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一種檢測哺乳動物血液中微量循環腫瘤細胞的特異性方法與流程

文檔序號:11145707閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種檢測哺乳動物血液中微量循環腫瘤細胞的特異性方法,其特征在于:包括以下步驟:

(1)微量循環腫瘤細胞表面高表達蛋白高特異性結合適配體AP的設計與合成;

(2)適配體AP成環反應得到CAP;

(3)DNA納米器件PDN的制備;

(4)微量循環腫瘤細胞所在的單核細胞層的分離;

(5)DNA納米器件PDN標記單核細胞層中的目標微量循環腫瘤細胞;

(6)免疫磁珠法分離DNA納米器件PDN標記的微量循環腫瘤細胞;

(7)滾環擴增法測定微量循環腫瘤細胞細胞數。

2.如權利要求1所述的一種檢測哺乳動物血液中微量循環腫瘤細胞的特異性方法,其特征在于:所述步驟(1)的適配體AP是基于Cell-SELEX技術,以微量循環腫瘤細胞表面高表達的蛋白為模板而設計合成的。

3.如權利要求1所述的一種檢測哺乳動物血液中微量循環腫瘤細胞的特異性方法,其特征在于:所述步驟(3)DNA納米器件PDN的制備方法是:依據堿基互補配對原則,設計可與AP連接成多環的引物DNA1、DNA2,其中,DNA1和DNA2有兩段相同的序列片段①和②;環化DNA1和DNA2得到CDNA1和CDNA2,將CAP、CDNA1、CDNA2以1:1:1-1:5:5的摩爾比混和,雜交得DNA納米器件PDN。

4.如權利要求1所述的一種檢測哺乳動物血液中微量循環腫瘤細胞的特異性方法,其特征在于:所述步驟(7)滾環擴增所用的引物RCAprimer是依據DNA1和DNA2的相同序列片段①設計的。

5.如權利要求1所述的一種檢測哺乳動物血液中微量循環腫瘤細胞的特異性方法,其特征在于:所述滾環擴增所用的分子信標MB是依據DNA1和DNA2的相同序列片段②設計的。

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