專利名稱：一種從蜂花粉中提取核酸及純化的方法
技術領域：
本發明屬于生物化學技術領域，具體是一種從蜂花粉中提取核酸及純化的方法。本產品所用原料蜂花粉來自大興安嶺的原始森林之中。這里地處北緯50度一 53度之間，是一塊天然凈土，晝夜溫差大，適合山野花的生長。這里植被繁茂，物種豐富。在8.4萬平方公里的土地上，有上千種野生植物，其中:蜜、粉、膠源植物有5.985萬畝，蜂產品年儲量可達84萬噸。本產品原料都符合歐盟有機食品認證組織有機食品生產、加工標準，是安全的功能性營養食品。
背景技術：
蜂花粉是由許許多多橢圓形的蜂花粉團組成，其主要組成物質是蜂花粉粒。蜂花粉粒是植物精華之所在， 它包含著孕育一個新生命的全部營養物質，所以被人們譽為“濃縮的營養庫” “濃縮的微型天然藥劑” “完全營養食品”等，蜂花粉的營養成分主要集中在蜂花粉粒的內含物中，目前已知含有200多種營養成分。蛋白質、氨基酸類:蜂花粉中含有8% 40%的蛋白質和氨基酸。蜂花粉中的蛋白質平均含量大約為20%，它是生命的基本物質。蜂花粉中含有20多種氨基酸，在某種意義上說是氨基酸的濃縮物質，其中所含人體必需氨基酸約為牛肉、雞蛋的5 7倍。糖類:蜂花粉中的糖類物質占25% 48%，主要包括葡萄糖、果糖和淀粉，還有纖維素和半纖維互等碳水化合物。其中最有開發前景的是蜂花粉多糖，它具有很強的免疫功能，具有明顯的防癌功效。脂類:蜂花粉中含脂類物質5%左右，其中60% 91%為不飽和和脂肪酸，它為人體內不能合成而又不可缺乏的營養成分，對大腦及神經系統的發育具有極為重要的作用。酶類:蜂花粉中有上百種酶和輔酶，是影響細胞代謝的重要物質，參與人體中的一切生化過程，對營養成分的分解、合成、消化吸收起到催化作用，如超氧化物歧化酶(SOD)即有抗衰老作用。維生素類:蜂花粉中含有多種維生素，不僅種類十分齊全，而且含量很高，是天然維生素的濃縮物。主要有維生素A、B1' B2、B3、B4、B5、B6、B” C、D、E、P等。常量和微量元素:蜂花粉含有豐富的鈣、磷、氯、鉀、鈉、鎂、硫、硅等常量元素和鐵、碘、銅、鍶、鋅、錳、鉆、鑰、鉻、鎳、錫、硒、釩、鋁、鋇、鈦等多種微量元素。這些元素對維護和保持人體的生命活動起著重要作用。核酸:蜂花粉中含有約2%的核酸，是人們公認的富含核酸食物雞肝、蝦米的5 10倍。核酸的存在，大大提高了蜂花粉的醫療保健價值，可用于免疫功能低下和腫瘤病人的治療，因為核酸有促進細胞再生和延緩衰老的功能。黃酮類化合物:每100克蜂花粉中黃酮類化合物含量高達2549.9毫克，能起到抗動脈硬化、降低膽固醇、解疼和抗輻射的作用。其它有效成分:蜂花粉中還含有一些激素，如促性腺激素、吲哚乙酸(生長素)、赤霉素、乙烯、色素、多種有機酸和一些尚未弄清的成分，有待進一步分析研究。
總之，蜂花粉被營養學家譽為當代世界的營養之冠，是人類的一個重要營養源。但是目前還沒有有效的開發和利用，直接食用或沖服，有效成分溶出量很少，人體吸收利用率很低，且部分人群還會產生過敏現象。因此開發蜂花粉高營養型產品是亟待解決的問題。

發明內容
本發明的目的就是提供使人體更多地吸收蜂花粉營養成分，解決核酸提取率不高，有害物質殘留量大，應用范圍不廣，日常膳食不能滿足人體需求的一種方法。本發明是以大興安嶺純天然有機苕條蜂花粉為原料，采用超細微粉碎、超聲萃取、離心分離、離子交換層析及真空冷凍干燥的技術相結合從蜂花粉中提取核酸及純化的一種方法。本發明的提取方法是:將經過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進行超細微粉碎，粒度達到20-60目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質復合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉化為溶解度小的鉀鹽而同時沉淀，反復提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純溶液，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質。據《中華本草》記載:蜂花粉含有豐富的營養物質，是全面營養食品。食用蜂花粉對于快速消除疲勞、便秘、營養肌膚、美容養顏，調節內分泌具有明顯的保健作用。特別是對糖尿病、心腦血管疾病、腫瘤、前列腺炎還具有輔助治療作用。本發明是一種從蜂花粉中提取核酸的方法，其優點在于:1、提取率高，可以達到40-50% ;2、生產周期短，成本相對較低，不添加有害的化學試劑，不會污染環境；3、應用范圍廣，可以在食品、醫藥中添`加，補充人體日常膳食達不到每天約1500毫克的核酸量。
具體實施例方式實施例1:本發明的提取方法是:將經過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進行超細微粉碎，粒度達到40-60目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質復合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉化為溶解度小的鉀鹽而同時沉淀，反復提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純溶液，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質。實施例2:本發明的提取方法是:將經過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進行超細微粉碎，粒度達到20-40目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質復合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉化為溶解度小的鉀鹽而同時沉淀，反復提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純溶液，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質。