專利名稱：：甲酰胍基取代的巰基吡咯烷碳青霉烯類化合物的制作方法
技術領域：
：本發明屬于醫藥
技術領域：
，具體涉及甲酰胍基取代的巰基吡咯烷碳青霉烯類化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、及其酯或鹽的水合物，這些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物組合物，以及這些化合物在用于制備治療和/或預防感染性疾病的藥物中的用途。2
背景技術：
：碳青霉烯類抗生素是七十年代發展起來的一類p-內酰胺類抗生素。因其抗菌譜廣，抗菌活性強，并對卩-內酰胺酶穩定，而備受關注。其結構特點是，青霉烷母核1位的硫被碳取代，2位具有雙鍵，復合了青霉素的五元環和頭孢菌素的共軛雙鍵活化P-內酰胺環的作用；6位羥乙基側鏈為反式構象。第一個上市的是亞胺培南，對革蘭陽性和陰性、需氧和厭氧菌均有很強的活性，對各種P-內酰胺酶穩定，與其它抗生素無交叉耐藥性，但在體內易被腎脫氫肽酶-I(DHP-I)迅速降解，臨床上必須與腎脫氫肽酶抑制劑西司他丁合用。研究發現，引入lp-甲基，可增強碳青霉烯類化合物對DHP-I的穩定性。例如美羅培南，對革蘭陽性菌、革蘭陰性菌均敏感，尤其對革蘭陰性菌有很強的抗菌活性。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>亞胺培南美羅培南由于抗生素的濫用導致細菌耐藥性的不斷增加，以及由于消化道吸收的局限性，目前上市的碳青霉烯類在臨床上只能作為注射劑給藥，臨床利用度不高。因此，急需研究開發具有較好的抗菌活性，并且具有良好的化學穩定性和DHP-I穩定性的長效碳青霉烯類抗生素。
發明內容本發明的技術方案如下本發明提供了通式(I)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、及其酯或鹽的水合物其中，RM戈表氫原子或羧基保護基；W代表氫原子或氨基保護基；R3、W分別獨立的代表氫原子或CL6直鏈或支鏈的烷基；RS代表氫原子、鹵素原子、羥基、氨基或C"6直鏈或支鏈的烷基；W代表氫原子或Cw直鏈或支鏈的烷基；n為05的整數。優選的化合物為其中，W代表氫原子或羧基保護基；W代表氫原子或氨基保護基；R3、R"分別獨立的代表氫原子，甲基或乙基；RS代表氫原子、氟原子、氯原子、羥基、氨基或Cw直鏈或支鏈的垸基;W代表氫原子，甲基或乙基；n為03的整數。進一步優選的化合物為其中，R1、R2、R3、W分別獨立的代表氫原子；RS代表氫原子或氨基；RM戈表氫原子或甲基；n為0或3。表l本發明的部分化合物<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>本發明所述鹵素原子為氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。本發明所述的CL6直鏈或支鏈的垸基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基等。本發明所述"氨基保護基"指常規用于取代氨基酸性質子的保護基團，此類基團的實例包括甲基、乙基、環丙甲基、l-甲基-l-環丙甲基、二異丙甲基、9-荷甲基、9-(2-硫代)莉甲基、2-呋卩南甲基、2,2，2-三氯甲基、2-鹵代甲基、2-碘乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-甲硫基乙基、2-甲磺?；一?、2-(對甲苯磺?；?乙基、2-磷鎗基乙基、1,l-二甲基-3-(N,N-二甲基甲酰氨基)丙基、1，l-二苯基-3-(N,N-二乙氨基)丙基、l-甲基-l-(金剛烷基)乙基、l-甲基-l-苯乙基、I-甲基-l-(3，5-二甲氧苯基)乙基、l-甲基-l-(4-聯苯基)乙基、l-甲基-l-(對苯偶氮基苯基)乙基、U-二甲基-2，2,2-三氯乙基、1,1-二甲基-2-氰乙基、異丁基、叔丁基、叔戊基、環丁基、1-甲基環丁基、環戊基、環己基、1-甲基環己基、l-金剛烷基、異冰片基、乙烯基、烯丙基、肉桂基、苯基、2,4,6-三叔丁基苯基、間硝基苯基、S-苯基、8-喹啉基、N，-羥基哌啶基、4-(1,4-二甲基哌啶基)、4,5-二苯基-3-噁唑啉-2-酮、節基、2,4,6-三甲基節基，對甲氧基節基、對甲氧基芐氧基羰基、3，5-二甲氧基芐基、對癸氧基芐基、對硝基芐基、對硝基芐氧基羰基、鄰硝基芐基、3,4-二甲氧基-6-硝基芐基、對溴芐基、氯芐基、2,4-二氯芐基、對氰基芐基、鄰(N，N-二甲基甲酰氮基)節基、間-氯-對-酰氧基節基、對(二羥基硼烷基)芐基、對(苯偶氮基)芐基、對(對甲氧基苯偶氮基)節基、5-苯并異噁唑基甲基、9-蒽基甲基、二苯甲基、苯基(鄰硝基苯基)甲基、二(2-吡啶萄甲基、l-甲基-l-(4-吡啶基)乙基、異煙堿基、S-節基、N'-哌定基羰基、N，-對甲苯磺?