從何首烏中快速分離制備二苯乙烯苷的方法
【專利摘要】一種從何首烏中快速分離制備二苯乙烯苷的方法，屬于二苯乙烯苷的提取分離【技術領域】。本發明以生何首烏為原料，經過制備原料浸膏、原料浸膏脫脂、制備二苯乙烯苷粗品及精品而得二苯乙烯苷產品。本發明具有提取效率高，分離制備工藝簡單，分離過程快速省時，制備產品純度高、重現性好，原料利用充分，生產成本低等特點。本發明可廣泛應用于從何首烏中分離制備二苯乙烯苷產品，能有效滿足常規藥效學實驗研究中高純度樣品制備的的需求。
【專利說明】從何首烏中快速分離制備二苯乙烯苷的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于二苯乙烯苷的提取分離【技術領域】，具體涉及從何首烏藥材中超聲提取和中壓制備色譜快速分離純化二苯乙烯苷的方法。
【背景技術】
[0002]二苯乙烯苷又稱芪多酚，屬于多羥基芪類化合物，二苯乙烯苷是何首烏藥材中特有的生物活性成分，是何首烏藥材的專屬性指標組分，易溶于水、甲醇、乙醇。藥理研究表明，二苯乙烯苷具有抗氧化清除自由基、抗衰老、降低膽固醇、保肝及神經保護作用，可開發研制治療老年性癡呆、降血脂和抗動脈粥樣硬化的新藥物。
[0003]中壓制備色譜是根據被分離組分在色譜柱固定相上吸附力不同而保留時間不同，從而實現分離的色譜技術。通過優化操作參數實現物質組分快速分離制備，節約時間。相對于常壓色譜來說，中壓色譜分離速度較快，洗脫溶劑選擇范圍較寬，溶劑洗脫過程可線性變換，有利于目標組分的快速分離和制備。
[0004]現有從何首烏中分離制備二苯乙烯苷的方法，如2012年10月17日公布的公布號為CN102731586A的“何首烏二苯乙烯苷的制備工藝”專利，公開的方法為:首先采用稀乙醇為提取溶劑對何首烏藥材進行回流提取，然后使用乙酸乙酯對提取液進行萃取，再對乙酸乙酯萃取層依次進行硅膠柱層析和S^hadex LH-20柱層析分離，最后制備得到含量為85%的二苯乙烯苷。該方法的主要缺點在于:①采用高溫回流提取二苯乙烯苷，在高溫條件下二苯乙烯苷易被氧化和糖苷鍵斷裂，該提取方法對二苯乙烯苷造成破壞；②采用常壓柱色譜多次分離，過程繁瑣、耗時長，溶劑耗量大，提高了制備成本；③組分在常壓柱子中停留時間過長而產生死吸附,樣本損失大，回收率較低。

【發明內容】

[0005]本發明的目的是針對現有二苯乙烯苷分離制備方法的不足，提供一種從何首烏藥材中快速分離制備二苯乙烯苷的方法，具有提取效率高，分離制備工藝簡單，分離過程快速省時，制備產品純度高、重現性好，原料利用充分，生產成本低等特點。
[0006]實現本發明目的的技術方案為:一種從何首烏藥材中快速分離制備二苯乙烯苷的方法:以生何首烏藥材為原料，經過制備原料浸膏、原料浸膏脫脂、制備二苯乙烯苷粗品及精品而得二苯乙烯苷產品。所述方法的具體步驟如下:
[0007](I)制備原料浸膏:
[0008]以生何首烏的藥材飲片為原料，以稀乙醇為提取溶劑。先將原料放入粉碎機中進行粉碎，并經50~100目的鐵篩過篩，收集過篩的原料粉末，未過篩的原料再放入粉碎機中粉碎。然后按原料粉末 的質量(g):稀乙醇的體積(mL)之比為1: 5~15的比例，將原料粉末和稀乙醇放置于超聲提取器中，先攪拌混合均勻，再在超聲功率為300~500W、超聲工作頻率為30~60KHZ、溫度為50~70°C條件下，進行第一次超聲提取0.5~1.5h后，將提取液進行第一次過濾，分別收集第一次的濾液和濾渣。將第一次收集的濾渣再放置于超聲提取器中，再按濾渣的質量(g):稀乙醇的體積(mL)之比為1: 5~15的比例，再將第一次收集的濾渣和稀乙醇置于超聲提取器中，先攪拌混合均勻，再在超聲功率為300~500W、超聲工作頻率為30~60KHZ、溫度為50~70C條件下，進行第二次超聲提取0.5~1.5h后，再將提取液進行第二次過濾，再分別收集濾液和濾渣，如此重復I~2次。最后合并各次收集的濾液，并將最后合并的濾液放置于旋轉蒸發儀減壓濃縮至浸膏狀，就制備出原料浸膏
