專利名稱：一種溫敏性自組裝三嵌段共聚物與藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥用高分子材料領(lǐng)域，尤其涉及一種溫敏性自組裝三嵌段共聚物與藥物組合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，以環(huán)境響應(yīng)性聚合物作為智能藥物傳遞系統(tǒng)的藥物載體已成為藥劑學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。這些聚合物能夠隨著溫度、PH值、化學(xué)結(jié)構(gòu)、電子強(qiáng)度、光或者壓力等環(huán)境因素的變化，產(chǎn)生物理或化學(xué)性狀的改變。其中，具有溫度響應(yīng)性的聚合物材料溶解于水后，能在室溫或者略高于體溫的狀態(tài)下為溶液態(tài)，方便藥物包載和給藥。當(dāng)其注射入人體內(nèi)后，如皮下注射或肌肉注射，由于溫度的變化，迅速轉(zhuǎn)變?yōu)槟z態(tài)，形成藥物儲(chǔ)庫(kù)，使得藥物 在注射部位能夠緩慢釋放。因此，這種具有溫度敏感性的聚合物材料作為局部給藥并緩慢釋藥的藥物傳遞系統(tǒng)有著廣泛的應(yīng)用前景。在溫敏性聚合物材料中，尤其值得關(guān)注的是兩親性溫敏聚合物，因其化學(xué)結(jié)構(gòu)中同時(shí)含有疏水嵌段和親水嵌段，因此能在水中自組裝形成膠束結(jié)構(gòu)的納米粒，通過(guò)控制疏水和親水嵌段的性質(zhì)，可以獲得不同的溫敏性能。已見報(bào)道的疏水嵌段涉及聚苯乙烯、聚乳酸、聚己內(nèi)酯(PCL)、聚乳酸-羥基乙酸等，親水嵌段通常為聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮、聚羥乙基甲基丙烯酸酯等。其中作為藥物載體應(yīng)用的典型兩親性溫敏聚合物主要包括泊洛沙姆或普朗尼克(聚乙二醇-聚丙二醇-聚乙二醇三嵌段共聚物)、聚乳酸-羥基乙酸/聚乙二醇共聚物和聚己內(nèi)酯/聚乙二醇共聚物。然而泊洛沙姆不可生物降解，其體內(nèi)應(yīng)用受到局限；聚乳酸-羥基乙酸/聚乙二醇共聚物常溫狀態(tài)下外觀為厚漿狀，稱量和操作不方便。聚己內(nèi)酯/聚乙二醇嵌段共聚物(PCL/PEG)，由于共聚物嵌段中聚己內(nèi)酯具有結(jié)晶性，生物可降解，且熔點(diǎn)在40 50°C范圍內(nèi)，因此共聚物在常溫呈粉末狀，使用方便，且能在體內(nèi)以凝膠態(tài)留存并被緩慢降解吸收，克服了泊洛沙姆和聚乳酸-羥基乙酸/聚乙二醇共聚物的缺陷。目前報(bào)道的聚己內(nèi)酯/聚乙二醇共聚物(PCL/PEG)均采用低分子量PEG作為親水鏈段，如PEG1^ PEG1500,其溫敏性表現(xiàn)為室溫時(shí)能溶于水形成溶液，所形成的水溶液在體溫下轉(zhuǎn)變?yōu)槟z，而凝膠在更高溫度時(shí)又能轉(zhuǎn)變成溶液，整個(gè)共聚物與水組成的體系呈現(xiàn)溶液-凝膠-溶液三相轉(zhuǎn)變。對(duì)應(yīng)于溶液-凝膠和凝膠-溶液的兩次相轉(zhuǎn)變，轉(zhuǎn)變點(diǎn)溫度分別稱為較低臨界凝膠化溫度和較高臨界凝膠化溫度。但是該體系通常適用于水溶性小分子或生物活性大分子等水溶性藥物，其裝載水溶性藥物的方法是簡(jiǎn)單的攪拌混合法，即將共聚物先溶于水形成溶液或凝膠，然后將水溶性藥物的粉末或者水溶液與共聚物的水溶液或凝膠混合(圖I所示)。但對(duì)于水不溶性藥物的裝載，由于共聚物中PEG為低分子量嵌段，載體的親水性較差，且在水中形成的膠束疏水區(qū)小，難以將水不溶性藥物分散均勻，從而影響制劑的外觀，限制水不溶性藥物的裝載量，也難以實(shí)現(xiàn)持續(xù)穩(wěn)定的藥物釋放，因此低分子量PEG的PCL/PEG共聚物作為溫敏載體在水不溶性藥物的應(yīng)用上受到很大的限制。

發(fā)明內(nèi)容
為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種溫敏自組裝PCLm-PEG6cicitl-PCLm三嵌段共聚物，其中，PEG表示聚乙二醇嵌段，其數(shù)均分子量為6000 ；PCL表示聚己內(nèi)酯嵌段，下標(biāo)m表示PCL的數(shù)均分子量。由于在共聚物分子中弓I入較高分子量的親水性嵌段PEG6_，同時(shí)控制PCL分子量m=500 1500，使其與傳統(tǒng)的PCL-PEG-PCL三嵌段共聚物相比更易膠束化，親水性能良好，且具有合適的臨界凝膠溫度(溶液-凝膠相轉(zhuǎn)變的溫度)。該類共聚物能在略高于體溫的水中溶解，形成一定濃度的核-殼結(jié)構(gòu)的自組裝膠束水溶液，將疏水藥物增溶于膠束核中，局部注射入人體后，能迅速凝膠化，緩慢釋放藥物，延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間。本發(fā)明提供的PCLm-PEG6cicitl-PCLm三嵌段共聚物中，PCL的分子量對(duì)于共聚物的性能非常重要，可影響其溫敏性能、藥物裝載性能及藥物釋放性能 。作為優(yōu)選，所述的PCLm-PEG_-PCLm三嵌段共聚物中PCL分子量的m=1050，對(duì)應(yīng)的三嵌段共聚物為 PCLici5ci-PEG6cicici-PCLici5ci ；
作為優(yōu)選，所述的PCLm-PEG6cicitl-PCLm三嵌段共聚物中PCL分子量的m=1250，對(duì)應(yīng)的三嵌段共聚物為 PCL1250-PEg6000-PCL1250 ；