；被驶癗，-苯氨基硫代羰基的氨基甲酸酯；甲?；?、乙酰基、乙?；?吡啶鎗、(N，-二硫代芐氧羰基氨基)乙?；?、3-苯基丙酰基、3-(對羥苯基)丙酰基、3-(鄰硝基苯基)丙酰基、2-甲基-2-(鄰硝基苯氧基)丙?；?、2-甲基-2-(鄰苯偶氮基苯氧基)丙?；?-氯代丁?；?、異丁酰基、鄰硝基肉桂?；⑦拎ぜ柞；?、N'-乙酰甲硫氨酰基、N'-苯甲酰基-苯基垸基、苯甲?；?、對苯基苯甲?；籽趸郊柞；?、鄰硝基苯甲?；?、鄰(苯甲酰氧基甲基)苯甲?；蛯?P-苯甲?；孽０?；鄰苯二甲?；?、2,3-二苯基馬來?；投虼牾；沫h亞酰胺；叔丁氧基羰基、烯丙基、烯丙氧基羰基、苯甲酰甲基、3-乙酰氧基丙基、4-硝基-1-環己基-2-氧代-3-吡咯垸-3-基、季銨鹽、甲氧基甲基、2-氯乙氧基甲基、芐氧基甲基、新戊?；谆?、[l-(垸氧羰基氨基)]-2,2，2，三氟乙基、[l-三氟甲基-l-(對氯苯氧基甲氧基)2，2,2,-三氟]乙基、2-四氫吡喃基、2，4-二硝基苯基、芐基、3,4-二甲氧基芐基、鄰硝基芐基、二(對甲氧苯基)甲基、三苯甲基、(對甲氧苯基)二苯基甲基、二苯基-4-吡啶基甲基、2-吡啶甲基-N，-氧化物、5-二苯丙環庚烷基、N',N'-二甲氨基亞甲基、N，-異亞丙基、亞節基、對甲氧基亞芐基、對硝基亞芐基、亞水楊基、5-氯亞水楊基、二苯亞甲基、(5-氯-2-羥苯基)苯基亞甲基、(?；蚁┗?、5,6-二甲基-3-氧代-1-環己烯基、硼烷、[苯基(五羰基鉻或鎢)]羰基、銅或鋅螯合物、硝基、亞硝基、氧化物、二苯基膦基、二甲硫基氧膦基、二苯硫基氧膦基、二乙基磷酰基、二節基磷?；?、二苯基磷?；?、磷酰基、三甲基甲硅垸基、苯硫基、鄰硝基苯硫基、2，4-二硝基苯硫基、2-硝基-4-甲氧基苯硫基、三苯甲硫基、苯磺?；籽趸交酋；?、2,4,6-三甲基苯磺酰基、甲基磺?；?、苯甲磺酰基、對甲苯甲磺酰基、三氟甲基磺?；⒈郊柞＜谆酋；?、重氮基等。本發明所述的"羧基保護基"指常規用于取代羧酸酸性質子的保護基團。此基團的實例包括甲氧基甲基、甲硫甲基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、甲氧乙基甲基、芐氧甲基、苯甲酰甲基、對溴苯甲酰甲基、a-甲基苯甲酰甲基、對甲氧基苯甲酰甲基、二酰基甲基、N-鄰苯二甲酰亞氨基甲基、乙基、2,2，2-三氯乙基、2-鹵代乙基、co-氯代烷基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-甲硫基乙基、2-(對硝基苯硫基)乙基、2-(對甲苯硫基)乙基、l-甲基-l-苯乙基、叔丁基、環戊基、環己基、二(鄰硝基苯基)甲基、9-芴基甲基、2-(9，10-二氧代)芴基甲基、5-二苯硫基、2，4，6-三甲基芐基、對溴芐基、鄰硝基芐基、對硝基芐基、對甲氧基芐基、胡椒基、4-吡啶甲基、三甲基甲硅垸基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、異丙基二甲基甲硅烷基、苯基二甲基甲硅垸基、S-叔丁基、S-苯基、S-2-吡啶基、N-羥基哌啶基、N-羥基琥珀酰亞氨基、N-羥基鄰苯二甲酰亞氨基、N-羥基苯并三唑基、O-?；?、2,4-二硝基苯硫基、2-垸基-l，3-噁唑啉、4-垸基-5-氧代-l，3-噁唑垸、5-垸基-4-氧代-l,3-二噁烷、三乙基錫烷、三正丁基錫烷；N，N'-二異丙基酰肼等。更進一步優選的化合物如下化學名稱(4R，5S，6S)-3-[(2S,4S)-2-甲酰[(2-氨基-戊酸-5-基)胍基]-吡咯烷-4-基]硫基-6-[(111)-1-羥乙基]-4-甲基-7-氧-1-氮雜雙環[3,2,0]庚-2-烯-2-羧酸，以下簡稱化合物A,結構式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>化學名稱(4R,5S，6S)-3-[(2S，4S)-2-甲酰[(乙酸-2-基)胍基]-吡咯烷-4-基]硫基-6-[(lR)-l-羥乙基]-4-甲基-7-氧-l-氮雜雙環[3，2,0]庚-2-烯-2-羧酸，以下簡稱化合物B，結構式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>本發明還提供了上述化合物的制備方法反應方程式:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula反應步驟步驟l化合物I的制備在干燥的反應瓶中加入(2S,4S)-4-乙酰硫基-2-羧基-吡咯垸(即原料l)，無水四氫呋喃。