I;對最后收集的濾渣可用于繼續開發利用其中的多糖組分。
[0009](2)原料浸膏I脫脂:
[0010]第(I)步完成后，先按照第(I)步制備出的原料浸膏I的質量(g):石油醚的體積(mL)之比為1: 5~10的比例，將原料浸膏I和石油醚加入水浴回流提取裝置中，在60~100°C的水浴環境中，進行第一次回流提取0.5~1.5小時后，進行第一次過濾，分別收集濾液(即石油醚溶劑層)和濾渣(即膏體)。再按照第一次收集的濾渣的質量(g):石油醚的體積(mL)比為1: 5~10的比例，將第一次收集的濾渣和石油醚加入水浴回流提取裝置中，再在60~100°C的水浴環境中，進行第二次回流提取0.5~1.5小時，再進行第二次過濾，再分別收集濾液(即石油醚溶劑層)和濾渣(即膏體)，如此重復I~2次。最后收集的濾渣，就制得脫脂處理后的原料浸膏II ;最后合并各次收集的濾液可用于大黃素等產品的制備。
[0011](3)制備二苯乙烯苷粗品
[0012]第⑵步完成后，先按照第(2)步制得的原料浸膏II的質量(g):純水的體積(mL)之比為1: 5~10的比例，將原料浸膏II和純水加入到容器中，攪拌至溶解，就制得待分離樣本III。再對中壓制備色譜儀進行設置，采用初始洗脫溶劑進行分離柱平衡，調整泵流速為3~20mL/min，柱壓為0.5~2Mpa，待柱壓穩定后，再將待分離樣本III放置于中壓制備色譜儀中吸附O~IOmin后，在分離柱填料為50~70 μ m的ODS或SBC MCI GEL反相填料、洗脫溶劑為A和B兩元混合溶劑體系條件下進行中壓色譜分離。其中:溶劑A為水；溶劑B為甲醇或乙腈；溶劑A:溶劑B的體積比為0-100。上樣前，用初始洗脫溶劑平衡分離柱，調整泵流速為3~20mL/min，柱壓為0.5~2Mpa，待柱壓穩定后，將待分離樣本III泵入分離柱中，吸附O~IOmin后開始分離；再在320nm的檢測波長下收集出峰流分，將收集的出峰流分放置于旋轉蒸發儀中進行濃縮，就制得二苯乙烯苷粗品IV。
[0013](4)制備二苯乙烯苷產品
[0014]第(3)步完成后，在步驟(3)制得的二苯乙烯苷粗品IV中加入50~70°C的純水，攪拌至溶解，就制備成所述二苯乙烯苷粗品IV的熱飽和水溶液。然后通過微孔濾膜進行過濾，分別收集濾液和濾渣，然后將濾液在O~25°C下靜置10~24h析晶，晶體經真空冷凍干燥后就制得二苯乙烯苷產品V ;濾渣處理后排放。
[0015]本發明采用上述技術方案后，主要有以下效果:
[0016]1.本發明以生何首烏藥材為原料，經過制備原料浸膏、原料浸膏脫脂、制備二苯乙烯苷粗品及精品而得二苯乙烯苷產品。制備工藝簡單，制備過程節省溶劑，生產成本低，能實現產物的快速分離制備；
[0017]2.本發明采用超聲提取何首烏藥材粗粉中二苯乙烯苷，利用超聲波的空化作用、機械效應和熱效應等加速胞內有效物質的釋放、擴散和溶解，顯著提高提取效率，縮短了提取時間，避免了長時間高溫回流對二苯乙烯苷的破壞，提高了二苯乙烯苷的提取效率，且工藝流程簡單，易操作；
