專利名稱：在制備抗毒素、抗血清中滅活病毒的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在制備抗毒素、抗血清過(guò)程中同時(shí)滅活病毒的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
抗毒素、抗血清(Antitoxin/Antiserum)是指采用特定的抗原免疫動(dòng)物后，再收集高效價(jià)免疫血清，并經(jīng)過(guò)提取、純化后，制備出含完整抗體(IgG)或抗體片段[F(ab’ )2]的免疫球蛋白制品。以用于預(yù)防和治療各相應(yīng)疾病引起的感染。由于抗毒素、抗血清原料來(lái)源于馬匹，而馬匹又飼養(yǎng)在開(kāi)放的環(huán)境中，其可能攜帶的病毒較多，因而該制品存在生物安全性問(wèn)題。為了保證該制品的安全性，除要控制免疫馬匹飼養(yǎng)環(huán)境和原料血漿質(zhì)量外，在抗毒素、抗血清生產(chǎn)過(guò)程中，如何有效除去或滅活原料血漿中的病毒，是獲得安全可靠的抗毒素、抗血清等血液制品的關(guān)鍵問(wèn)題。目前國(guó)內(nèi)外較為成熟的病毒滅活/去除方法有巴氏消毒法、干熱法、有機(jī)溶劑/ 去污劑法、納米膜過(guò)濾法、光化學(xué)法等，但對(duì)于動(dòng)物源性生化提取制品，尤其是規(guī)模化生產(chǎn)的抗毒素、抗血清的滅活病毒工藝，國(guó)內(nèi)外至今未見(jiàn)報(bào)道。巴氏消毒法和干熱法屬熱力處理滅活病毒方法，即通過(guò)熱力使病毒蛋白變性，以破壞病毒結(jié)構(gòu)從而滅活病毒，但同時(shí)熱力也存在會(huì)使蛋白制品變性或生物活性降低的問(wèn)題，故采用上述兩種方法滅活病毒時(shí)，常需在蛋白制品中加入保護(hù)劑，但同時(shí)保護(hù)劑在保護(hù)蛋白制品的同時(shí)也保護(hù)了病毒，降低了病毒滅活率，從而加大了病毒滅活的難度。納米膜過(guò)濾法主要利用病毒顆粒與蛋白分子的大小差異，通過(guò)納米級(jí)的濾膜把病毒除去，但只適于小分子(直徑較小)的蛋白制品，不適于大分子(較大直徑)的蛋白制品，且納米膜價(jià)格昂貴。 光化學(xué)法是利用某些光敏劑對(duì)病毒表面及病毒核酸結(jié)構(gòu)具有強(qiáng)烈的親和作用，在適當(dāng)波長(zhǎng)的光照下易激活，從而通過(guò)光化學(xué)作用破壞與其接觸的病毒結(jié)構(gòu)的方法，但該方法對(duì)一些蛋白活性損傷較大。有機(jī)溶劑/去污劑法是利用有機(jī)溶劑和去污劑的配伍，破壞病毒的脂質(zhì)包膜，使其失去傳染性，從而達(dá)到滅活病毒的目的。該方法有很好的蛋白質(zhì)兼容性，能有效滅活病毒，且對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的影響甚微，但如何從制品中除去加入的有機(jī)溶劑和去污劑，則是該方法最大的難點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有生物制品中病毒滅活或去除存在的操作時(shí)間長(zhǎng)，容易造成活性物質(zhì)失活，病毒滅活不徹底，適用范圍受限等不足，本發(fā)明提供一種簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)、適用范圍廣的，能在制備抗毒素、抗血清過(guò)程中，同時(shí)滅活存在于血液中的病毒的方法，以保證抗毒素、 抗血清制品能夠更安全有效地應(yīng)用于臨床。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是一種在制備抗毒素、抗血清中滅活病毒的方法，其特征在于包括下列步驟A、將血漿原料稀釋2 4倍體積后，調(diào)節(jié)稀釋液pH值至2.8 4. 0 ；
