本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種同時(shí)提取富集金銀花中六環(huán)烯醚萜苷類成分的方法。
背景技術(shù)：
金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或初開(kāi)的花。其味甘、性寒，歸肺、心、胃經(jīng)，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功能。金銀花及相關(guān)中成藥在清熱解毒、抗病毒等方面療效顯著，在臨床上得到廣泛應(yīng)用。
金銀花的化學(xué)成分包括揮發(fā)油、環(huán)烯醚萜苷類化合物、三萜及三萜皂苷類化合物、黃酮類化合物、有機(jī)酸類化合物等。其中，環(huán)烯醚萜苷類化合物是金銀花中的一類重要化學(xué)成分。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)烯醚萜苷類成分具有抗病毒、抗菌、抗氧化、保肝利膽、抗腫瘤、抗炎、增強(qiáng)免疫等多種活性。
有報(bào)道指出，目前金銀花中目前已被分離鑒定出的環(huán)烯醚萜苷類化合物多達(dá)36個(gè)，其中馬錢(qián)酸、莫諾苷、馬錢(qián)苷、當(dāng)藥苷、斷氧化馬錢(qián)子苷和開(kāi)聯(lián)番木鱉苷二甲基乙縮醛6種環(huán)烯醚萜苷類化合物因其具有較好的抗病毒、抗炎、保肝利膽、抑制腫瘤等藥理作用愈發(fā)受到研究人員的重視。因此，如何有效、便捷和安全的提取富集這6種環(huán)烯醚萜苷類成分成為更好利用金銀花問(wèn)題之關(guān)鍵。現(xiàn)有報(bào)道中對(duì)環(huán)烯醚萜苷類提取富集方法多樣，水蒸氣蒸餾法、超臨界流體萃取法、有機(jī)溶劑提取法等方法均有報(bào)道，然而超臨界流體萃取法雖然具有收率高、揮發(fā)油不易分解氧化，綠色無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，但設(shè)備一次性投入大，成本高，在工業(yè)化提取中藥及植物揮發(fā)油的應(yīng)用并不普遍。有機(jī)溶劑提取法則存在色素等雜質(zhì)較多，且有溶劑殘留。而水蒸氣蒸餾法工業(yè)化提取環(huán)烯醚萜苷類化合物的主要問(wèn)題是環(huán)烯醚萜苷類具親水性，與水分離效果較差，收率很低。而且由于每種環(huán)烯醚萜苷類化合物均具有各自特有的基團(tuán)，造成其理化性質(zhì)存在差異，因此造成富集提取特定多種環(huán)烯醚萜苷類化合物時(shí)更加困難。因此，發(fā)展適合金銀花中這6種環(huán)烯醚萜苷類成分的快速、高效的提取富集方法亟待解決。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種同時(shí)提取富集金銀花中環(huán)烯醚萜苷類成分的方法，該方法操作簡(jiǎn)便、樣品富集效果好，結(jié)果重現(xiàn)性高，穩(wěn)定性好。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種同時(shí)提取富集金銀花中六種環(huán)烯醚萜苷類成分的方法，其中提取富集的六種環(huán)烯醚萜苷類成分是馬錢(qián)酸、莫諾苷、馬錢(qián)苷、當(dāng)藥苷、斷氧化馬錢(qián)子苷和開(kāi)聯(lián)番木鱉苷二甲基乙縮醛，具體步驟如下：
(1)取干燥粉碎過(guò)20-40目篩的金銀花粉末，使用乙醇作為提取溶劑，對(duì)金銀花粉末進(jìn)行超聲提取，超聲后對(duì)乙醇提取液進(jìn)行抽濾，旋蒸濃縮至無(wú)醇味，得提取液備用；
(2)將步驟(1)得到的提取液上樣大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行六種環(huán)烯醚萜苷類成分富集，吸附過(guò)程上樣量為0.5-0.7g金銀花粉末/mL樹(shù)脂，體積流量為1-3BV/h；采用乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫得六種環(huán)烯醚萜苷類成分的乙醇洗脫液，洗脫前先用水洗除雜。