[0018]3.本發明采用中壓制備色譜分離制備二苯乙烯苷，具有分離效率高，儀器要求配置簡易，溶劑選擇范圍廣，分離樣品量較大等優勢。整個分離流程在300min內完成，避免了常規柱層析方法反復操作帶來的目標物損失和大量溶劑消耗，分離所得二苯乙烯苷粗品含量近90% ;通過對分離條件的控制，能使分離結果具有良好的重現性；
[0019]4.本發明中何首烏原料利用充分，既能生產二苯乙烯苷產品，且第一步提取后的濾渣又能用作何首烏多糖的提取原料；第二步中脫脂處理的濾液(即石油醚層)又能用作生產大黃素等產品，從而進一步降低生產成本；
[0020]本發明可廣泛應用于從何首烏中分離制備二苯乙烯苷產品，能有效滿足常規藥效學實驗研究中高純度樣品制備的的需求。
【具體實施方式】
[0021]下面結合【具體實施方式】，進一步說明本發明。
[0022]實施例1
[0023]一種從何首烏藥材中快速分離二苯乙烯苷的方法的具體步驟如下:
[0024](I)制備原料浸膏
[0025]以生何首烏的藥材飲片為原料，以60%稀乙醇為提取溶劑。先將原料放入粉碎機中進行粉碎，并經80目的鐵篩過篩，收集過篩的原料粉末，未過篩的原料再放入粉碎機中粉碎。然后按原料粉末的質量(g):稀乙醇的體積(mL)之比為1: 10的比例，將原料粉末和稀乙醇放置于超聲提取器中，先攪拌混合均勻，再在超聲功率為300W、超聲工作頻率為.40KHZ、溫度為60°C條件下，進行第一次超聲提取0.5h后，將提取液進行第一次過濾，分別收集第一次的濾液和濾渣。將第一次收集的濾渣再放置于超聲提取器中，再按濾渣的質量(g):稀乙醇的體積(mL)之比為1: 10的比例，再將第一次收集的濾渣和稀乙醇置于超聲提取器中，先攪拌混合均勻，再在超聲功率為300W、超聲工作頻率為40KHZ、溫度為60°C條件下，進行第二次超聲提取0.5h后，再將提取液進行第二次過濾，再分別收集濾液和濾渣，如此重復I次。最后合并各次收集的濾液，并將最后合并的濾液放置于旋轉蒸發儀減壓濃縮至浸膏狀，就制備出原料浸膏I ;對最后收集的濾渣可用于繼續開發利用其中的多糖組分。
[0026](2)原料浸膏I脫脂:
[0027]第⑴步完成后，先按照第⑴步制備出的原料浸膏I的質量(g):石油醚的體積(mL)之比為1: 8的比例，將原料浸膏I和石油醚加入水浴回流提取裝置中，在90°C的水浴環境中，進行第一次回流提取1.0小時后，進行第一次過濾，分別收集濾液(即石油醚溶劑層)和濾渣(即膏體)。再按照第一次收集的濾渣的質量(g):石油醚的體積(mL)比為1: 8的比例，將第一次收集的濾渣和石油醚加入水浴回流提取裝置中，再在90°C的水浴環境中，進行第二次回流提取1.0小時，再進行第二次過濾，再分別收集濾液(即石油醚溶劑層)和濾渣(即膏體)，如此重復I次。最后收集的濾渣，就制得脫脂處理后的原料浸膏
.11;最后合并各次收集的濾液可用于大黃素等產品的制備。
[0028](3)制備二苯乙烯苷粗品
[0029]第⑵步完成后，先按照第(2)步制得的原料浸膏II的質量(g):純水的體積(mL)之比為1: 8的比例，將原料浸膏II和純水加入到容器中，攪拌至溶解，就制得待分離樣本III。再對中壓制備色譜儀進行設置，采用初始洗脫溶劑進行分離柱平衡，調整泵流速為5mL/min，柱壓為0.7Mpa，待柱壓穩定后，再將待分離樣本III放置于中壓制備色譜儀中吸附IOmin后，在分離柱填料為50~701 μ m的SBC MCI GEL反相填料、洗脫溶劑為A和B兩元混合溶劑體系條件下進行中壓色譜分離。其中:溶劑A為水；溶劑B為甲醇或乙腈；溶劑B的體積分數隨時間從O %逐漸增加至100%。然后在320nm的檢測波長下收集出峰流分，流分置于旋轉蒸發儀中濃縮，就制得二苯乙烯苷粗品IV。