B、在每IOOml步驟A的稀釋液中，加入0.1 l.Og胃酶，于四 311下消化1 3小時(shí)，或者于20 22°C下消化20 22小時(shí)，得消化液；
C、在每IOOml步驟B的消化液中，加入14 16g硫酸銨，并調(diào)節(jié)混合液pH值至4. 8 5. 6，加熱混合液至57 59°C，并保持30分鐘，降溫至45 °C以下，分離，得上清液；
D、將步驟C的上清液稀釋至所含蛋白濃度為10 50g/L，在該稀釋液中加入有機(jī)溶劑和去污劑，直至每IOOml稀釋液中含有0. 25 1. 35g的有機(jī)溶劑，每IOOml稀釋液中含有 1. 00 1. 35g的去污劑，于M 37°C水浴中恒溫4 6小時(shí)，得混合液；
E、在每IOOml步驟D的混合液中，加入15 25g硫酸銨，靜置90 180分鐘，分離去上清液，得沉淀物；
F、將步驟E的沉淀物稀釋至蛋白含量低于20g/L,調(diào)整稀釋液pH值為7. 7 7. 9，并按每IOOml稀釋液加入0. 6 1. Og明礬的量，在稀釋液中加入明礬，靜置60 120分鐘后， 過(guò)濾得上清液；
G、將步驟F的上清液用3 5萬(wàn)分子量的濾膜，濃縮至五分之一體積時(shí)，在濃縮液中加入20mM、pH值為6. 0 8. 0、加入量是步驟A的原料血漿體積的2 5倍的PB進(jìn)行置換、 濃縮，直至硫酸銨含量低于1. 0 g/L，得濃縮液；
H、將步驟F的濃縮液，經(jīng)離子交換層析后，得收集液，按常規(guī)對(duì)收集液進(jìn)行除菌、過(guò)濾后，分裝得滅活病毒的抗毒素、抗血清制品。所述步驟A、D、F的稀釋是采用注射用水或者質(zhì)量濃度為0. 8 1. 0%的NaCL溶液進(jìn)行稀釋的。所述步驟A的稀釋液PH值是用1 4N的鹽酸溶液調(diào)整的，酸濃度過(guò)大，則會(huì)使pH 值的精確控制變?yōu)槔щy，酸濃度太小時(shí)，又會(huì)增加溶液(體積)的加入量，使待處理的制品濃度過(guò)稀。所述步驟C的混合液PH值、步驟F的稀釋液是用1 4N的氫氧化鈉溶液調(diào)整的， 堿濃度過(guò)大，則會(huì)使PH值的精確控制變?yōu)槔щy，堿濃度太小時(shí)，又會(huì)增加過(guò)量(體積)的溶液，使待處理的制品濃度過(guò)稀。所述步驟D的有機(jī)溶劑為醫(yī)用級(jí)的磷酸三丁酯；去污劑為醫(yī)用級(jí)的聚山梨酯-80 或"Triton X-100中的一種，其中聚山梨酯_80終濃度為每IOOml稀釋液中含有1.00 1. 35g的聚山梨酯-80，Triton X-100終濃度為每IOOml稀釋液中含有1. 00 1. 35g的 Triton X-IOO0所述步驟H的離子交換層析的介質(zhì)為Q Sepharose Fast Flow ,DEAE Sepharose Fast Flow中的一種陰離子交換劑。所述抗血清制品包括破傷風(fēng)抗毒素、抗狂犬病血清或抗蛇毒血清。本發(fā)明具有下列優(yōu)點(diǎn)和效果采用上述方案，能在制備抗毒素、抗血清過(guò)程中，用有機(jī)溶劑和去污劑破壞病毒的脂質(zhì)包膜，使其失去傳染性，從而徹底滅活血漿中殘留的病毒，同時(shí)保持蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，之后再用離子交換層析，有效除去有機(jī)溶劑和去污劑的殘留，使制品純度進(jìn)一步提高，因?yàn)樗x用的有機(jī)溶劑及去污劑為非離子型，不會(huì)與離子交換劑結(jié)合，而制品中的蛋白則能與離子交換劑結(jié)合，從而使有機(jī)溶劑和去污劑與蛋白完全分離，之后再在離子交換分離清洗過(guò)程中，除去有機(jī)溶劑和去污劑，不僅病毒滅活操作簡(jiǎn)單，處理時(shí)間短，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，而且所得制品純度高、安全性好。本發(fā)明作了經(jīng)離子交換層析后TNBP、Trit0n X-100殘留量實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。表1