在氮氣保護下，于室溫加入l，l-羰基二咪唑(CDI)，反應，加入原料2的四氫呋喃溶液，繼續反應。然后滴加鹽酸適量，以乙酸乙酯提取，有機相依次用水、飽和氯化鈉溶液洗滌，減壓濃縮，固體以乙醇溶液重結晶，得化合物I。步驟2化合物II的制備于反應瓶中加入化合物I的二氯甲烷溶液冰浴冷卻，加入三乙胺適量，攪拌后滴加(Boc)20的二氯甲烷溶液，攪拌。冰水冷卻下加入水，分出水層，水層再用二氯甲垸提取，合并有機層，無水硫酸鈉干燥、濃縮至干，殘余物加入鹽酸，攪拌，以稀堿溶液調節至堿性，析出固體，固體以乙腈重結晶，得化合物n。步驟3化合物m的制備于干燥反應瓶中，加入原料3的乙腈溶液冷卻，加入二異丙基乙胺和化合物n的乙腈溶液，攪拌。反應完畢后，加乙酸乙酯稀釋，依次用水、飽和鹽水洗，有機層干燥、濃縮，得化合物ni。步驟4化合物IV的制備將化合物in溶于二氯甲烷中，加入苯甲醚和硝基甲垸，于低溫下滴加三氯化鋁的硝基甲垸溶液，攪拌，加入水，析出固體，過濾，將濾餅溶于THF和水的混合液中，加入鈀-炭適量，室溫5MPa氫壓下攪拌反應，濾除鈀炭，濾液中加入THF，分層，收集水層。再向THF中加入氯化鎂水溶液，靜置，分出水層，重復操作1次。水相合并，慢慢滴入甲醇，攪拌，過濾，濾餅重結晶，即得化合物IV。以上反應方程式中的R3、R4、R5、R6、n如前文所述，本發明化合物上的羧基可以被羧基保護基保護，氮原子上的氫原子可以被氨基保護基保護，即為通式(I)所示化合物。本發明上述任一化合物藥學上可接受的鹽包括無機酸鹽、有機酸鹽、氨基酸鹽、有機堿鹽或無機堿鹽。其中無機酸包括鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等；有機酸包括乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、馬來酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸等；氨基酸包括精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等；有機堿包括葡甲胺、氨基葡萄糖、三甲基胺、三乙基胺、二環己基胺、N,N-二芐基-l,2-乙二胺等；無機堿包括鈉、鉀、鋇、鈣、鎂、鋅、鋰等的堿性化合物。這些酸或堿加成鹽可以根據任何通用方法制備。本發明要求保護的化合物易于水解的酯是其羧基以易于水解的酯基形式存在的化合物。這些酯可以是常規的，例如低級鏈烷酰氧烷基酯，乙酸基甲基酯、新戊酰氧甲基酯、1-乙酸基乙基酯、l-新戊酰氧乙基酯；低級垸氧羰基氧烷基酯，甲氧羰基氧甲基酯、1-乙氧羰基氧乙基酯、l-異丙基幾基氧乙基酯；內酯基酯，苯并呋喃酮基酯、硫代苯并呋喃酮基酯；低級垸氧基甲基酯，甲氧基甲基酯；低級鏈烷?；被谆?，乙酰氨基甲基酯。也可以使用其他的酯例如芐基酯和氰基甲基酯。這些酯的其他實例如下(2，2-二甲基-1-氧丙氧基)甲基酯；(lRS)-l-乙酰氧基乙酯；2-[(2-甲基丙氧基)羰基]-2-戊烯基酯；l-[[(l-甲基乙氧基碟基]氧]乙基酯；l-(乙酸基)乙基酯；(5-甲基-2-氧代-1，3-間二氧雜環戊烯-4-基)甲基酯；l-[[(環己氧基)羰基]氧]乙基酯；3,3-二甲基-2-氧代丁基酯。對于本領域專業人員來說顯而易見的是，本發明化合物的易于水解的酯可以在該化合物的游離羧基處形成。本發明所述異構體是指其所有差向立體異構，非對映異構及互變異構形式。當一個鍵用一個楔表示時，這表明在三維上該鍵將從紙面出來，而當一個鍵是陰影時，這表明在三維上該鍵將返入紙面中。式(I)化合物具有許多立體中心，g卩在4-位、5-位、6-位上等。本發明的水合物是指半水合物、一水合物、二水合物、三水合物、六水合物等。通式(I)所示化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯可以是水合物的形式。