作為優(yōu)選，所述的PCLm-PEG6cicitl-PCLm三嵌段共聚物中PCL分子量的m=1350，對(duì)應(yīng)的三嵌段共聚物為 PCL1350-PEG6000-PCL1350o本發(fā)明提供的溫敏自組裝PCLm-PEG_-PCLm三嵌段共聚物，其中，PEG的數(shù)均分子量為6000，PCL的數(shù)均分子量m=500 1500，在共聚物與水組成的體系中，當(dāng)共聚物在體系中的質(zhì)量百分比為1(Γ45%時(shí)，該體系在高于體溫時(shí)為水溶液狀態(tài)，在小于或等于體溫時(shí)為凝膠狀態(tài)，呈兩相轉(zhuǎn)變特征。本發(fā)明提供的溫敏自組裝PCLni-PEG6cicitl-PCLni三嵌段共聚物與水組成的體系中，其臨界凝膠溫度與PCL嵌段的分子量及體系中共聚物與水的組成比高度相關(guān)，其特點(diǎn)是隨著PCL嵌段分子量的增加，臨界凝膠溫度逐漸升高；在相同PCL嵌段分子量的情況下，臨界凝膠溫度隨著共聚物與水的體系中共聚物質(zhì)量比的增大而升高。因此，通過(guò)調(diào)節(jié)PCL嵌段的分子量、體系中共聚物與水的組成比例，可以獲得具有適宜臨界凝膠溫度的共聚物與水組成的體系，該體系在略高于體溫下以溶液狀態(tài)注射入體內(nèi)，并在原位轉(zhuǎn)變成凝膠態(tài)，從而達(dá)到藥物在體內(nèi)緩釋的目的，具有良好的應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供上述溫敏自組裝三嵌段共聚物作為藥物載體在藥物釋放控制體系的應(yīng)用，本發(fā)明提供的溫敏自組裝三嵌段共聚物也可作為可降解生物材料應(yīng)用于組織工程，如細(xì)胞支架、神經(jīng)修復(fù)、組織再生等。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種藥物組合物，是由上述溫敏自組裝三嵌段共聚物裝載藥物制備而成的，當(dāng)所述的藥物為水不溶性藥物時(shí)，水不溶性藥物與溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為3 10:100 ;當(dāng)所述的藥物為水溶性藥物時(shí)，因藥物能完全溶解在溫敏自組裝三嵌段共聚物與水組成的體系中，所以水溶性藥物和溫敏自組裝三嵌段共聚物的配比為任意比例。本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供制備上述藥物組合物的方法，針對(duì)裝載藥物水溶性的不同，提供兩種不同的制備方法
1.當(dāng)所述的藥物為水不溶性藥物時(shí)，所述的制備方法包括如下步驟
將水不溶性藥物和溫敏自組裝三嵌段共聚物溶解于有機(jī)溶劑形成溶液，水不溶性藥物與溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為3 10:100，有機(jī)溶劑與溫敏自組裝三嵌段共聚物比為1:1 2:1 (mL/g)，將溶液裝入透析袋，置去離子水中于50 100°C透析12 24小時(shí)后冷凍干燥，制得藥物組合物；所述的有機(jī)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、四氫呋喃(THF)或二甲亞砜(DMSO)中的一種。2.當(dāng)所述的藥物為水溶性藥物時(shí)，所述的制備方法包括如下步驟
將水溶性藥物和溫敏自組裝三嵌段共聚物溶解于水中，混合均勻，冷凍干燥，制得藥物組合物。本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供所述的藥物組合物作為藥物釋放控制體系的應(yīng)用，所述的藥物釋放控制體系由藥物組合物和水組成，其中藥物組合物中的溫敏自組裝三嵌段共 聚物與水的質(zhì)量比為1:^4. 5:5. 5，也就是說(shuō)，將所述的藥物組合物與水在37 45°C范圍內(nèi)配制成溶液，注射入體內(nèi)，體系在注射部位迅速形成凝膠，從而使藥物緩慢穩(wěn)定地釋放，達(dá)到延長(zhǎng)治療時(shí)間的目的。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)
(I)以分子量6000的聚乙二醇為親水嵌段，通過(guò)對(duì)聚乙二醇和己內(nèi)酯投料比的控制，合成了含有特定分子量PCL嵌段的PCLm-PEG6cicitl-PCLm三嵌段共聚物，合成步驟簡(jiǎn)單、產(chǎn)物分子量準(zhǔn)確可控。(2)由于較高分子量PEG_親水嵌段的引入，PCLm-PEG_-PCLmH嵌段共聚物能直接溶解于水中形成溶液或水凝膠，制備步驟簡(jiǎn)單，且具有明顯的溫度敏感性，呈現(xiàn)兩相轉(zhuǎn)變的特征，具體表現(xiàn)為PCLm-PEG6_-PCLm三嵌段共聚物與水組成的體系，在較高溫度能溶于水呈溶液狀態(tài)，降低溫度，該水溶液轉(zhuǎn)變?yōu)槟z狀態(tài)，呈二相轉(zhuǎn)變特征，具有臨界凝膠溫度；且該體系的臨界凝膠溫度與PCL嵌段的分子量及體系中共聚物與水的組成比高度相關(guān)，通過(guò)調(diào)節(jié)PCL嵌段的分子量、體系中共聚物與水的組成比例，可以獲得具有適宜臨界凝膠溫度的共聚物與水組成的體系，該體系在略高于體溫下以溶液狀態(tài)注射入體內(nèi)，并在原位轉(zhuǎn)變成凝膠態(tài)，從而達(dá)到藥物在體內(nèi)緩釋的目的，具有良好的應(yīng)用價(jià)值。(3)本發(fā)明所述的PCLm-PEG6cicitl-PCLmS嵌段共聚物同時(shí)含有PEG6qqq親水嵌段和PCL疏水嵌段，因此在水中可形成自組裝膠束，且PEG親水嵌段具有較高的分子量，使得該三嵌段共聚物與傳統(tǒng)的PCL-PEG-PCL三嵌段共聚物相比在水中更易膠束化，親水性能良好，采用透析方法即可實(shí)現(xiàn)水不溶性藥物的高效裝載，形成水不溶性藥物的組合物。