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體外培養造血干/前驅細胞的方法及其組成物與流程

文檔序號:11936658閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種體外培養造血干/前驅細胞的方法,其特征在于包括:

將含有造血干/前驅細胞的來源血液解凍,以梯度離心進行單核球純化,獲取高純度單核球細胞;

將前述高純度單核球細胞進行隔夜培養,之后分離造血干/前驅細胞;

將自前述經隔夜培養的單核球細胞分離所得的高純度造血干/前驅細胞培養于含有細胞激素、TAT-HOXB4蛋白質及5%人類血清的伊思柯夫改良培養液中培養4-7天;及

收取造血干/前驅細胞培養物。

2.根據權利要求1所述的體外培養造血干/前驅細胞的方法,其特征在于還包括將制備得的體外培養造血干/前驅細胞以含有24-80%的人體血清白蛋白、25%注射液及20%二甲基亞砜和右旋糖酐細胞凍存混合液保存劑進行冷凍保存。

3.根據權利要求1所述的體外培養造血干/前驅細胞的方法,其特征在于,所述隔夜培養系將單核球細胞以細胞密度5x105~6x106細胞數/毫升培養于含5%人類血清的伊思柯夫改良培養液中16~18小時。

4.根據權利要求1所述的體外培養造血干/前驅細胞的方法,其特征在于,所述細胞激素包括間白素-3、間白素-6、干細胞因子、FMS樣酪氨酸激酶3配體及血小板生成素。

5.根據權利要求4所述的體外培養造血干/前驅細胞的方法,其特征在于,所述細胞激素包括5~10ng/mL的間白素-3、10~20ng/mL的間白素-6、50~100ng/mL的干細胞因子、20~40ng/mL的FMS樣酪氨酸激酶3配體、25~50ng/mL的血小板生成素。

6.根據權利要求1所述的體外培養造血干/前驅細胞的方法,其特征在于,所述高純度造血干/前驅細胞培養系以細胞密度1x104-5x105細胞數/毫升培養于含有細胞激素及TAT-HOXB4的含5%人類血清的伊思柯夫改良培養液中培養。

7.根據權利要求2所述的體外培養造血干/前驅細胞的方法,其中保存劑由80%的人體血清白蛋白25%注射液及20%二甲基亞砜和右旋糖酐細胞凍存混合液所組成。

8.一種根據權利要求1所述方法制得的造血干/前驅細胞組成物,其特征 在于包括臨床上有效造血干/前驅細胞的百分比例達15-40%。

9.根據權利要求8所述的造血干/前驅細胞組成物,其特征在于,包括臨床上有效造血干/前驅細胞的百分比例達25-30%,所述有效造血干/前驅細胞為CD34+CD38-細胞。

10.根據權利要求1所述的造血干/前驅細胞組成物,其特征在于,所述造血干/前驅細胞的血液來源為臍帶血。

11.根據權利要求1所述的造血干/前驅細胞組成物,其特征在于,所述造血干/前驅細胞的血液來源為外圍血。

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