水合作用可以在制備過程中完成或者可以利用原始無水產物的吸濕性逐漸進行。本發明進一歩要求保護包括上面所述的任一化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、或其酯或鹽的水合物與其它藥用活性成分的藥物組合物，如與西司他丁或其鈉鹽、倍他米隆等的藥物組合物。本發明進一步要求保護包括上面所述的任一化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、或其酯或鹽的水合物與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物，可以為臨床上或藥學上可接受的任一劑型，優選為口服制劑或注射劑。其中含有生理有效量的通式(1)所示的化合物0.05g5g，可以為0.05g、O.lg、0.125g、0.2g、0.25g、0.3g、0.4g、0.5g、0.6g、0.75g、lg、1.25g、1.5g、1.75g、2g、2.5g、3g、4g、5g等。本發明任一化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、或其酯或鹽的水合物，可以口服或腸胃外給藥等方式施用于需要這種治療的患者。用于腸胃外給藥時，可制成注射劑。注射劑系指藥物制成的供注入體內的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌制劑，注射劑可分為注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，可用于肌內注射、靜脈注射、靜脈滴注等；其規格有lml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供靜脈滴注用的大體積(一般不小于100ml)注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，可用適宜的注射用溶劑配制后注射，也可用靜脈輸液配制后靜脈滴注；無菌粉末用溶媒結晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。制成注射劑時，可采用現有制藥領域中的常規方法生產，可選用水性溶劑或非水性溶劑。最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9%氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配制注射劑時，可以不加入附加劑，也可根據藥物的性質加入適宜的附加劑，如滲透壓調節劑、pH值調節劑、增溶劑、填充劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。常用的滲透壓調節劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化麪、山梨醇等，優選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調節劑包括醋酸-醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸-枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉-碳酸鈉等；常用的增溶劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充劑包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑為苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射劑常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。用于口服時，可制成常規的固體制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；也可制成口服液體制劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖衆劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑，以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質囊材中的固體制劑，依據其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當方法制成的球狀或類球狀固體制劑，包括滴丸、糖丸、小丸等。