同時(shí)所述的三嵌段共聚物與水組成的體系也能在其溶液狀態(tài)或凝膠狀態(tài)時(shí)，與水溶性化學(xué)藥物以及蛋白類藥物的粉末或水溶液以任意比例直接混合，形成水溶性藥物的組合物，外觀澄明，性質(zhì)均勻穩(wěn)定。因此，本發(fā)明所述的PCLm-PEG6_-PCLmH嵌段共聚物與水組成的體系既能裝載水溶性藥物，也能高效裝載水不溶性藥物，擴(kuò)大了該共聚物的應(yīng)用范圍。(4)由于PEG和PCL嵌段具有可生物降解性，因此所得到的PCLm-PEG_-PCLm共聚物亦可被機(jī)體生物降解，滿足體內(nèi)使用的要求。(5)本發(fā)明使用分子量較高的聚乙二醇(數(shù)均分子量6000)，增加了三嵌段共聚物PCLm-PEG6_-PCLm的親水性，同時(shí)結(jié)合疏水嵌段聚己內(nèi)酯，使得共聚物在水中能形成具核殼結(jié)構(gòu)的膠束，利用膠束的載藥機(jī)理，從而有效提高共聚物對(duì)疏水藥物的裝載能力，獲得較高的載藥量，同時(shí)利用三嵌段共聚物中聚己內(nèi)酯分子量以及共聚物與水的組成比例的調(diào)節(jié)，控制共聚物的溫敏性能，實(shí)現(xiàn)局部注射給藥后藥物的緩釋作用。


圖I是傳統(tǒng)攪拌混合法制備藥物組合物的示意 圖2是透析法制備水不溶性藥物組合物的示意 圖3是PCL腳-PEG6qqq-PCL酬三嵌段共聚物的紅外圖譜(溴化鉀壓片法)；
圖4是本發(fā)明的PCLm-PEG6_-PCLmH嵌段共 聚物的核磁共振圖譜(以氘代氯仿為溶劑);圖中所示，A =PCL1050-PEg6000-PCL1050, B =PCL1250-PEg6000-PCL1250,c PCL1350-PEG6000-PCL1350 ;
圖5是本發(fā)明的PCLm-PEG6cicitl-PCLm三嵌段共聚物與水組成體系的相轉(zhuǎn)變 圖6是吲哚美辛/PCLm-PEG6cicitl-PCLm藥物組合物凝膠的體外釋放曲線 圖7是紫杉醇/PCLm-PEG6cicitl-PCLm藥物組合物凝膠的體外釋放曲線 圖8是牛血清蛋白/PCLm-PEG6cicitl-PCLm藥物組合物凝膠的體外釋放曲線 圖9是鹽酸阿霉素/PCLm-PEG6cicitl-PCLm藥物組合物體外釋放曲線 圖10是吲哚美辛/PCLm-PEG6_-PCLm藥物組合物對(duì)弗氏完全佐劑引發(fā)大鼠足爪腫脹的慢性炎癥治療效果示意圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，但下述實(shí)施例并不限制本方面的權(quán)利范圍。本發(fā)明提供一種溫敏自組裝三嵌段共聚物，所述的三嵌段共聚物為PCLm-PEG6cicitl-PCLm，其中，PEG表示聚乙二醇嵌段，其數(shù)均分子量為6000 ;PCL表示聚己內(nèi)酯嵌段，下標(biāo)m表示PCL的數(shù)均分子量,m=500 1500。作為優(yōu)選，所述的三嵌段共聚物為PCLici5ci-PEG6cicici-PCLici5ci，其中，下標(biāo)表示相應(yīng)嵌段的數(shù)均分子量，PCL的數(shù)均分子量為1050, PEG的數(shù)均分子量為6000。作為優(yōu)選，所述的三嵌段共聚物為PCL125(|-PEG_-PCL125(I，其中，下標(biāo)表示相應(yīng)嵌段的數(shù)均分子量，PCL的數(shù)均分子量為1250, PEG的數(shù)均分子量為6000。作為優(yōu)選，所述的三嵌段共聚物為PCL135(|-PEG_-PCL135(I，其中，下標(biāo)表示相應(yīng)嵌段的數(shù)均分子量，PCL的數(shù)均分子量為1350, PEG的數(shù)均分子量為6000。上述三嵌段共聚物與水組成的體系中，當(dāng)共聚物在體系中的質(zhì)量百分比為1(Γ45%時(shí)，該體系在高于體溫時(shí)為水溶液狀態(tài)，在小于或等于體溫時(shí)為凝膠狀態(tài)，呈兩相轉(zhuǎn)變特征。實(shí)施例I :PCL 1050-PEG6000-PCL1050三嵌段共聚物的合成
配置辛酸亞錫甲苯溶液O. 2g/mL,稱取除水純化后的數(shù)均分子量為6000的聚乙二醇
6.0g，己內(nèi)酯2. lg，加入辛酸亞錫甲苯溶液O. 12mL，置于IOOmL圓底燒瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，130°〇油浴反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后,將燒瓶溫度降至室溫,反應(yīng)產(chǎn)物用無(wú)水二氯甲燒5mL溶解后在150mL乙醚中磁力攪拌沉淀，沉淀物過(guò)濾抽干，放置于真空干燥箱內(nèi)真空干燥過(guò)夜，除去殘余乙醚后得最后產(chǎn)物 PCL 1050-PEG6000-PCL1050O 將 PCLici5ci-PEG6cicici-PCLici5ci 粉末溶解于 5mL 二甲基甲酰胺(DMF)，置于透析袋中(MWC0=7000)，將透析袋置于IL去離子水中透析24h去除殘余小分子，冷凍干燥得純化的PCL 1050-PEG6000-PCL1050三嵌段共聚物。產(chǎn)率為92. 1%。圖3為PCLici5ci-PEG6ciqci-PCLici5q三嵌段共聚物的紅外圖譜(溴化鉀壓片法)，圖中的特征峰歸屬1749(^1為PCL嵌段C=O伸縮振動(dòng)峰1103(^1為PEG嵌段-OCH2CH2單元中C-O-C的伸縮振動(dòng)峰；1245CHT1為-C00-的伸縮振動(dòng)峰；3500CHT1為PCL嵌段末端羥基峰；952CHT1和842CHT1為PEG結(jié)晶區(qū)的特征峰。圖4㈧為PCLici5ci-PEG6ciqci-PCLiq5ci三嵌段共聚物的核磁共振圖譜(以氘代氯仿為溶劑)，其中d3.6ppm的f峰為PEG嵌段中亞甲基(-CH2CH2-)的質(zhì)子吸收峰；dl. 40、dl. 65 (b峰)、d2. 32 (c 峰)和 d 4. 06 Ca 峰)分別為 PCL 嵌段中-(CH2)3_、-OCCH2-和-CH2OOC-亞甲基結(jié)構(gòu)中的質(zhì)子吸收峰，而在d4. 23處的d峰和d3.82處e峰由PEG與PCL嵌段相連接部分-OCH2CH2-中的亞甲基引起；PCL-PEG_-PCL中PCL嵌段的數(shù)均分子量可由圖中a峰和d·峰的峰面積比值Ia和Id計(jì)算而得。 實(shí)施例2 PCL 1250-PEG6000-PCL1250三嵌段共聚物的合成
