專利名稱：一種用固定化磷脂酶A₂脫膠的方法
技術領域：
本發明涉及一種海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化磷脂酶A2應用于脫膠的方法。
背景技術：
天然大豆油需經過一系列的精煉工藝才能得到最終的油脂產品。其中精煉的第一步就是脫膠工藝，即脫除磷脂類物質，磷脂類物質又分為水化磷脂和非水化磷脂，其中，水化磷脂可以采用水化脫膠的方式除去；非水化磷脂由于其具有顯著的疏水性，用常規方法很難除去，針對這一特點，利用磷脂酶對水化脫膠油進行酶法脫膠則應運而生。
現對于酶法大豆油脫膠工藝，用到較多的磷脂酶為磷脂酶仏(PLA1), PLA1專一水解天然磷脂Sn-I位?；?，得到Sn-2位酰基溶血磷脂和脂肪酸，但由于Sn_2位酰基的熱力學性質不穩定，使得溶血磷脂的Sn-2位脂肪酸容易轉移到Sn-I位上形成Sn-I位?；苎字?，從而使得得到的溶血磷脂為Sn-I位酰基溶血磷脂和Sn-2位?；苎字幕旌衔?，由此為后續生產純凈的、單一品種的溶血磷脂帶來不便。目前對于磷脂酶A2應用于脫膠工藝研究較少，磷脂酶A2 (PLA2)是一類能夠在磷脂甘油部分的Sn-2位點選擇性斷裂酯鍵的酶，其可將磷脂水解成Sn-2位?；苎字椭舅?；現今用于脫膠的酶主要是Novo公司推出的Lecitase IOL(PLA2), LecitaseNovo (PLA1)和Lecitase Ultra(PLA1) 其中，豬胰臟來源的磷脂酶Lecitase IOL已不用于油脂脫膠，而被本專利中采用的更具優勢的微生物Rohalase MPL(PLA2)所代替。PLA2可以將非水化磷脂水解成溶血磷脂，其親水性顯著增強，從而可以通過加水混合后離心的方法將其從油脂中分離，從而達到精煉的目的。但是對于游離的PLA2來講，其價格昂貴，且容易失活變性，不能夠重復使用等缺點又導致其不能夠大規模應用于油脂精煉。將Rohalase MPL固定于海藻酸鈉-殼聚糖載體上,對其脫膠條件進行研究,最終確定出海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化后的Rohalase MPL用于脫膠的最佳工藝參數。

發明內容
本發明是為了解決酶法脫膠過程中，將海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL用于脫膠未見報道的問題，而提出的用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL脫膠的方法。用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL脫膠的方法通過以下步驟實現一、海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL用于水化脫膠大豆油脫膠。二、海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL回收。三、酶法脫膠后的脫膠油磷含量的測定。四、海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL用于水化脫膠油脫膠條件的優化。采用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL脫膠的方法,經固定化后的酶重復使用性好，不易變性失活，大大降低了油脂精煉的成本；此外，采用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL對水化脫膠油進行脫膠，最終得到的酶法脫膠油磷含量顯著降低，可降至9. 83ppm ;該固定化酶重復使用7次后活力仍可以保持54%以上，對油脂精
煉具有重要意義。
具體實施例方式具體實施方式
一用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL脫膠的方法通過以下步驟實現一、海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL用于水化脫膠油脫膠加熱水化脫膠大豆油至85°C，加入O. 1%左右的45%的檸檬酸溶液進行酸反應并降溫到一定溫度，加入4%左右的NaOH溶液調節起始pH到一定值，向內加入熱軟水適量，而后加入一定量的固定化Rohalase MPL進行酶反應一定時間,得到的脫膠油對其進行4000rpm離心20min后保存上層油樣即酶法脫膠油。二、海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化RohalaseMPL回收將脫膠反應后的海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL過濾回收；三、酶法脫膠后的脫膠油磷含量的測定；四、海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL 用于水化脫膠油脫膠條件的優化分別在脫膠溫度35°C 55°C，起始pH為4. (Γ6. O,固定化酶添加量為O. 06g/kg"0. 14 g/kg，脫膠時間為2h 8h的條件下，通過測定用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL對水化脫膠油脫膠后得到的脫膠油的磷含量，得出用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL脫膠的最優條件；五、采用響應面法進行分析討論最終確定最佳海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL脫膠條件。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟四中脫膠溫度為45°C 55°C再用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL對水化脫膠油脫膠。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟四中用4%左右的NaOH溶液調節pH為4. 5 5. 5再用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL對水化脫膠油脫膠。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟四中向水化脫膠油中加入的海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL為O. 80g/kg 0. 12 g/kg再用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化Rohalase MPL對水化脫膠油脫膠。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟四中酶法脫膠反應時間為6h lh，對油脂進行脫膠。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟五中采用響應面分析法進一步分析最佳固定化條件。其它步驟與具體實施方式
一相同。
權利要求
1.一種用固定化磷脂酶A2脫膠的方法，其特征在于用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化磷脂酶A2用于大豆油脫膠通過以下步驟實現加熱水化脫膠大豆油至85°C，加入O. 1%左右的45%的檸檬酸溶液進行酸反應并降溫到35°C 55°C，加入4%左右的NaOH溶液調節起始pH到4. (Γ6. O,向內加入熱軟水適量,而后加入O. 06g/kg 0. 14 g/kg (油樣)的固定化磷脂酶A2進行酶反應2h lh，對脫膠大豆油進行過濾，分離出固定化磷脂酶A2并進行洗滌保存；得到的脫膠油對其進行4000rpm離心20min后保存上層油樣即為酶法脫膠油。
2.根據權利要求I所述的一種用固定化磷脂酶A2脫膠的方法，其特征在于將85°C的加入O. 1%左右的45%的檸檬酸溶液進行酸反應并降溫到45°C 55°C。
3.根據權利要求I所述的一種用固定化磷脂酶A2脫膠的方法，其特征在于中用4%左右的NaOH溶液調節pH為4. 5 5. 5。
4.根據權利要求I所述的一種用固定化磷脂酶A2脫膠的方法，其特征在于中向水化脫膠油中加入的固定化磷脂酶A2為O. 80g/kg 0. 12 g/kg。
5.根據權利要求I所述的一種用固定化磷脂酶A2脫膠的方法，其特征在于中酶法脫膠反應時間為6h 8h。
全文摘要
本發明提供一種用固定化磷脂酶A2對水化脫膠大豆油進行脫膠。研究了脫膠溫度、脫膠起始pH、固定化磷脂酶A2添加量以及脫膠反應時間等不同脫膠條件對大豆油脫膠效果的影響，并采用響應面的分析方法對所研究的因素進行優化。根據本發明中固定化磷脂酶A2對大豆油進行脫膠,提高了酶在反應體系中的活性和穩定性,大大降低了油脂精煉的成本；此外，采用固定化磷脂酶A2對大豆油進行脫膠，最終得到的酶法脫膠大豆油磷含量顯著降低，可降至9.83ppm；該固定化酶重復使用7次后活力可以保持54%以上，對油脂精煉具有重要意義。
文檔編號C11B3/04GK102776066SQ20121025704
公開日2012年11月14日 申請日期2012年7月24日 優先權日2012年7月24日
發明者于殿宇, 劉鑫, 宋云花, 宋鵬, 張佳寧, 張春艷, 李萬振, 李寶昌, 江連洲, 王玥, 胡立志, 鄒小雨 申請人:東北農業大學