[0030](4)制備二苯乙烯苷產品
[0031]第(3)步完成后，在步驟(3)制得的二苯乙烯苷粗品IV中加入60°C的純水，攪拌至溶解，就制備成所述二苯乙烯苷粗品IV的熱飽和水溶液。再通過微孔濾膜進行過濾，分別收集濾液和濾渣，然后將濾液在25°C下靜置24h析晶，晶體經真空冷凍干燥后就制得二苯乙烯苷產品V ;濾渣處理后排放。
[0032]實施例2
[0033]一種采用中壓制備色譜快速分離何首烏中二苯乙烯苷的方法，同實施例1，其中:
[0034]第(I)步中:將何首烏藥材500.0g粉碎后，過100目篩，過篩后的藥材粉末與50%稀乙醇溶液按照原料粉末的質量(g):稀乙醇的體積(mL)之比為1: 8，在超聲功率為500W、超聲工作頻率為50KHZ，提取溫度為70°C條件下，提取1.0h，如此重復2次，制備出原
料浸膏I。
[0035]第(2)步中:所述原料浸膏的質量(g):石油醚的體積(mL)之比為1: 10，在95°C的水浴環境中，回流提取0.5h，如此重復操作2次，制得脫脂處理的原料浸膏II。
[0036]第(3)步中:所述原料浸膏II質量(g):純水體積(mL)之比為1: 5 ;以體積分數為25%的乙腈為初始溶劑平衡分離`柱，調整流速為8mL/min，然后將待分離樣本III泵入中壓分離柱中，吸附8min后，在柱填料為SOIOymSBC MCI GEL，洗脫溶劑A為水，溶劑B為乙腈，且溶劑A與溶劑B的體積之比為75: 25，的條件下進行分離，制得二苯乙烯苷粗品IV。
[0037]第(4)步中:所述熱飽和水溶液溫度為50°C，然后在4°C下靜置12h析晶，晶體經冷凍干燥后得到二苯乙烯苷產品V。
[0038]實施例3
[0039]一種采用中壓制備色譜快速分離何首烏中二苯乙烯苷的方法，同實施例1，其中:
[0040]第(I)步中:將何首烏藥材500.0g粉碎后，過60目篩，過篩后的藥材粉末與40%稀乙醇溶液按照原料粉末的質量(g):稀乙醇的體積(mL)之比為1: 15，添加入超聲提取裝置中，在超聲功率為350W、超聲工作頻率為40KHZ，提取溫度為65°C條件下，進行超聲提取1.5h后，重復操作2次，制備出原料浸膏I。
[0041]第⑵步中:所述原料浸膏的質量(g):石油醚的體積(mL)之比為1: 5，在60°C的水浴環境中，回流提取1.5h，如此重復操作2次，制得脫脂處理的原料浸膏II。
[0042]第(3)步中:所述原料浸膏II質量(g):純水體積(mL)之比為1: 10 ;以體積分數為15%的甲醇為初始溶劑平衡分離柱，調整流速為15mL/min，然后將待分離樣本III泵入中壓分離柱中，吸附5min后，在柱填料為50-70 μ m 0DS,洗脫溶劑A為水，溶劑B為乙腈，且溶劑A與溶劑B的體積之比為85: 15，的條件下進行分離，制得二苯乙烯苷粗品IV。[0043]第(4)步中:所述熱飽和溶液溫度為70°C，然后在0°C條件下靜置時間IOh析晶，晶體冷凍干燥后得二苯乙烯苷產品V。
[0044]實驗結果
[0045]用本發明中所述方法，制備出的二苯乙烯苷產品V，參照《中國藥典》2010版中何首烏藥材中二苯乙烯苷(TSG)的含量測定項下的測試方法，測得本發明中使用的何首烏藥材中二苯乙烯苷含量為3.6%，實施例1從20g原料浸膏I制備出2.1g 二苯乙烯苷產品，對二苯乙烯苷的提取率產品純度進行測定，具體方法如下:
[0046](I)提取率的計算公式如下:
[0047]
【權利要求】