稱取除水純化后的數(shù)均分子量為6000的聚乙二醇6. Og,己內(nèi)酯2. 5g，加入實(shí)施例I.中配置的辛酸亞錫甲苯溶液O. 15mL，置于IOOmL圓底燒瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，130°C油浴反應(yīng)24小時(shí)。其余后處理與實(shí)施例I相同，制得PCL125ci-PEG6cicici-PCL125ci三嵌段共聚物，產(chǎn)率為93. 8%。該三嵌段共聚物的核磁共振圖譜見圖4 (B)，經(jīng)核磁計(jì)算可得PCL嵌段的數(shù)均分子量。實(shí)施例3 =PCL1350-PEg6000-PCL1350三嵌段共聚物的合成
稱取除水純化后的數(shù)均分子量為6000的聚乙二醇6. Og，己內(nèi)酯2. 7g，加入實(shí)施例I.中配置的辛酸亞錫甲苯溶液O. 17mL，置于IOOmL圓底燒瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，130°C油浴反應(yīng)24小時(shí)。其余后處理與實(shí)施例I相同，制得PCL135ci-PEG6cicici-PCL135ci三嵌段共聚物，產(chǎn)率為90. 7%。該三嵌段共聚物的核磁共振圖譜見圖4 (C)，經(jīng)核磁計(jì)算可得PCL嵌段的數(shù)均分子量。實(shí)施例4 =PCL1500-PEg6000-PCL1500三嵌段共聚物的合成
稱取除水純化后的數(shù)均分子量為6000的聚乙二醇6. 0g，己內(nèi)酯3. 0g，加入實(shí)施例
I.中配置的辛酸亞錫甲苯溶液O. 20mL，置于IOOmL圓底燒瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，130°C油浴反應(yīng)24小時(shí)。其余后處理與實(shí)施例I相同，制得PCL15cici-PEG6cicici-PCL15cici三嵌段共聚物，產(chǎn)率為93. 1%。實(shí)施例5 =PCL500-PEg6000-PCL500三嵌段共聚物的合成
稱取除水純化后的數(shù)均分子量為6000的聚乙二醇6. 0g，己內(nèi)酯I. 0g，加入實(shí)施例
I.中配置的辛酸亞錫甲苯溶液O. 10mL，置于IOOmL圓底燒瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，130°C油浴反應(yīng)24小時(shí)。
其余后處理與實(shí)施例I相同，制得PCL5cici-PEG6cicici-PCL5cici三嵌段共聚物，產(chǎn)率為92. 9%。 實(shí)施例6 PCL 1050-PEG6000-PCL1050三嵌段共聚物的溫敏性考察
取口徑IOmm的試管6根，各稱取經(jīng)實(shí)施例I中合成的PCL1(I5(I-PEG_-PCL1(I5(I三嵌段共聚物O. 2g、0. 21g、0. 22g、0. 23g、0. 25g、0. 3g，用ImL移液管分別加入去離子水O. 80mL、O. 79mL、0. 78 mL、0· 77 mL、0· 75 mL、0· 7 mL，60°C攪拌配置成共聚物的質(zhì)量百分比分別為20%、21%、22%、23%、25%和30%的PCLici5ci-PEG6cicici-PCL議三嵌段共聚物與水的體系，將該體系降溫至10°C并保持30min，之后對(duì)該體系進(jìn)行升溫，升溫速度為O. 5°C /min，每2min將試管倒置靜置30s，觀察是否有流動(dòng)現(xiàn)象。若未有流動(dòng)則定義為凝膠態(tài)“Gel”，有流動(dòng)則為溶液態(tài)“Sol”。從Gel相到Sol相轉(zhuǎn)變的溫度，則為臨界凝膠溫度，以臨界凝膠溫度為Y軸，共聚物在體系中的質(zhì)量百分比為X軸繪制臨界凝膠溫度-濃度曲線，即PCL 1050-PEG6000-PCL1050與水組成的體系的相轉(zhuǎn)變圖，如圖5所示。
實(shí)施例7 PCL 1250-PEG6000-PCL1250三嵌段共聚物的溫敏性考察
取口徑IOmm的試管4根，各稱取經(jīng)實(shí)施例2中合成的PCL 1250-PEG6000-PCL1250三嵌段共聚物O. 15g、0. 16g、0. 17g、0. 18g，用ImL移液管分別加入去離子水0. 85mL、0. 83mL、O. 83 mL、0. 82mL, 60°C攪拌配置成共聚物的質(zhì)量百分比分別為15%、16%、17%、18%的PCL 1250-PEG6000-PCL1250三嵌段共聚物與水的體系。測(cè)量不同濃度共聚物與水組成的體系的臨界凝膠溫度，測(cè)量方法與實(shí)施例6相同，并按照實(shí)施例6所述的方法繪制PCL1250-PEG6000-PCL1250三嵌段共聚物與水組成的體系的相轉(zhuǎn)變圖，如圖5所示。實(shí)施例8 PCL 1350-PEG6000-PCL1350三嵌段共聚物的溫敏性考察
取口徑IOmm的試管4根，各稱取經(jīng)實(shí)施例3中合成的PCL135(I-PEG6_-PCL135(I三嵌段共聚物O. 12g、0. 13g、0. 14g、0. 15g，用ImL移液管分別加入去離子水0. 88mL、0. 87mL、