樣品殘鑿靈(ug/ml)TIBPTriton X-10020100901201009022010C903201009012010090220100903屋析液2.22. 22.4碰出未檢出
從表中可見(jiàn)，經(jīng)離子交換層，TNBP, Triton X_100殘留量均低于限定值，即 TNBP 彡 10ug/ml, Triton X-100 彡 10ug/ml。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作更詳細(xì)的介紹。實(shí)施例1
在制備破傷風(fēng)抗毒素中滅活病毒的方法，包括下列步驟
A、將馬血漿原料用注射用水稀釋2倍體積后，用IN的鹽酸溶液調(diào)節(jié)稀釋液pH值至
2. 8 ；
B、在每IOOml步驟A的稀釋液中，加入0.Ig胃酶，于下消化3小時(shí)，得消化液；
C、在每IOOml步驟B的消化液中，加入14g硫酸銨，并用IN的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)混合液PH值至4. 8，加熱混合液至57°C，并保持30分鐘，降溫至45°C以下，分離，得上清液；
D、將步驟C的上清液用注射用水稀釋至所含蛋白濃度為10g/L，在該稀釋液中加入醫(yī)用級(jí)有機(jī)溶劑磷酸三丁酯和醫(yī)用級(jí)去污劑Triton X-100，直至每100ml稀釋液中含有磷酸三丁酯0. 25g，每100ml稀釋液中含有1. 00g Triton X-100，于水浴中恒溫6小時(shí)，得混合液；
E、在每100ml步驟D的混合液中，加入15g硫酸銨，靜置90分鐘，分離去上清液，得沉淀物；
F、將步驟E的沉淀物用注射用水稀釋至蛋白含量低于20g/L，用IN氫氧化鈉溶液調(diào)整稀釋液PH值為7. 7，并按每100ml稀釋液加入0. 6g明礬的量，在稀釋液中加入明礬，靜置 120分鐘后，過(guò)濾得上清液；
G、將步驟F的上清液用3萬(wàn)分子的濾膜，濃縮至五分之一體積時(shí)，在濃縮液中加入 20mM、pH值為7. 0、加入量是步驟A的馬原料血漿體積的2倍的PB進(jìn)行置換、濃縮，直至硫酸銨含量低于1. 0 g/L，得濃縮液；
H、將步驟F的濃縮液，經(jīng)過(guò)其上裝有介質(zhì)為QSepharose Fast Flow陰離子交換劑的離子交換層析后，得收集液，按常規(guī)對(duì)收集液進(jìn)行除菌、過(guò)濾后，分裝得滅活病毒的破傷風(fēng)抗毒素制品。實(shí)施例2
在制備抗狂犬病血清中滅活病毒的方法，包括下列步驟
A、將血漿原料用注射用水稀釋4倍體積后，用4N鹽酸溶液調(diào)節(jié)稀釋液pH值至4.0；
B、在每100ml步驟A的稀釋液中，加入Ig胃酶，于31°C下消化1小時(shí)，得消化液；
5C、在每IOOml步驟B的消化液中，加入16g硫酸銨，并用4N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)混合液PH值至5. 6，加熱混合液至59°C，并保持30分鐘，降溫至45 °C以下，分離，得上清液；
D、將步驟C的上清液用注射用水稀釋至所含蛋白濃度為50g/L，在該稀釋液中加入醫(yī)用級(jí)有機(jī)溶劑磷酸三丁酯和醫(yī)用級(jí)去污劑Triton X-100，直至每IOOml稀釋液中含有磷酸三丁酯1.35 g，每IOOml稀釋液中含有1.35g Triton X-100，于37°C水浴中恒溫4小時(shí)，得混合液；
E、在每IOOml步驟D的混合液中，加入25g硫酸銨，靜置180分鐘，分離去上清液，得沉淀物；