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑，可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等?？诜芤簞┫抵杆幬锶芙庥谶m宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑?？诜鞈覄┫抵鸽y溶性固體藥物，分散在液體介質中，制成供口服的混懸液體制劑，也包括干混懸劑或濃混懸液。糖漿劑系指含有藥物的濃蔗糖水溶液。制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。常用填充劑包括淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預膠化淀粉、甘露醇等；常用粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；常用崩解劑包括干淀粉、交聯聚維酮、交聯羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；常用潤滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。通常，已經發現碳青霉烯類抗生素對溫血動物來說是無毒的，而這個通則也適用于本發明化合物。將本發明的優選化合物以能預防細菌感染所需要的過量劑量對小鼠給藥，未注意到由本發明化合物所引起的明顯的中毒病兆或副作用。本發明還提供了碳青霉烯類化合物在制備用于治療和/或預防感染性疾病的藥物中的用途。本發明新的碳青霉烯類化合物對革蘭氏陽性和陰性、需氧和厭氧菌以及醫院臨床病原菌如銅綠假單胞菌和不動桿菌屬細菌均有較好的抗菌活性，可用于治療和/或預防由病原微生物引起的各種疾病，如呼吸道感染和泌尿道感染。本發明的甲酰胍基取代的巰基吡咯烷碳青霉烯類化合物與現有技術相比，具有以下優點(1)本發明化合物具有優良的抗菌活性并且顯示低毒性，能被安全的用于治療和/或預防各種哺乳動物(包括人類)由敏感菌所引起的各種疾??；(2)本發明化合物抗菌譜廣，對革蘭氏陽性和陰性、需氧和厭氧菌以及醫院臨床病原菌均有較好的抗菌活性，尤其對耐藥性銅綠假單胞菌有較好的抗菌活性；(3)本發明化合物對p-內酰胺酶和DHP-I具有高度穩定性，可用于P-內酰胺酶產生菌，并且不需要與其它藥物合用；(4)本發明化合物制備工藝簡單，藥品純度高、收率高、質量穩定，易于進行大規模工業生產。以下通過體外抗菌實驗進一步闡述本發明的甲酰胍基取代的巰基吡咯烷碳青霉烯類化合物的有益效果，但不應將此理解為本發明的碳青霉烯類化合物僅具有下列有益效果。實驗例本發明化合物的體外抗菌活性供試菌種以下臨床分離菌株均在公眾機構購買革蘭陽性菌金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎鏈球菌、糞腸球菌；革蘭陰性菌大腸埃希菌、肺炎克雷伯桿菌、奇異變形桿菌、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌、費氏擰檬酸桿菌。供試品本發明化合物A、B，自制，化學名稱和結構式如前文所述；亞胺培南市購；美羅培南市購。實驗方法瓊脂稀釋法，參考《藥理試驗方法學》P1659-1660，人民衛生出版社，主編徐叔云等，版次1982年8月第1版2002年1月第3版第5次印刷。實驗結果和結論表2本發明化合物對臨床分離革蘭陽性菌的抗菌活性_抗菌活性MIC9。(嗎/ml)_供^^;黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌肺炎鏈球菌糞腸^W亞胺培南0.0320.0160.0081美羅培南0.1250.1250.0168化合物A0.0160.0080.0080.5化合物B0.0160.0080.0040.5由表2實驗結果可見，與亞胺培南和美羅培南相比，本發明化合物A、B對臨床分離的供試革蘭陽性菌均有很好的抗菌活性。表3本發明化合物對臨床分離革蘭陰性菌的抗菌活性菌株_抗菌活性MIC9。