實施例3:本發明的提取方法是:將經過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進行超細微粉碎，粒度達到20-60目，加入重量比1: 10-12的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質復合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉化為溶解度小的鉀鹽而同時沉淀，反復提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純溶液，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質 。實施例4:本發明的提取方法是:將經過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進行超細微粉碎，粒度達到20-60目，加入重量比1: 6-8的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質復合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉化為溶解度小的鉀鹽而同時沉淀，反復提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純溶液，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質。實施例5:本發明的提取方法是:將經過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進行超細微粉碎，粒度達到20-60目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細胞器分離，并在20-30千赫茲超聲20-30分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 8-9的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲20-30分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質復合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉化為溶解度小的鉀鹽而同時沉淀，反復提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純溶液，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質。實施例6:本發明的提取方法是:將經過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進行超細微粉碎，粒度達到20-60目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細胞器分離，并在20-30千赫茲超聲40-50分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 5-6的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲40-50分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質復合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉化為溶解度小的鉀鹽而同時沉淀，反復提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純溶液，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質。`
權利要求
1.本發明屬于生物化學技術領域，其特征是一種采用超細微粉碎、超聲萃取、離心分離、離子交換層析及真空冷凍干燥的技術相結合從蜂花粉中提取核酸及純化的方法，提取率達到40-50%。具體是:將經過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進行超細微粉碎，粒度達到20-60目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻衆，通過差速離心法使細胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質復合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉化為溶解度小的鉀鹽而同時沉淀，反復提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純溶液，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質。
2.如權利要求1所述的 方法，其特征是在于除了蜂花粉之外，還可以用核酸含量高的糧食、菌類等原料，采用該方法制備核酸及純化。
全文摘要
本發明屬于生物化學技術領域，是一種從蜂花粉中提取核酸及純化的方法。本發明的具體提取方法是將經過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進行超細微粉碎，粒度達到20-60目，加入重量比1∶8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1∶6-8的1mol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質復合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉化為溶解度小的鉀鹽而同時沉淀，反復提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純溶液，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質。
文檔編號C07H1/08GK103102378SQ201110377240
公開日2013年5月15日 申請日期2011年11月15日 優先權日2011年11月15日
發明者徐春華, 孟慶生 申請人:大興安嶺綠源蜂業有限公司