

42、優選地，所述藥品包括藥學上可接受的輔料。

43、優選地，所述藥學上可接受的輔料包括溶劑、拋射劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、著色劑、黏合劑、崩解劑、填充劑、潤滑劑、潤濕劑、滲透壓調節劑、穩定劑、助流劑、矯味劑、防腐劑、助懸劑、包衣材料、芳香劑、抗黏合劑、整合劑、滲透促進劑、ph值調節劑、緩沖劑、增塑劑、表面活性劑、發泡劑、消泡劑、增稠劑、包合劑、保濕劑、吸收劑、稀釋劑、絮凝劑與反絮凝劑、助濾劑、釋放阻滯劑、載體中的至少一種。

44、優選地，所述藥物以口服制劑、注射劑或局部給藥制劑形式存在。特別是，所述口服制劑包括片劑、膠囊劑、丸劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑或溶液劑；所述注射劑包括注射液劑型或注射用凍干粉針劑型；局部給藥制劑包括霜劑、軟膏劑、噴霧劑、氣霧劑或貼劑。

45、其中，所述藥物制劑是以本發明第一個方面的靶向多發性骨髓瘤的遞送系統為有效活性成分，并包括了藥劑學上可接受的其它載體組分。藥物中的載體包括賦形劑，如淀粉、水等；潤滑劑，如硬脂酸鎂等；崩解劑，如微晶纖維素等；填充劑，如乳糖等；粘結劑，如預膠化淀粉、糊精等；甜味劑；抗氧化劑；防腐劑；矯味劑；香料等。

46、在制備口服制劑時選用的載體可以是淀粉、糊精或環糊精及各種化學修飾環糊精、蔗糖、硬脂酸鹽等常規制藥輔料。在制備凍干粉針劑時可以通過無菌噴霧干燥、低溫真空干燥、冷凍干燥等方法制備。各制劑的后期制備工藝及設備均屬于制藥領域的常規技術，本發明對此不作限定。

47、本發明中所述藥物以片劑、膠囊劑、丸劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、注射劑、噴霧劑、氣霧劑、貼劑、凝膠劑、巴布劑形式存在，即藥物制劑包括片劑、膠囊劑、丸劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、注射劑、噴霧劑、氣霧劑、貼劑、凝膠劑、巴布劑等形式，但不局限于以上形式。

48、進一步地，為了便于用藥，可將活性成分靶向多發性骨髓瘤的遞送系統與任何一種或者幾種藥學上可以接受的輔料加工成特定的劑型。這些輔料可以是稀釋劑(例如淀粉、預膠化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、甘露醇以及微晶纖維素等)、吸收劑(例如硫酸鈣、磷酸氫鈣、輕質氧化鎂以及碳酸鈣等)、潤濕劑(例如水以及乙醇等)、粘合劑(例如羥丙甲纖維素、聚維酮、淀粉漿以及糖漿等)、崩解劑(例如干淀粉、羥甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、泡騰崩解劑以及交聯聚維酮等)、潤滑劑(硬脂酸鎂、滑石粉、氫化植物油、聚乙二醇以及微粉硅膠等)、著色劑(例如二氧化鈦、日落黃、亞甲藍以及藥用氧化鐵等)、包衣材料(例如丙烯酸樹脂、羥丙甲纖維素以及聚維酮等)、溶劑(例如注射用水、乙醇、丙二醇以及甘油等)、酸堿調節劑(例如鹽酸、乳酸、氫氧化鈉、酒石酸以及酒石酸鈉等)、抗氧劑(例如亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉以及硫代硫酸鈉等)、抑菌劑(例如苯酚、苯甲醇以及硫柳汞等)，也可以是等滲調節劑(例如氯化鈉以及葡萄糖等)。

49、上述藥學上可接受的輔料通常被認可用于這一目的且作為藥劑的非活性成分。有關藥學上可接受的輔料的匯編可以在《藥物賦形劑手冊》(handbook?of?pharmaceuticalexcipients，第2版，由a.wade和p.j.weller編輯；american?pharmaceutical?association出版，washington?and?the?pharmaceutical?6gess，london，1994)；《中華人民共和國藥典-藥用輔料品名目次》等工具書中找到。

50、本發明的有益效果是：

51、本發明提供了一種靶向多發性骨髓瘤(mm)的遞送系統，該遞送系統同時修飾有骨靶向和癌細胞靶向的兩種不同靶向分子，基于對癌細胞和癌癥微環境的雙重靶向性，可以靶向骨髓微環境中的多發性骨髓瘤細胞。進一步的，將該遞送系統搭載selinexor，可以增強selinexor對骨髓瘤細胞和受影響骨組織的選擇性遞送。體內研究表明，該遞送系統顯著提高了mm的治療效果，本發明制備得到的gcnp@cd38&ppi-selinexor和gcnp@fa&ppi-selinexor對骨髓瘤細胞具有優異的靶向性，能夠抑制mm進展導致的脾臟白髓區減少，抑制脾臟cd38和cd138的表達，有效抑制了骨髓瘤細胞惡性增殖。針對骨環境，gcnp@cd38&ppi-selinexor和gcnp@fa&ppi-selinexor顯著增加骨小梁的骨量，改善mm晚期的骨質流失和骨微觀結構惡化。與selinexor單獨用藥組相比，雙靶向遞送系統顯著提高了mm的治療效果。這種雙靶向納米粒子遞送抗mm藥物的方法代表了一種創新策略，結合了mm癌細胞靶向和癌癥微環境的骨靶向，此前從未應用于mm治療。