(嗎/ml)供試\大腸埃希菌肺炎克雷伯桿菌奇異變形桿菌陰溝腸桿菌銅綠假單胞菌費氏檸檬酸桿盲亞胺培南0.1250.2540.5160.5美羅培南0駕0.0320.1250.063160.032化合物A0.0080.0160.0630.03240.016化合物B0駕0.0160.0630.03220細由表3實驗結果可見，與亞胺培南和美羅培南相比，本發明化合物A、B對臨床分離的供試革蘭陰性菌均有很好的抗菌活性。上述實驗結果表明，本發明化合物對革蘭陽性菌、陰性菌均具有強效抗菌作用，同最接近的現有技術相比，抗菌活性相當或更好，且抗菌譜廣，具有很好的臨床應用潛力。具體實施例方式以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下實施例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。以下實施例中各劑型的輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。實施例1(2S,4S)-4-乙酰硫基-2-甲酰(2-氨基-戊酸-5-基)胍基-l-吡咯烷的制備在干燥的反應瓶中加入(2S,4S)-4-乙酰硫基-2-羧基-吡咯垸14.5g(50mmo1)，無水四氫呋喃150ml。在氮氣保護下，于室溫加入l，l-羰基二咪唑13g(80mmo1)，反應0.5h，在0'C以下加入2-氨基-5-胍基-戊酸10.5g(60mmo1)的四氫呋喃溶液100ml，繼續反應0.5h。然后滴加lmol/L鹽酸60ml，以乙酸乙酯(100mlX2)提取，有機相依次用水、飽和氯化鈉溶液洗滌，減壓濃縮，固體以乙醇溶液重結晶，得固體12.9g,收率74.8%。實施例2(2S，4S)-4-乙酰硫基-2-甲酰(乙酸-2-基)胍基-吡咯烷的制備具體制備方法參考實施例l。投(2S,4S)-4-乙酰硫基-2-羧基-卩比咯垸14.5g(50ramo1)，2-胍基-乙酸7.0g(60mmo1)。得產物10.0g，收率69.7%。實施例3(2S,4S)-4-巰基-2-甲酰nN,N'-二叔丁氧羰基-f2-叔丁氧羰基氨基-戊酸-5-基)胍基l-l-叔丁氧羰基吡咯烷的制備于反應瓶中加入(2S,4S)-4-乙酰硫基-2-甲酰(2-氨基-戊酸-5-基)胍基-l-吡咯烷10.4g(3Ommo1)的二氯甲院溶液100ml，冰浴冷至5T下，加入三乙胺12ml，攪拌后滴加15g(Boc)2O的二氯甲烷溶液100ml，攪拌lh。冰水冷卻下加入100ml水，分出水層，水層再用50mlX3的二氯甲烷提取，合并有機層，無水硫酸鈉干燥、濃縮至干，殘余物加入3mol/L的鹽酸100ml，攪拌2h,以稀堿溶液調節至堿性，析出固體，固體以乙腈重結晶，得產物18g，收率85.1%。實施例4(2S，4S)-4-巰基-2-甲酰[N，N，-二叔丁氧羰基-(乙酸-2-基)胍基l-l-叔丁氧羰基吡咯垸的制備具體制備方法參考實施例3。投(2S,4S)-4-乙酰硫基-2-甲酰(乙酸-2-基)胍基-吡咯院8.6gGOmmol)。得產物14.5g，收率88.5%。實施例5"議,58,68)-3-^28,48)-2-甲酰〖]>^-二叔丁氧羰基-0-叔丁氧羰基氨基-戊酸-5-基)胍基l-l-叔丁氧羰基吡咯垸-4-基l硫基-6-(lR)-l-羥乙基M-甲基-7-氧-l-氮雜雙環[3,2,01庚-2-烯-2-羧酸對硝基節酯的制備于干燥反應瓶中，加入(4R，5S,6S)-3-二苯氧磷酰氧基-6-[(lR)-l-羥乙基]-4-甲基-7-氧-l-氮雜雙環[3，2,0]庚-2-烯-2-羧酸對硝基芐酯11.9g(20mmo1)的乙腈溶液120ml，冷至-l(TC以下，加入二異丙基乙胺5ml和(2S,4S)-4-巰基-2-甲酰[N,N，-二叔丁氧羰基-(2-叔丁氧羰基氨基-戊酸-5-基)胍基]-1-叔丁氧羰基吡咯垸14.8§(21mmo1)的乙腈溶液80ml，(TC攪拌15h。反應完畢后，加乙酸乙酯300ml稀釋，依次用水、飽和鹽水洗，有機層干燥、濃縮，得固體14.5g，收率69.1%。實施例6(4R,5S,6S)-3-f2S,4S)-2-甲?！篘,N，-二叔丁氧羰基-(乙酸-2-基)胍基l-l-叔丁氧羰基吡咯烷-4-基l硫基-6-faR)-l-羥乙基l-4-甲基-7-氧-l-氮雜雙環3,2，01庚-2-烯-2-羧酸對硝基芐酯的制備具體制備方法參考實施例5。