O.86mL、0. 85 mL，60°C攪拌配置成共聚物的質(zhì)量百分比分別為12%、13%、14%、15%的PCL 1350-PEG6000-PCL1350三嵌段共聚物與水的體系。測(cè)量不同濃度共聚物與水組成的體系的臨界凝膠溫度，測(cè)量方法與實(shí)施例6相同，并按照實(shí)施例6所述的方法繪制PCL^50-PEG6000-PCL1350三嵌段共聚物與水組成的體系的相轉(zhuǎn)變圖，如圖5所示。實(shí)施例9 PCL 15oo-PEG6000-PCL1500三嵌段共聚物的溫敏性考察
取口徑IOmm的試管3根，各稱取經(jīng)實(shí)施例4中合成的PCL15(I(I-PEG_-PCL15(I(I三嵌段共聚物粉末O. IOg,O. 12g、0. 15g，用ImL移液管分別加入去離子水O. 90mL、0. 88mL、0. 85 mL,60°C攪拌配置成共聚物的質(zhì)量百分比分別為10%、12%、15%的PCL15qq-PEG6qqq-PCL15qq三嵌段共聚物與水的體系。其中，質(zhì)量百分比為12%和15%的PCL Ucici-PEG6cicici-PCL1■三嵌段共聚物只能溶脹，不能溶解于水中，質(zhì)量百分比為10%的PCL15cici-PEG6cicici-PCL15cici共聚物與水的體系，在體溫時(shí)為Gel態(tài)，高于體溫時(shí)轉(zhuǎn)變?yōu)镾ol態(tài)。實(shí)施例10 PCL Soo-PEG6000-PCL500三嵌段共聚物的溫敏性考察
稱取實(shí)施例5中合成的PCL5qq-PEG6qqq-PCL5qq三嵌段共聚物粉末O. 20g、0. 45g，用ImL移液管分別加入去離子水O. 8mL、0. 55mL，60°C攪拌均勻形成共聚物與水的體系，20%的PCL5ocrPEG6_-PCL5(l(l三嵌段共聚物與水的體系在低溫狀態(tài)下為Sol態(tài)，沒有Gel態(tài)，溶液的流動(dòng)性隨著溫度的升高而升高；45%的PCL15cici-PEG6cicici-PCL15cici共聚物與水形成的體系，在體溫時(shí)為Gel態(tài)，高于體溫時(shí)轉(zhuǎn)變?yōu)镾ol態(tài)。
實(shí)施例11 :噴哚美辛/PCLici5ci-PEG6cicici-PCLici5ci藥物組合物的制備及體外藥物釋放考察
稱取實(shí)施例I中合成的PCLici5ci-PEG6cicici-PCLici5ci三嵌段共聚物I. Og,吲哚美辛50mg，溶解于ImL N, N- 二甲基甲酰胺(DMF)中，均勻溶解后轉(zhuǎn)移至透析袋內(nèi)，于IL去離子水中80°C透析12小時(shí)，透析完全后取出，冷凍干燥，得到吲哚美辛/PCLici5ci-PEG6cicici-PCLici5ci藥物組合物。稱取適量吲哚美辛/PCLici5ci-PEG6cicici-PCLici5ci藥物組合物用DMF溶解，紫外分光光度計(jì)319nm下測(cè)定吸光度，計(jì)算出載藥量為4. 52%(載藥量=藥物組合物中藥物的質(zhì)量/藥物組合物的質(zhì)量X100%)，即藥物與溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為4. 73:100。這說(shuō)明了本發(fā)明的溫敏自組裝三嵌段共聚物能很好地裝載吲哚美辛藥物，其裝載率達(dá)到94. 6%(裝載率=藥物組合物中藥物的質(zhì)量/投藥量X 100%)。稱取吲哚美辛/PCLici5q-PEG6ciqci-PCLici5q藥物組合物O. 5g，用I. 5mL去離子水溶解形成藥物釋放控制體系，該體系在室溫下成凝膠態(tài)，稱取該體系O. 5g各三份，然后置于4mL離心管中，離心管有凝膠的一端以透析膜封口，37°C下平衡I小時(shí)；再將該離心管置于IOmL pH 7. 4的磷酸緩沖液(PBS)中，37°C下恒溫震蕩(100rpm/min)進(jìn)行體外藥物釋放考察。間隔一定時(shí)間取樣，取樣時(shí)將IOmL釋放介質(zhì)PBS全部倒出，并補(bǔ)充IOmL釋放介質(zhì)PBS。由紫外分光光度計(jì)檢測(cè)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的釋放介質(zhì)在319nm處的吸光值，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算累計(jì)藥物釋放百分率，每組平行三個(gè)樣品，計(jì)算后取平均值。吲哚美辛/PCLici5ci-PEG6cicici-PCLici5ci藥物組合物凝膠的體外釋放曲線圖如圖6所示，圖中可見該藥物組合物具有緩釋效果。實(shí)施例12 :吲哚美辛/PCL 1050-PEG6000-PCL1050藥物組合物的制備
稱取實(shí)施例I中合成的PCL 1(i5(i-PEG6_-PCL1(i5(i三嵌段共聚物I. Og,吲哚美辛50mg，溶解于ImL 二甲亞砜(DMSO)中，均勻溶解后轉(zhuǎn)移至透析袋內(nèi)，于IL去離子水中90°C透析18小時(shí)，透析完全后取出，冷凍干燥，得到吲哚美辛/PCL 1050-PEG6000-PCL1050藥物組合物。計(jì)算載藥量的方法與實(shí)施例11相同，載藥量為3. 87%，即藥物與溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為4. 03:100，這說(shuō)明了本發(fā)明的溫敏自組裝三嵌段共聚物能很好地裝載吲哚美辛藥物，其裝載率達(dá)到80. 6%。 實(shí)施例13 :布洛芬/PCL1Q5(|-PEG_-PCL1(i5(i藥物組合物的制備
