專(zhuān)利名稱(chēng)：一種快速制備色譜分離制備丹酚酸b的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從丹參藥材中分離純化得到純度大于98.0%的丹酚酸B的制備方法。
背景技術(shù)：
丹參為唇形科植物Mlvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖，具有祛淤止痛、 活血通經(jīng)、清心除煩之功效。丹參主要含兩類(lèi)有效成分一為脂溶性的二萜類(lèi)化合物，二為水溶性的多聚酚酸類(lèi)成分。實(shí)驗(yàn)研究證明，丹參水溶性成分具有多方面的藥理活性，具有很強(qiáng)的抗氧化活性。丹酚酸B為丹參中重要的水溶性有效成分之一，約占總酚酸的70%，在 2010版中國(guó)藥典中，已將丹酚酸B作為丹參片的指標(biāo)成分。丹酚酸B由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，研究表明其有強(qiáng)烈的抗氧化和清除氧自由基的活性，對(duì)腎功能不全和肝損傷均有一定保護(hù)作用。分離制備丹參水溶性活性成分對(duì)進(jìn)一步揭示丹參藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)和開(kāi)發(fā)新的天然藥物具有十分重要的意義。而丹酚酸B在水溶液中的穩(wěn)定性與pH值、 溫度有很大關(guān)系，給中藥制劑的生產(chǎn)和儲(chǔ)存帶來(lái)較大的困難。目前丹酚酸B的分離純化方法主要有(1)柱層析法，但操作比較復(fù)雜，效率不高， 而且需要不同填料結(jié)合使用；(2)制備型高效液相色譜法，對(duì)設(shè)備和試劑要求高，成本較高，難以規(guī)模化生產(chǎn)；(3)高速逆流色譜法，需要進(jìn)行大量實(shí)驗(yàn)選擇合適的溶劑系統(tǒng)。快速制備色譜是在傳統(tǒng)柱色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的快速分離系統(tǒng)，采用自動(dòng)輸液系統(tǒng)和更小粒徑的填料，通過(guò)連接檢測(cè)器進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，并可自動(dòng)收集餾分。該色譜儀可使用分析純?cè)噭┳隽鲃?dòng)相，降低了成本，可承受較高流速，通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的比例實(shí)現(xiàn)對(duì)物質(zhì)的快速、有效分離，并且重復(fù)性好。丹酚酸B的結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種快速制備色譜分離制備丹酚酸B的方法，其特征在于丹參藥材先用含乙醇的水溶液提取，經(jīng)有機(jī)溶劑萃取得到浸膏，以浸膏為原料，以快速制備色譜為分離手段，以甲醇-水為洗脫體系，最終制得丹酚酸B;具體步驟為(1)藥材處理丹參藥材以1 10 20的料液比(m/v)，用體積分?jǐn)?shù)30% 80%的乙醇-水溶液，超聲提取0. 5 池，過(guò)濾，濾液60°C以下減壓濃縮至為原體積的1/2 1/4，過(guò)濾，濾液用乙醚萃取，乙醚用量與濃縮液體積比為0. 5 1 ；水層加酸調(diào)節(jié)pH為3 4，過(guò)濾獲得水層清液，水層清液以乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層減壓濃縮至干，得到乙酸乙酯浸膏；(2)樣品處理乙酸乙酯浸膏加體積分?jǐn)?shù)10% 70%的甲醇-水溶解，得濃度為30 60mg · mL—1的樣品溶液，離心，取上清液，得到樣品溶液；(3)色譜柱預(yù)處理快速制備色譜選擇制備型中低壓液相色譜柱，以洗脫體系溶液平衡色譜柱；洗脫體系溶液為甲醇-水溶液，其中甲醇在甲醇-水溶液中的體積分?jǐn)?shù)為 25% 50% ；(4)進(jìn)樣將步驟( 獲得的樣品溶液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為1 5mL；(5)洗脫采用洗脫體系溶液洗脫，流速控制在3 5mL· HiirT1，收集洗脫液；洗脫體系溶液為甲醇-水溶液，其中甲醇在甲醇-水溶液中的體積分?jǐn)?shù)為25% 50% ；(6)丹酚酸B的獲取收集的洗脫液經(jīng)飽和后，用乙酸乙酯萃取，經(jīng)濃縮和干燥得到丹酚酸B。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟⑴所述的提取溫度小于60°C。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述超聲提取0.5 池后，過(guò)濾的殘?jiān)戳弦罕? 10 20的比例加入體積分?jǐn)?shù)30% 80%乙醇再次提取0.5 濁，合并兩次的提取液，濾過(guò)，合并濾液，濃縮；過(guò)濾，濾液以乙醚萃取，棄去，水層調(diào)pH為3 4 后，過(guò)濾，濾液再以乙酸乙酯萃取；步驟(1)調(diào)節(jié)水層為酸性采用鹽酸溶液，濃度為0.1 Imol · L—1O
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的乙醚萃取次數(shù)為1 3次，每次乙醚的用量與濃縮液的體積比為1 0.5 1。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的乙酸乙酯萃取次數(shù)為1 3 次，每次乙酸乙酯的用量與水層清液體積比為1 0.5 1。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)是以5 10倍柱體積的洗脫體系溶液平衡色譜柱。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)所述制備型中低壓色譜柱選用商品化或自己填充的中低壓色譜柱，填料為C18鍵合相填料；色譜柱填料平均粒徑為30 60 μ m0
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(6)收集的洗脫液加入氯化鈉固體至飽和，用乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯層，經(jīng)減壓濃縮和真空干燥得丹酚酸B，減壓濃縮和真空干燥的溫度為30°C 60°C。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(5)所述的洗脫過(guò)程采用在線紫外檢測(cè)， 自動(dòng)收集洗脫液，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為2Mnm和^6nm。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種快速制備色譜分離制備丹酚酸B的方法，是一種從丹參藥材中分離純化得到純度大于98.0％的丹酚酸B的制備方法。藥材經(jīng)提取、有機(jī)溶劑萃取之后得到乙酸乙酯浸膏，采用快速制備色譜儀，C18鍵合相為填料的中低壓色譜柱，以甲醇-水為洗脫體系，自動(dòng)收集洗脫液。洗脫液經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，減壓濃縮真空干燥，最后得到純度>98.0%的丹酚酸B。本發(fā)明所述方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，操作簡(jiǎn)便，成本低，重復(fù)性好，效率高，所得產(chǎn)品純度高，可用于丹酚酸B的規(guī)模化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07D307/86GK102532077SQ201210004340
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月6日
發(fā)明者徐新軍, 楊梅, 王大沖, 王建, 謝春燕, 謝鷙生, 黃潔云 申請(qǐng)人:中山大學(xué), 回音必集團(tuán)(江西)東亞制藥有限公司