投(411，58,63)-3-二苯氧磷酰氧基-6-[(111)-1-羥乙基]-4-甲基-7-氧-l-氮雜雙環[3，2,0]庚-2-烯-2-羧酸對硝基芐酯11.9g(20mmo1)，(23，48)-4-巰基-2-甲酰^,-二叔丁氧羰基-(乙酸-2-基)胍基]-l-叔丁氧羰基吡咯烷11.5g(21mmo1)。得產物12.6g，收率70.5%。實施例7(4R,5S,6S)-3-(2S,4S)-2-甲酰K2-氨基-戊酸-5-基)胍基卜吡咯烷-4-基l硫基-6-(111)-1-羥乙基1-4-甲基-7-氧-1-氮雜雙環3,2,01庚-2-烯-2-羧酸(即化合物A)的制備將(4R，5S,6S)-3-[(2S，4S)-2-甲酰[N,N，-二叔丁氧羰基-(2-叔丁氧羰基氨基-戊酸-5-基)胍基]-l-叔丁氧羰基吡咯垸-4-基]硫基-6-[(lR)-l-羥乙基]-4-甲基-7-氧-l-氮雜雙環[3，2，0]庚-2-烯-2-羧酸對硝基芐酯10^(1011111101)溶于501111二氯甲烷中，加入苯甲醚10ml和硝基甲垸40ml，于-50。C下滴加lmol/L三氯化鋁的硝基甲烷溶液200ml，-40°(:攪拌211，加入水200ml，析出固體，過濾，將濾餅溶于400mlTHF和水30ml的混合液中，加入10M鈀-炭2g，室溫5MPa氫壓下攪拌反應2h，濾除鈀炭，濾液中加入THF150ml，分層，收集水層。再向THF中加入5y。氯化鎂水溶液20ml，靜置，分出水層，重復操作1次。水相合并，0'C慢慢滴入甲醇30ml，-l(TC攪拌lh，過濾，濾餅重結晶，得目標產物2.3g，收率44.6%。分子式C21H32N607S分子量512.58元素分析C，49.08%;H,6.57%;N,16.55%;S，6.12%(計算C，49.21%;H，6.29%;N，16.40%;S，6.26%)實施例8"R,5S,6S)-3K2S,4S)-2-甲酰(乙酸-2-基)胍基l-吡咯烷-4-基l硫基-6-KlR)-l-羥乙基l-4-甲基-7-氧-l-氮雜雙環3,2,01庚-2-烯-2-羧酸(即化合物B)的制備具體制備方法參考實施例7。投(4R，5S,6S)-3-[(2S，4S)-2-甲酰[N,N，-二叔丁氧羰基-(乙酸-2-基)胍基]-1-叔丁氧羰基吡咯垸-4-基]硫基-6_[(111)-1-羥乙基]-4-甲基-7-氧-1-氮雜雙環[3,2，0]庚-2-烯-2-羧酸對硝基芐酯8.98(1011111101)。得目標產物2.0g，收率:43.50/。。分子式C18H25N507S分子量455.49元素分析C,47.30%;H,5.73%;N,15.21%;S，7.16%(計算C,47.46%;H,5.53%;N,15.38%;S,7.04%)實施例9本發明化合物無菌粉針的制備1、處方-處方l:處方2:處方3:處方4:化合物A250g(以化合物計)共制備1000支化合物B500g(以化合物計)共制備1000支化合物A1000g(以化合物計)共制備1000支化合物B2000g(以化合物計)共制備1000支2、制備工藝將制備所用的抗生素玻璃瓶、膠塞等進行無菌處理；按處方稱取原料(折算后投料)，將無菌粉末置于分裝機中分裝，隨時檢測裝量；加塞，壓蓋，成品全檢，包裝入庫。實施例IO本發明化合物片劑的制備1、處方處方h化合物A預膠化淀粉低取代羥丙基纖維素微晶纖維素2%HPMC水溶液微粉硅膠硬脂酸鎂羧甲淀粉鈉共制備250g(以化合物計)50g40g40g適量4.0g4.0g2.0g_1000片處方2:化合物B預膠化淀粉50g40g40g適量4.0g4.0g2.0g125g(以化合物計)低取代羥丙基纖維素微晶纖維素2%HPMC水溶液微粉硅膠硬脂酸鎂羧甲淀粉鈉共制備1000片2、制備工藝將原料粉碎過100目篩，其余輔料分別過100目篩，備用；按照處方量稱取原料和輔料；將羥丙甲纖維素溶于水中制成2%的水溶液備用；將化合物A或B、預膠化淀粉、低取代羥丙基纖維素、微晶纖維素混合均勻，加入2。/。HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；過20目篩制顆粒；顆粒在6(TC的條件下烘干；干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂、微粉硅膠和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻；取樣，半成品化驗；按照化驗確定的片重壓片；成品全檢，包裝入庫。權利要求1.