(3)將步驟(2)得到的乙醇洗脫液除去乙醇得環(huán)烯醚萜苷。
優(yōu)選的，所述步驟(1)中過(guò)篩目數(shù)為20目；所用乙醇為50％乙醇，所述金銀花粉末與乙醇質(zhì)量體積比為1g:10ml；
優(yōu)選的，所述步驟(1)中超聲提取具體條件為：超聲提取2h，超聲時(shí)溫度為25℃；
優(yōu)選的，所述步驟(2)中大孔吸附樹(shù)脂為NKA-2樹(shù)脂或HPD-826樹(shù)脂；進(jìn)一步優(yōu)選的，所述大孔吸附樹(shù)脂為HPD-826樹(shù)脂；
優(yōu)選的，所述步驟(2)中吸附過(guò)程上樣量為0.61g金銀花粉末/mL樹(shù)脂；
優(yōu)選的，所述步驟(2)中體積流量為2BV/h；
優(yōu)選的，所述步驟(2)中水洗除雜中蒸餾水用量為3BV；
優(yōu)選的，所述步驟(3)中梯度洗脫方法為：10％乙醇洗脫7BV，30％乙醇洗脫7BV，50％乙醇洗脫2BV；
優(yōu)選的，上述方法中所用乙醇均為藥用乙醇。
本發(fā)明還公開(kāi)了上述方法在中藥環(huán)烯醚萜苷類成分提取富集中的應(yīng)用。
本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和條件的限制，與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明具有如下有益效果：
(1)本發(fā)明采用大孔樹(shù)脂吸附法，對(duì)采用超聲波提取的金銀花環(huán)提取液進(jìn)行富集，用藥用乙醇進(jìn)行洗脫，用量較少，可直接得到高濃度的6種環(huán)烯醚萜苷類成分乙醇溶液，蒸去溶劑后即得環(huán)烯醚萜苷類；在解決了工業(yè)大生產(chǎn)中有機(jī)殘留問(wèn)題的同時(shí)，還減少了有機(jī)溶劑的使用量。
(2)本發(fā)明的方法可以適用于不同中藥的環(huán)烯醚萜苷類成分的提取富集，可顯著提高環(huán)烯醚萜苷類成分的收率，結(jié)果重現(xiàn)性高，穩(wěn)定性好。所用溶劑為藥用乙醇，安全無(wú)毒，價(jià)廉。
(3)本發(fā)明的方法特別適用于親水基團(tuán)比例較高的物質(zhì)如環(huán)烯醚萜苷類成分及其類似物的提取。由于親水基團(tuán)比例較高的物質(zhì)難以與水進(jìn)行分離，造成提取困難，同時(shí)，對(duì)于多種物質(zhì)同時(shí)提取則更增加了提取難度，本發(fā)明通過(guò)采用大孔樹(shù)脂吸附，選取適合型號(hào)的大孔樹(shù)脂及富集工藝參數(shù)，則實(shí)現(xiàn)了對(duì)此類難提取物質(zhì)的提取富集。本發(fā)明提取富集方法操作簡(jiǎn)便、樣品富集效果好，結(jié)果重現(xiàn)性高，穩(wěn)定性好。
具體實(shí)施方式
結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，應(yīng)該說(shuō)明的是，下述說(shuō)明僅是為了解釋本發(fā)明，并不對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行限定。
實(shí)施例1：金銀花中六種環(huán)烯醚萜苷類成分提取富集工藝
1.取干燥粉碎過(guò)20目篩的金銀花粉末300g，50％乙醇作為提取溶劑，料液比1g:10ml進(jìn)行超聲提取，超聲2h，超聲溫度25℃，提取液抽濾，旋蒸濃縮至無(wú)醇味，備用。
2.HPD-826型大孔吸附樹(shù)脂，以體積流量為2BV/h上樣吸附，每mL濕態(tài)樹(shù)脂處理0.61g金銀花粉末，吸附完全后，3BV蒸餾水水洗除雜，然后進(jìn)行梯度洗脫：7BV 10％乙醇，7BV 30％乙醇，2BV 50％乙醇梯度洗脫，洗脫體積流量為2BV/h，得到的乙醇洗脫液除去乙醇得環(huán)烯醚萜苷。
經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，經(jīng)HPD-826大孔樹(shù)脂富集后，各環(huán)烯醚萜苷含量得到大幅度提高，同時(shí)保留率大部分在64％以上，當(dāng)藥苷和開(kāi)聯(lián)番木鱉苷二甲基乙縮醛的保留率甚至達(dá)到了100％。表明該方法具有對(duì)6種烯醚萜苷具有優(yōu)異的富集效果。
