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一種脂肪酶的固定化方法與流程

文檔序號:11145173閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種脂肪酶的固定化方法,其特征在于所述方法為:將脂肪酶、蛋白連接肽和殼聚糖結合域氨基酸序列依次連接成脂肪酶融合蛋白,以殼聚糖為載體,將脂肪酶融合蛋白進行固定化,得到固定化脂肪酶;所述蛋白連接肽的氨基酸序列為SEQ ID NO.2所示,所述殼聚糖結合域氨基酸序列為SEQ ID NO.3所示。

2.如權利要求1所述脂肪酶的固定化方法,其特征在于所述脂肪酶氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示。

3.如權利要求1所述脂肪酶的固定化方法,其特征在于所述脂肪酶融合蛋白固定化方法為:通過農桿菌侵染法將脂肪酶融合蛋白轉化水稻,獲得含有脂肪酶融合蛋白基因的轉基因水稻種子,將水稻種子提純,獲得脂肪酶融合蛋白溶液;將殼聚糖加入體積濃度1%的乙酸水溶液中,充分溶解,形成膠狀液;將膠狀液滴加到1mol/L的NaOH水溶液中,形成球形顆粒,水洗至中性,干燥后作為固體載體;然后將固體載體加入脂肪酶融合蛋白溶液中,28℃靜置2h,用去離子水淋洗干凈,室溫干燥,得到固定化脂肪酶。

4.如權利要求3所述脂肪酶的固定化方法,其特征在于所述脂肪酶融合蛋白轉化水稻是構建含有由水稻胚乳特異性啟動子介導的脂肪酶融合蛋白表達框和植物轉化篩選標記的水稻遺傳轉化載體。

5.如權利要求4所述脂肪酶的固定化方法,其特征在于所述水稻胚乳特異性啟動子的核苷酸序列為SEQ ID NO.5所示。

6.如權利要求3所述脂肪酶的固定化方法,其特征在于所述水稻種子提純的方法為:將水稻種子脫殼,加入20mM、pH 8.0的Tril-HCL緩沖液中勻漿處理,勻漿后振蕩提取2小時,靜置后取上清液,將上清液采用300-500目的過濾網過濾,取濾液,即脂肪酶融合蛋白溶液。

7.如權利要求3所述脂肪酶的固定化方法,其特征在于所述殼聚糖分子量1.05×106,所述的乙酸水溶液體積用量以殼聚糖質量計為50ml/g。

8.如權利要求3所述脂肪酶的固定化方法,其特征在于所述脂肪酶融合蛋白溶液體積用量以固體載體質量計為100ml/g。

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