F、將步驟E的沉淀物用注射用水稀釋至蛋白含量低于20g/L，用4N氫氧化鈉溶液調(diào)整稀釋液PH值為7. 9，并按每IOOml稀釋液加入1. Og明礬的量，在稀釋液中加入明礬，靜置 60分鐘后，過(guò)濾得上清液；
G、將步驟F的上清液用5萬(wàn)分子的濾膜，濃縮至五分之一體積時(shí)，在濃縮液中加入 30mM、pH值為7. 6、加入量是步驟A的原料血漿體積的5倍的PB進(jìn)行置換、濃縮，直至硫酸銨含量低于1.0g/L，得濃縮液；
H、將步驟F的濃縮液，經(jīng)過(guò)其上裝有介質(zhì)為DEAESepharose Fast Flow陰離子交換劑的離子交換層析后，得收集液，按常規(guī)對(duì)收集液進(jìn)行除菌、過(guò)濾后，分裝得滅活病毒的抗狂犬病血清制品。 實(shí)施例3
在制備抗蛇毒血清中滅活病毒的方法，包括下列步驟
A、將血漿原料用質(zhì)量濃度為0.8%的NaCL溶液稀釋3倍后，用3N鹽酸溶液調(diào)節(jié)稀釋液 pH值至3. 2 ；
B、在每IOOml步驟A的稀釋液中，加入0.5 g胃酶，于20°C下消化22小時(shí)，得消化液；
C、在每IOOml步驟B的消化液中，加入15g硫酸銨，并用3N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)混合液PH值至5. 0，加熱混合液至57°C，并保持30分鐘，降溫至45°C以下，分離，得上清液；
D、將步驟C的上清液用質(zhì)量濃度為0.8%的NaCL溶液稀釋至所含蛋白濃度為25 g/ L，在該稀釋液中加入醫(yī)用級(jí)有機(jī)溶劑磷酸三丁酯和醫(yī)用級(jí)去污劑聚山梨酯-80，直至每 IOOml稀釋液中含有磷酸三丁酯0.85 g，每IOOml稀釋液中含有1. 20 g聚山梨酯-80，于
水浴中恒溫5小時(shí)，得混合液；
E、在每IOOml步驟D的混合液中，加入18g硫酸銨，靜置100分鐘，分離去上清液，得沉淀物；
F、將步驟E的沉淀物用質(zhì)量濃度為0.8%的NaCL溶液稀釋至蛋白含量低于20 g/L，用 3N氫氧化鈉溶液調(diào)整稀釋液pH值為7. 8，并按每IOOml稀釋液加入0. 8 g明礬的量，在稀釋液中加入明礬，靜置100分鐘后，過(guò)濾得上清液；
G、將步驟F的上清液用5萬(wàn)分子的濾膜，濃縮至五分之一體積時(shí)，在濃縮液中加入 25mM、pH值為7. 4、加入量是步驟A的原料血漿體積的3倍的PB進(jìn)行置換、濃縮，直至硫酸銨含量低于1.0 g/L，得濃縮液；
H、將步驟F的濃縮液，經(jīng)過(guò)其上裝有介質(zhì)為QSepharose Fast Flow陰離子交換劑的離子交換層析后，得收集液，按常規(guī)對(duì)收集液進(jìn)行除菌、過(guò)濾后，分裝得滅活病毒的抗蛇毒血清制品。
實(shí)施例4
在制備抗蛇毒血清中滅活病毒的方法，包括下列步驟
A、將血漿原料用質(zhì)量濃度為1.0%的NaCL溶液稀釋3倍后，用3N鹽酸溶液調(diào)節(jié)稀釋液 pH值至3.6 ；
B、在每IOOml步驟A的稀釋液中，加入0.7 g胃酶，于22°C下消化20小時(shí)，得消化液；
C、在每IOOml步驟B的消化液中，加入15g硫酸銨，并用3N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)混合液PH值至5. 0，加熱混合液至57°C，并保持30分鐘，降溫至45°C以下，分離，得上清液；
D、將步驟C的上清液用質(zhì)量濃度為1.0%的NaCL溶液稀釋至所含蛋白濃度為35g/ L，在該稀釋液中加入醫(yī)用級(jí)有機(jī)溶劑磷酸三丁酯和醫(yī)用級(jí)去污劑聚山梨酯-80，直至每 IOOml稀釋液中含有磷酸三丁酯0. 90 g，每IOOml稀釋液中含有1.20 g聚山梨酯-80，于 25°C水浴中恒溫5小時(shí)，得混合液；
E、在每IOOml步驟D的混合液中，加入20g硫酸銨，靜置100分鐘，分離去上清液，得沉淀物；