稱取實(shí)施例I中合成的PCL 1Q5(I-PEG6_-PCL1(I5(I三嵌段共聚物I. Og，布洛芬30mg，溶解于ImL四氫呋喃(THF)中，均勻溶解后轉(zhuǎn)移至透析袋內(nèi)，于IL去離子水中50°C透析24小時(shí)，透析完全后取出，冷凍干燥，得到布洛芬/PCL 1050-PEG6000-PCL1050藥物組合物。計(jì)算載藥量的方法與實(shí)施例11相同，載藥量為3. 54%，即藥物與溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為3. 67:100。實(shí)施例14 甲氨蝶呤/PCL 1050-PEG6000-PCL1050藥物組合物的制備
稱取實(shí)施例I中合成的PCLici5q-PEG6cicici-PCLici5ci三嵌段共聚物I. Og,甲氨蝶呤IOOmgi解于ImL N, N-二甲基甲酰胺(DMF)中，均勻溶解后轉(zhuǎn)移至透析袋內(nèi)，于IL去離子水中100°C透析14小時(shí)，透析完全后取出，冷凍干燥，得到甲氨蝶呤/PCLici5ci-PEG6cicici-PCLici5ci藥物組合物。計(jì)算載藥量方法與實(shí)施例11相同，載藥量為9. 2%，即藥物與溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為10. 02:100。實(shí)施例15 :Π引哚美辛/PCL125ci-PEG6cicici-PCL125ci藥物組合物的制備及其體外釋放考察稱取實(shí)施例2中合成的PCL 1250-PEG6000-PCL1250三嵌段共聚物I. Og,吲哚美辛50mg，溶解于I. 5mL DMF中，均勻溶解后轉(zhuǎn)移至透析袋內(nèi)。透析方法和計(jì)算載藥量方法與實(shí)施例11相同，所得吲哚美辛/PCL125ci-PEG6cicici-PCL125ci藥物組合物的載藥量為4. 46%，即藥物與溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為4. 66:100，這說(shuō)明了本發(fā)明的溫敏自組裝三嵌段共聚物能很好地裝載吲哚美辛藥物，其裝載率達(dá)到93. 2%。稱取吲哚美辛/PCL125ci-PEG6cicici-PCL125ci藥物組合物O. 51g，用2. 49mL去離子水溶解形成藥物釋放控制體系，該體系在室溫下成凝膠態(tài)，稱取該體系O. 5g各三份，體外釋放考察方法和實(shí)施例11相同，吲哚美辛/PCL125ci-PEG6cicici-PCL125ci藥物組合物凝膠的體外釋放曲線圖如圖6所示，圖中可見該藥物組合物具有緩釋效果。實(shí)施例16 :吲哚美辛/PCL 1350-PEG6000-PCL1350藥物組合物的制備及其體外釋放考
察稱取實(shí)施例3中合成的PCL 1350-PEG6000-PCL1350三嵌段共聚物I. Og,吲哚美辛50mg，溶解于ImL DMF中，均勻溶解后轉(zhuǎn)移至透析袋內(nèi)。透析方法和計(jì)算載藥量方法與實(shí)施例11相同，所得吲哚美辛/PCL 135(|^^66_40^5(|藥物組合物的載藥量為4. 65%，即藥物和溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為4. 87:100，這說(shuō)明了本發(fā)明的溫敏自組裝三嵌段共聚物能很好地裝載吲哚美辛藥物，其裝載率達(dá)到97. 4%。稱取吲哚美辛/PCL 1350-PEG6000-PCL1350藥物組合物O. 45g，用2. 55mL去離子水溶解形成藥物釋放控制體系，該體系在室溫下成凝膠態(tài)，稱取該體系O. 5g各三份，體外釋放考察方法和實(shí)施例11相同，吲哚美辛/PCL 1350-peg6000-pcl1350藥物組合物凝膠的體外釋放曲線圖如圖6所示，圖中可見該藥物組合物具有緩釋效果。實(shí)施例17 :吲哚美辛/PCL 1350-PEG6000-PCL1350藥物組合物的制備
稱取實(shí)施例3中合成的PCL 1350-PEG6000-PCL1350三嵌段共聚物I. Og,吲哚美辛IOOmgi解于2mL DMF中，均勻溶解后轉(zhuǎn)移至透析袋內(nèi)。透析方法和計(jì)算載藥量方法與實(shí)施例11相同，所得吲哚美辛/PCL135ci-PEG6cicici-PCL135ci藥物組合物的載藥量為9. 03%,即藥物和溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為9. 93:100，這說(shuō)明了本發(fā)明的溫敏自組裝三嵌段共聚物能很好地裝載吲哚美辛藥物，其裝載率達(dá)到99. 3%。實(shí)施例18 :紫杉醇/PCLici5ci-PEG6cicici-PCLimci藥物組合物的制備及其體外釋放考察 稱取實(shí)施例I中合成的PCL 1(i5(i-PEG6_-PCL1(i5(i三嵌段共聚物I. Og,紫杉醇50mg，溶解于
ImL DMF中，均勻溶解后轉(zhuǎn)移至透析袋內(nèi)。透析方法和計(jì)算載藥量方法與實(shí)施例12相同，所得紫杉醇/PCL 1350-PEG6000-PCL1350藥物組合物的載藥量為4. 07%,即藥物和溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為4. 24:100，這說(shuō)明了本發(fā)明的溫敏自組裝三嵌段共聚物能很好地裝載吲哚美辛藥物，其裝載率達(dá)到84. 8%。稱取紫杉醇/PCLici5ci-PEG6ciqci-PCLici5q藥物組合物O. 5g，用I. 5mL去離子水溶解形成藥物釋放控制體系，該體系在室溫下成凝膠態(tài)，稱取該體系O. 5g各三份，置于4mL離心管中，離心管有凝膠的一端以透析膜封口，37°C下平衡I小時(shí)。再將該離心管置于IOmL的PBS (pH =7.4)中，37°C下恒溫震蕩(100rpm/min)進(jìn)行體外釋放考察。間隔一定時(shí)間取樣，取樣時(shí)將IOmL釋放介質(zhì)全部倒出，并補(bǔ)充IOmL釋放介質(zhì)。配置流動(dòng)相(甲醇乙腈水體積比=5:8:7)，由高效液相色譜法測(cè)定樣品中紫杉醇含量，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算累計(jì)釋放率，每組平行三個(gè)樣品，計(jì)算后取平均值。結(jié)果如圖7所示。