通式(I)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、及其酯或鹽的水合物其中，R1代表氫原子或羧基保護基；R2代表氫原子或氨基保護基；R3、R4分別獨立的代表氫原子或C1-6直鏈或支鏈的烷基；R5代表氫原子、鹵素原子、羥基、氨基或C1-6直鏈或支鏈的烷基；R6代表氫原子或C1-6直鏈或支鏈的烷基；n為0～5的整數。2、如權利要求1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、及其酯或鹽的水合物其中，RM戈表氫原子或羧基保護基；112代表氫原子或氨基保護基；R3、R"分別獨立的代表氫原子，甲基或乙基；RS代表氫原子、氟原子、氯原子、羥基、氨基或Cb3直鏈或支鏈的烷基；W代表氫原子，甲基或乙基；n為03的整數。3、如權利要求2所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、及其酯或鹽的水合物其中，R1、R2、R3、114分別獨立的代表氫原子；RS代表氫原子或氨基；W代表氫原子或甲基；n為0或3。4、如權利要求3所述的化合物，選自(4R,5S，6S)-3-[(2S，4S)-2-甲酰[(2-氨基-戊酸-5-基)胍基]-吡咯烷-4-基]硫基-6-[(lR)-l-羥乙基]_4-甲基-7-氧-l-氮雜雙環[3,2，0]庚-2-烯-2-羧酸，或者(4R，5S，6S)-3-[(2S,4S)-2-甲酰[(乙酸-2-基)胍基]-吡咯垸-4-基]硫基-6-[(lR)-l-羥乙基]-4-甲基-7-氧-l-氮雜雙環[3，2,0廣-2-烯-2-羧酸，及其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、其酯或鹽的水合物。5、如權利要求14任一項所述的化合物，其藥學上可接受的鹽為無機酸鹽、有機酸鹽、氨基酸鹽、有機堿鹽或無機堿鹽。6、如權利要求14任一項所述的化合物，其易水解的酯是其羧基以易于水解的酯基形式存在的化合物，所述的酯包括低級鏈垸酰氧烷基酯、低級烷氧羰氧基垸基酯、低級烷氧基甲基酯、低級鏈烷酰氨基甲基酯、(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基)甲基酯、(5-甲基-2-氧代-l,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲基酯、2-[(2-甲基丙氧基)羰基]-2-戊烯酯、l-[[(l-甲基乙氧基)羰基]氧萄乙酯、l-(乙酰氧基)乙酯、(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲基酯、l-[[(環己氧基)羰基]氧基]乙酯以及3，3-二甲基-2-氧丁酯。7、包括權利要求14任一項所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物，或其酯或鹽的水合物與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物。8、如權利要求7所述的藥物組合物為藥學上可接受的任一劑型。9、如權利要求7所述的藥物組合物含有權利要求14任一項所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物，或其酯或鹽的水合物0.05g5g作為必需的活性成分。10、權利要求14任一項所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、及其酯或鹽的水合物在用于制備治療和/或預防感染性疾病的藥物中的應用。全文摘要本發明屬于醫藥
技術領域：
，具體涉及通式(I)所示的甲酰胍基取代的巰基吡咯烷碳青霉烯類化合物、其藥學上可接受的鹽、其易水解的酯、其異構體、其水合物、及其酯或鹽的水合物其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、n如說明書中所定義；本發明還涉及這些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物組合物，以及這些化合物在制備治療和/或預防感染性疾病的藥物中的應用。文檔編號C07D477/20GK101367805SQ200810129339公開日2009年2月18日申請日期2008年6月28日優先權日2007年6月28日發明者黃振華申請人:山東軒竹醫藥科技有限公司