F、將步驟E的沉淀物用質(zhì)量濃度為1.0%的NaCL溶液稀釋至蛋白含量低于20 g/L，用 3N氫氧化鈉溶液調(diào)整稀釋液pH值為7. 8，并按每IOOml稀釋液加入0. 8 g明礬的量，在稀釋液中加入明礬，靜置100分鐘后，過(guò)濾得上清液；
G、將步驟F的上清液用5萬(wàn)分子的濾膜，濃縮至五分之一體積時(shí)，在濃縮液中加入 25mM、pH值為7. 2、加入量是步驟A的原料血漿體積的4倍的PB進(jìn)行置換、濃縮，直至硫酸銨含量低于1.0 g/L，得濃縮液；
H、將步驟F的濃縮液，經(jīng)過(guò)其上裝有介質(zhì)為QSepharose Fast Flow陰離子交換劑的離子交換層析后，得收集液，按常規(guī)對(duì)收集液進(jìn)行除菌、過(guò)濾后，分裝得滅活病毒的抗蛇毒血清制品。為表明本發(fā)明在制備抗毒素、抗血清過(guò)程中，徹底滅活血漿中殘留的病毒的滅活效果，下面通過(guò)檢測(cè)實(shí)例加以驗(yàn)證，其中滅活效果的檢測(cè)是依據(jù)國(guó)藥監(jiān)注[2002]第160號(hào)文進(jìn)行的
A)各取三批馬血漿樣品用注射用水稀釋至3倍體積，分別加入水皰性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus，VSV，滴度為8. 0 TCID50/ml)和脊髄灰質(zhì)炎病毒 (P0li0Virus，PV-l，滴度為9.0 TCID50/ml)為指示病毒，Vero細(xì)胞為病毒檢測(cè)用細(xì)胞。按實(shí)施例1的方法制得滅活病毒的破傷風(fēng)抗毒素制品；
B)同時(shí)留存部分病毒作對(duì)照；
C)病毒檢測(cè)
采用96孔培養(yǎng)板微量法培養(yǎng)4天觀察，用Karber法計(jì)算病毒滴度，以評(píng)估滅活病毒的效率。病毒滅活驗(yàn)證方案設(shè)未處理的含病毒的陽(yáng)性對(duì)照、S/D系統(tǒng)空白對(duì)照(含病毒)，無(wú)病毒陰性對(duì)照，驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表2。注每組數(shù)據(jù)重復(fù)測(cè)定兩次，取平均值。驗(yàn)證結(jié)論在本發(fā)明方法中，有機(jī)溶劑/去污劑(S/D)處理0.5h、1.0h、2.0h和 4. Oh后，可分別將樣品中8.5 logs的水皰性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus, VSV)和9.0 logs的脊髄灰質(zhì)炎病毒(Poliovirus，PV-I )降到2. 0 3. 0 logs，且重復(fù)三次檢測(cè)數(shù)據(jù)相近，根據(jù)國(guó)藥監(jiān)注[2002]160號(hào)文的規(guī)定，認(rèn)定本方法為有效的病毒滅活方法。為有效保證抗毒素、抗血清的質(zhì)量及其安全性，按本發(fā)明實(shí)施例1連續(xù)生產(chǎn)的三批破傷風(fēng)抗毒素制品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。表2S/D法滅活病毒工藝驗(yàn)證結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種在制備抗毒素、抗血清中滅活病毒的方法，其特征在于包括下列步驟A、將血漿原料稀釋2 4倍體積后，調(diào)節(jié)稀釋液pH值至2.8 4. 0 ；B、在每IOOml步驟A的稀釋液中，加入0.1 l.Og胃酶，于四 311下消化1 3小時(shí)，或者于20 22°C下消化20 22小時(shí)，得消化液；C、在每IOOml步驟B的消化液中，加入14 16g硫酸銨，并調(diào)節(jié)混合液pH值至4. 8 5. 