實(shí)施例2：金銀花中六種環(huán)烯醚萜苷類成分提取富集工藝
1.取干燥粉碎過(guò)20目篩的金銀花粉末300g，50％乙醇作為提取溶劑，料液比1g:10ml進(jìn)行超聲提取，超聲2h，超聲溫度25℃，提取液抽濾，旋蒸濃縮至無(wú)醇味，備用。
2.HPD-826型大孔吸附樹(shù)脂，以體積流量為3BV/h上樣吸附，每mL濕態(tài)樹(shù)脂處理0.7g金銀花粉末，吸附完全后，3BV蒸餾水水洗除雜，然后進(jìn)行梯度洗脫：7BV 10％乙醇，7BV 30％乙醇，2BV 50％乙醇梯度洗脫，洗脫體積流量為2BV/h，得到的乙醇洗脫液除去乙醇得環(huán)烯醚萜苷。
實(shí)施例3：金銀花中六種環(huán)烯醚萜苷類成分提取富集工藝
1.取干燥粉碎過(guò)20目篩的金銀花粉末300g，50％乙醇作為提取溶劑，料液比1g:10ml進(jìn)行超聲提取，超聲2h，超聲溫度25℃，提取液抽濾，旋蒸濃縮至無(wú)醇味，備用。
2.NKA-2型大孔吸附樹(shù)脂，以體積流量為1BV/h上樣吸附，每mL濕態(tài)樹(shù)脂處理0.5g金銀花粉末，吸附完全后，3BV蒸餾水水洗除雜，然后進(jìn)行梯度洗脫：7BV 10％乙醇，7BV 30％乙醇，2BV 50％乙醇梯度洗脫，洗脫體積流量為2BV/h，得到的乙醇洗脫液除去乙醇得環(huán)烯醚萜苷。
對(duì)比例1
將HPD-826大孔樹(shù)脂替換為D4020、HPD-500、DM130、D101、HPD-400和HPD-100，其余同實(shí)施例1。
計(jì)算實(shí)施例1和對(duì)比例1六種大孔樹(shù)脂對(duì)六種環(huán)烯醚萜苷類成分的吸附量，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1大孔樹(shù)脂吸附能力(mg/mL)
從表1可以看出，各種型號(hào)的大孔吸附樹(shù)脂對(duì)于金銀花提取液中的環(huán)烯醚萜苷成分都有不同程度的吸附。但是HPD-826吸附效果遠(yuǎn)優(yōu)于其他吸附樹(shù)脂。
對(duì)比例2
將實(shí)施例1中的上樣體積流量調(diào)整為1BV/h，5BV/h，10BV/h和20BV/h，其余同實(shí)施例1。
上樣完成后，測(cè)定實(shí)施例1、對(duì)比例2中大孔樹(shù)脂對(duì)六種環(huán)烯醚萜苷類成分的吸附率，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2上樣流速考察結(jié)果
結(jié)果表明，上樣流速較低時(shí)，大孔樹(shù)脂對(duì)六種環(huán)烯醚萜苷的吸附率較高，隨著流速的增加，大孔樹(shù)脂對(duì)六種環(huán)烯醚萜苷的吸附率降低。但上樣流速也不宜偏低，流速過(guò)低會(huì)降低生產(chǎn)效率，增加生產(chǎn)成本。因此，綜合考慮吸附效果和生產(chǎn)效率，以實(shí)施例1所采用的上樣流速2BV/h為宜。
對(duì)比例3
將實(shí)施例1中的梯度洗脫(方案1)修改為單一方式洗脫，分別使用7BV 10％乙醇單一方式洗脫(方案2)，7BV 30％乙醇單一方式洗脫(方案3)，2BV 50％乙醇單一方式(方案4)洗脫，計(jì)算實(shí)施例1與對(duì)比例3各洗脫方式六種環(huán)烯醚萜苷類成分各解吸率。
表3洗脫方式解吸率考察結(jié)果
由表3結(jié)果不難看出，盡管對(duì)比例單一洗脫方式存在某一種或幾種環(huán)烯醚萜苷類成分解吸率高于實(shí)施例1中的梯度洗脫，但綜合來(lái)看，實(shí)施例1中的洗脫方式遠(yuǎn)優(yōu)于對(duì)比例方案2-4。
上述雖然結(jié)合實(shí)施例和對(duì)比例對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行了描述，但并非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性勞動(dòng)即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護(hù)范圍以內(nèi)。