實(shí)施例19 :牛血清蛋白/PCL125ci-PEG6cicici-PCL125ci藥物組合物的制備及其體外釋放考察
稱取實(shí)施例2中合成的PCL 1250-PEG6000-PCL1250三嵌段共聚物750mg，牛血清蛋白(BSA) 22mg，溶解于去離子水中，攪拌均勻，冷凍干燥，制得牛血清蛋白/PCL1250-PEg6000-PCL1250 藥物組合物。取牛血清蛋白/PCL 1250-PEG6000-PCL1250藥物組合物500mg置于4mL離心管中，用
2.44mL去離子水溶解形成藥物釋放控制體系，37°C下平衡I小時(shí)。取2mLPBS(pH 7. 4)加入 離心管，浸沒BSA-PCL 125Q-PEG6_-PCL125Q組合物，37°C下恒溫震蕩(100rpm/min)進(jìn)行體外釋放考察。間隔一定時(shí)間取樣，取樣時(shí)吸取O. 5mL透析介質(zhì),并補(bǔ)充O. 5mL新鮮釋放介質(zhì)。由BCA法檢測(cè)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品的濃度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算累計(jì)釋放率，每組平行三個(gè)樣品，計(jì)算后取平均值。牛血清蛋白/PCL 1250-PEG6000-PCL1250組合物釋放圖見圖8。實(shí)施例20 :牛血清蛋白/PCL135ci-PEG6cicici-PCL135ci藥物組合物的制備及其體外釋放考察
稱取實(shí)施例3中合成的PCL135ci-PEG6cicici-PCL135ci三嵌段共聚物600mg，牛血清蛋白(BSA) 20mg，溶解于去離子水中，攪拌均勻，冷凍干燥，制得牛血清蛋白/PCL1350-peg6000-pcl1350 藥物組合物。取牛血清蛋白/PCL135q-PEG6qqq-PCL135q藥物組合物500mg置于4mL離心管中，用
2.83mL去離子水溶解形成藥物釋放控制體系。該藥物組合物體外釋放考察方法與實(shí)施例18相同，其結(jié)果如圖8所示。實(shí)施例21 :鹽酸阿霉素/PCLici5ci-PEG6cicici-PCLici5ci藥物組合物的制備及其體外釋放考察
稱取實(shí)施例I中合成的PCLiq5q-PEG6qqq-PCLiq5q三嵌段共聚物I. Og,鹽酸阿霉素40mg，溶解于去離子水中，攪拌均勻，冷凍干燥，制得鹽酸阿霉素/ PCL1050-PEg6000-PCL1050藥物組合物。取鹽酸阿霉素/PCL 1050-PEG6000-PCL1050藥物組合物500mg置于4mL離心管中，用
I.5mL去離子水溶解形成藥物釋放控制體系，37°C下平衡I小時(shí)。加入2mL pH7.4PBS，浸沒鹽酸阿霉素控制釋放體系，37°C下恒溫震蕩(lOOrpm/min)進(jìn)行體外釋放考察。間隔一定時(shí)間取樣，取樣時(shí)吸取O. 5mL透析介質(zhì),并補(bǔ)充O. 5mL新鮮釋放介質(zhì)。由紫外分光光度計(jì)于波長(zhǎng)429nm下檢測(cè)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品的濃度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算累計(jì)釋放率，每組平行三個(gè)樣品，計(jì)算后取平均值。鹽酸阿霉素/PCL 1050-PEG6000-PCL1050組合物釋放圖譜見圖9。實(shí)施例22 :Π引哚美辛/PCL135ci-PEG6cicici-PCL135ci藥物組合物治療大鼠急性和慢性炎癥對(duì)比實(shí)驗(yàn)
對(duì)比實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)弗氏完全佐劑誘發(fā)的慢性炎癥和大鼠足爪腫脹實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)對(duì)吲哚美辛/pcl135Q-peg_-pcl135Q藥物組合物的體內(nèi)釋放和藥效。SD大鼠18只，雌雄各半，體重160土20g，隨機(jī)分為3組(雌雄各3只/組，共6只/組)，分別為空白組、空白材料組和給藥組。空白組皮下注射生理鹽水各O. lmL。空白材料組稱取實(shí)施例3中合成的PCL 1350-PEG6000-PCL1350三嵌段共聚物150mg，置于試管內(nèi)，加入O. 85mL去離子水，80°C攪拌至材料完全溶解于水，制得空白材料組共聚物與水形成的體系，于4°C保存。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，將空白材料共聚物與水形成的體系加熱至45°C，于溶液態(tài)皮下注入大鼠體內(nèi)，每只大鼠注射各O. lmL。給藥組稱取實(shí)施例16中制備的吲哚美辛PCL 1350-PEG6000-PCL1350組合物，根據(jù)藥物組合物中的共聚物與水的質(zhì)量比為3:17配制吲哚美辛釋放控制系統(tǒng)，根據(jù)各大鼠體重和吲哚美辛藥物組合物載藥量，計(jì)算每只大鼠的給藥濃度，最終每只大鼠給藥4. 5mg/kg,皮下注射O. ImL該吲哚美辛釋放控制系統(tǒng)。3組大鼠腳掌皮下注射給藥，I小時(shí)后，大鼠右后足跖皮下注射弗氏完全佐劑