1.一種從何首烏中快速分離制備二苯乙烯苷的方法，其特征在于所述方法的具體步驟如下: (1)制備原料浸膏 以生何首烏的藥材飲片為原料，以稀乙醇為提取溶劑，先將原料放入粉碎機中進行粉碎，并經50~100目的鐵篩過篩，收集過篩的原料粉末,未過篩的原料再放入粉碎機中粉碎，然后按原料粉末的質量:稀乙醇的體積之比為Ig: 5~15mL的比例，將原料粉術和稀乙醇放置于超聲提取器中，先攪拌混合均勻，再在超聲功率為300~500W、超聲工作頻率為30~60KHZ、溫度為50~70°C條件下，進行第一次超聲提取0.5~1.5h后，將提取液進行第一次過濾，分別收集第一次的濾液和濾渣，將第一次收集的濾渣再放置于超聲提取器中，再按濾渣的質量:稀乙醇的體積之比為Ig: 5~15mL的比例，再將第一次收集的濾渣和稀乙醇置于超聲提取器中，先攪拌混合均勻，再在超聲功率為300~500W、超聲工作頻率為30~60KHZ、溫度為50~70°C條件下，進行第二次超聲提取0.5~1.5h后，再將提取液進行第二次過濾，再分別收集濾液和濾渣，如此重復I~2次，最后合并各次收集的濾液，并將最后合并的濾液放置于旋轉蒸發儀減壓濃縮至浸膏狀，就制備出原料浸膏I ;對最后收集的濾渣可用于繼續開發利用其中的多糖組分； (2)原料浸膏I脫脂 第(I)步完成后，先按照第(I)步制備出的原料浸膏I的質量(g):石油醚的體積(mL)之比為1: 5~10的比例，將原料浸膏I和石油醚加入水浴回流提取裝置中，在60~100°C的水浴環境中，進行第一次回流提取0.5~1.5h后，進行第一次過濾，分別收集濾液，即石油醚溶劑層和濾渣，即膏體，再按照第一次收集的濾渣的質量:石油醚的體積之比為Ig: 5~IOmL的比例，將第一次收集的濾渣和石油醚加入水浴回流提取裝置中，再在60~IOO0C O的水浴環境中，進行第二次回流提取0.5~1.5h，再進行第二次過濾，再分別收集濾液和濾渣，如此重復I~2次，最后收集的濾渣，就制得脫脂處理后的原料浸膏II，最后合并各次收集的濾液可用于大黃素等產品的制備； (3)制備二苯乙烯苷粗品 第(2)步完成后，先按照第(2)步制得的原料浸膏II的質量:純水的體積之比為Ig: 5~IOmL的比例，將原料浸膏II和純水加入到容器中，攪拌至溶解，就制得待分離樣本III，再對中壓制備色譜儀進行設置，采用初始洗脫溶劑進行分離柱平衡，調整泵流速為3~20mL/min，柱壓為0.5~2Mpa，待柱壓穩定后，再將待分離樣本III放置于中壓制備色譜儀中吸附O~IOmin后，在分離柱填料為50~70 μ m的ODS或SBC MCI GEL反相填料、洗脫溶劑為A和B兩元混合溶劑體系條件下進行中壓色譜分離，其中:溶劑A為水、溶劑B為甲醇或乙腈，溶劑A:溶劑B的體積比為0-100，然后在320nm的檢測波長下收集出峰流分，將收集的出峰流分放置于旋轉蒸發儀中進行濃縮，就制得二苯乙烯苷粗品IV ； (4)制備二苯乙烯苷產品 第(3)步完成后，在步驟(3)制得的二苯乙烯苷粗品IV中加入50~70°C的純水，攪拌至溶解，就制備成所述二苯乙烯苷粗品IV的熱飽和水溶液，再通過微孔濾膜進行過濾，分別收集濾液和濾洛，然后將濾液在O~25°C下靜置10~24h析晶，晶體經真空冷凍干燥后就制得二苯乙烯苷產品V，濾渣處理后排放。
【文檔編號】C07H1/08GK103570775SQ201310590129
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年11月22日 優先權日:2013年11月22日
【發明者】徐溢, 張慶, 曹坤, 鄒勝 申請人:重慶大學, 重慶啟泓科技有限公司