6，加熱混合液至57 59°C，并保持30分鐘，降溫至45 °C以下，分離，得上清液；D、將步驟C的上清液稀釋至所含蛋白濃度為10 50g/L，在該稀釋液中加入有機(jī)溶劑和去污劑，直至每IOOml稀釋液中含有0. 25 1. 35g的有機(jī)溶劑，每IOOml稀釋液中含有 1. 00 1. 35g的去污劑，于M 37°C水浴中恒溫4 6小時(shí)，得混合液；E、在每IOOml步驟D的混合液中，加入15 25g硫酸銨，靜置90 180分鐘，分離去上清液，得沉淀物；F、將步驟E的沉淀物稀釋至蛋白含量低于20g/L,調(diào)整稀釋液pH值為7. 7 7. 9，并按每IOOml稀釋液加入0. 6 1. Og明礬的量，在稀釋液中加入明礬，靜置60 120分鐘后， 過(guò)濾得上清液；G、將步驟F的上清液用3 5萬(wàn)分子量的濾膜，濃縮至五分之一體積時(shí)，在濃縮液中加入20mM、pH值為6. 0 8. 0、加入量是步驟A的原料血漿體積的2 5倍的PB進(jìn)行置換、 濃縮，直至硫酸銨含量低于1.0 g/L，得濃縮液；H、將步驟F的濃縮液，經(jīng)離子交換層析后，得收集液，按常規(guī)對(duì)收集液進(jìn)行除菌、過(guò)濾后，分裝得滅活病毒的抗毒素、抗血清制品。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟A、D、F的稀釋是采用注射用水或質(zhì)量濃度為0. 8 1. 0%的NaCl溶液進(jìn)行稀釋的。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟A的稀釋液pH值、步驟C的混合液 PH值，是用1 4N的鹽酸溶液調(diào)整的。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟F的稀釋液pH值是用1 4N的氫氧化鈉溶液調(diào)整的。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟D的有機(jī)溶劑為醫(yī)用級(jí)的磷酸三丁酯；去污劑為醫(yī)用級(jí)的聚山梨酯-80或Triton X-100中的一種，其中聚山梨酯_80終濃度為每IOOml稀釋液中含有1. 00 1. 35g的聚山梨酯-80, Triton X-100終濃度為每IOOml 稀釋液中含有1. 00 1. 35g的Triton X-IOO0
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟H的離子交換層析的介質(zhì)為Q Sepharose Fast Flow、DEAE Sepharose Fast Flow 中的一種陰離子交換劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種在制備抗毒素、抗血清中滅活病毒的方法，它將原料馬血漿稀釋并經(jīng)胃酶消化、加溫變性去沉淀后，加入有機(jī)溶劑和去污劑進(jìn)行病毒滅活，再經(jīng)硫酸銨鹽析分離、明礬吸附、超濾濃縮/脫鹽、離子交換層析得收集液，經(jīng)除菌過(guò)濾后，分裝得制品。通過(guò)有機(jī)溶劑和去污劑破壞病毒的脂質(zhì)包膜，使其失去傳染性，從而徹底滅活血漿中殘留的病毒，同時(shí)保持蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，之后再有效除去有機(jī)溶劑和去污劑的殘留，使制品純度進(jìn)一步提高，不僅病毒滅活操作簡(jiǎn)單，處理時(shí)間短，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，而且所得制品純度高、安全性好。
文檔編號(hào)C07K16/06GK102532306SQ201210004548
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月9日
發(fā)明者吳笛, 楊冬, 羅靖雄 申請(qǐng)人:玉溪九洲生物技術(shù)有限責(zé)任公司