O.lmL，分別于致炎后1、2、3、5、7、9、11、13天用足爪溶劑測(cè)量?jī)x測(cè)定大鼠右后足跖的排水量(mL)，以致炎前后的排水量之差代表足跖腫脹程度。參見圖10，從給藥后，吲哚美辛共聚物組合物具有對(duì)大鼠炎癥明顯的抑制作用，且與空白 材料組相比有更為顯著的效果。抗炎作用一直持續(xù)13天，均與空白對(duì)照組有顯著性差異(p〈0.01)。可見吲哚美辛PCLI35ci-PEG6cicici-PCL135ci組合物對(duì)于大鼠足爪慢性炎癥有明顯療效。作為緩釋制劑，具有很好的應(yīng)用前景。上述實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種溫敏自組裝三嵌段共聚物，其特征在于所述的三嵌段共聚物為PCLm-PEG6cicitl-PCLm，其中，PEG表示聚乙二醇嵌段，其數(shù)均分子量為6000 ;PCL表示聚己內(nèi)酯嵌段，下標(biāo)m表示PCL的數(shù)均分子量,m=500 1500。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種溫敏自組裝三嵌段共聚物，其特征在于所述的三嵌段共聚物為PCL1(l5(rPEG6_-PCL1(l5(l,其中，下標(biāo)表不相應(yīng)嵌段的數(shù)均分子量，PCL的數(shù)均分子量為1050，PEG的數(shù)均分子量為6000。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的種溫敏自組裝三嵌段共聚物，其特征在于所述的三嵌段共聚物為PCL125(rPEG6_-PCL125(l,其中，下標(biāo)表不相應(yīng)嵌段的數(shù)均分子量，PCL的數(shù)均分子量為1250，PEG的數(shù)均分子量為6000。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的種溫敏自組裝三嵌段共聚物，其特征在于所述的三嵌段共聚物為PCL135(rPEG6_-PCL135(l,其中，下標(biāo)表不相應(yīng)嵌段的數(shù)均分子量，PCL的數(shù)均分子量為1350，PEG的數(shù)均分子量為6000。
5.根據(jù)權(quán)利要求I 4任一項(xiàng)所述的溫敏自組裝三嵌段共聚物，其特征在于所述共聚物與水組成的體系中，當(dāng)共聚物在體系中的質(zhì)量百分比為1(Γ45%時(shí)，該體系在高于體溫時(shí)為水溶液狀態(tài)，在小于或等于體溫時(shí)為凝膠狀態(tài)，呈兩相轉(zhuǎn)變特征。
6.根據(jù)權(quán)利要求I 4任一項(xiàng)所述的溫敏自組裝三嵌段共聚物作為藥物載體在藥物釋放控制體系或作為可降解生物材料在組織工程中的應(yīng)用。
7.—種藥物組合物，其特征在于由權(quán)利要求I 4任一項(xiàng)所述的溫敏自組裝三嵌段共聚物裝載藥物制備而成的，當(dāng)所述的藥物為水不溶性藥物時(shí)，水不溶性藥物與溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為3 10:100 ;當(dāng)所述的藥物為水溶性藥物時(shí)，水溶性藥物和溫敏自組裝三嵌段共聚物的配比為任意比例。
8.權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，當(dāng)所述的藥物為水不溶性藥物時(shí)，所述的制備方法包括如下步驟 將水不溶性藥物和溫敏自組裝三嵌段共聚物溶解于有機(jī)溶劑形成溶液，水不溶性藥物與溫敏自組裝三嵌段共聚物的質(zhì)量比為3 10:100，有機(jī)溶劑與溫敏自組裝三嵌段共聚物比為1:廣2:1 (mL/g)，將溶液裝入透析袋，置去離子水中于50 100°C透析12 24小時(shí)后冷凍干燥，制得藥物組合物；所述的有機(jī)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃或二甲亞砜中的一種。
9.權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，當(dāng)所述的藥物為水溶性藥物時(shí)，所述的制備方法包括如下步驟 將水溶性藥物和溫敏自組裝三嵌段共聚物溶解于水中，混合均勻，冷凍干燥，制得藥物組合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物作為藥物釋放控制體系的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物釋放控制體系由藥物組合物和水組成，其中藥物組合物中的溫敏自組裝三嵌段共聚物與水的質(zhì)量比為1:^4. 5:5. 5。
全文摘要
本發(fā)明提供一種PCLm-PEG6000-PCLm溫敏自組裝三嵌段共聚物，該共聚物呈兩相轉(zhuǎn)變特征，可作為藥物載體應(yīng)用于藥物釋放控制體系或可降解生物材料用于組織工程。本發(fā)明還提供了包含該三嵌段共聚物的藥物組合物及其制備方法，以及該藥物組合物的用途。本發(fā)明所述的PCLm-PEG6000-PCLm三嵌段共聚物與水組成的體系既能裝載水溶性藥物，也能高效裝載水不溶性藥物，具有很好的緩釋效果。
文檔編號(hào)C08G63/08GK102850532SQ201210362200
公開日2013年1月2日 申請(qǐng)日期2012年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月21日
發(fā)明者邱利焱, 呂辛怡 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)