本發明屬于微生物培養領域，具體涉及一種枯草芽孢桿菌的培養方法，還涉及上述的枯草芽孢桿菌的培養過程中專用的設備。

背景技術：

枯草芽孢桿菌是在自然界廣泛存在的一種好氧的產芽抱桿菌，它具有很強的脂肪酶、蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶等酶活性，代謝旺盛，對人畜無害，不污染環境。近幾年，枯草芽孢桿菌作為一種安全、高效、多功能和極具開發潛力的微生物菌種已廣泛應用于工業、農業、醫藥衛生、食品、畜牧業、水產及科研諸領域。

芽孢是細菌營養體在必需養料即將耗盡時，在細胞內形成的含水量極低、抗逆性極強的休眠體。很多研究表明，枯草芽抱桿菌所產生的芽孢具有耐熱、耐旱、抗紫外線和有機溶劑等多種抗逆性，由于芽孢極強的抗逆性，在工業機械化生產及高溫干燥的過程中，可以保證微生物菌劑的活性，提高其產品質量。目前，在工業生產過程中主要存在芽孢形成率不高、生產成本過高等問題。

因此，需要從培養工藝和培養設備上入手，發明一種高效培養枯草芽孢桿菌的方法，通過一種逐步改變培養條件的連續培養方式，提高枯草芽抱桿菌發酵過程中的芽孢數量，同時降低生產成本，實現枯草芽孢桿菌的高效生產。

技術實現要素：

為了解決上述的技術問題，本發明提供了一種高效生產枯草芽孢桿菌的設備；

本發明還提供了高效的培養枯草芽孢桿菌的方法，采用本發明的三級連續培養方法生產得到的枯草芽孢桿菌，其活菌數可達到100-130億/mL，其芽孢率高達93％以上；

本發明的枯草芽孢桿菌的連續培養方法具體步驟如下：

(1)種子培養

a.試管斜面菌種活化

將保存的枯草芽孢桿菌菌種轉接到試管斜面培養基上，保持32-35℃，培養24-36小時進行菌種活化；

試管斜面培養基配方為：葡萄糖4g/L，蛋白胨3g/L，NaCl 1g/L，牛肉膏0.5g/L，瓊脂20g/L，pH7.0-7.5，121℃滅菌20分鐘；

b.三角瓶種子培養

從活化好的試管中挑取1-2環菌種接種到三角瓶中，接種后保持32-35℃，100-150rpm，培養16-18小時；

三角瓶培養基配方為：葡萄糖20g/L，蛋白胨15g/L，NaCl5g/L，牛肉膏0.5g/L，pH7.0-7.5，121℃滅菌30分鐘；

c.種子罐菌種培養

將上述培養好的三角瓶菌種按0.5-1％接種量接種到種子罐中的培養料A中，培養溫度30-32℃，通氣量0.5-1(V/V·min)，轉速100-150rpm，培養18-20小時；

種子罐培養料A配方為：葡萄糖20g/L，玉米粉5g/L，蛋白胨15g/L，牛肉膏0.5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5，該培養料經連消裝置滅菌后，輸送至種子罐中。

(2)取培養料B：培養料B配料為，淀粉20g/L，玉米粉5g/L，豆粕粉30g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，MnSO₄5mg/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5；

(3)將步驟(2)中的培養料B經滅菌處理后輸送至一級培養罐，然后將種子罐中培養好的菌種接種至一級培養罐發酵培養；將所得的一級發酵液送至二級培養罐中培養，得到的二級發酵液送至芽孢培養罐中培養,得到含有枯草芽孢桿菌的終產物發酵液。

上述的枯草芽孢桿菌的連續培養方法中，

一級培養罐培養條件為，溫度33-35℃，攪拌槳轉速150rpm，通風量0.6-0.8(V/V·min)；

二級培養罐培養條件為，溫度33-35℃，攪拌槳轉速200rpm，通風量0.8-1.1(V/V·min)；

芽孢培養罐培養條件為，溫度38-40℃，攪拌槳轉速150rpm，通風量0.6-0.8(V/V·min)。

步驟(1)中培養料A的滅菌處理時，將配料罐中的物料通過輸送泵Ⅰ輸送至連消裝置滅菌，再輸送至維持罐中暫存，通過輸送泵Ⅱ將暫存的物料送至冷卻裝置中冷卻至30-37℃，將冷卻后的物料送至種子罐中；

步驟(3)中培養料B的滅菌處理步驟具體為，將配料罐中的物料通過輸送泵Ⅰ輸送至連消裝置滅菌，再輸送至維持罐中暫存，通過輸送泵Ⅱ將暫存的物料送至冷卻裝置中冷卻至30-37℃，將冷卻后的物料送至料液儲罐，從料液儲罐中將物料送至一級培養罐培養。

每次輸送至發酵罐的培養料B的體積為一級發酵罐總容積的80％。

從種子罐接種0.5-1％的種子到一級培養罐，培養6-10小時，然后從料液儲罐中以恒定速度輸入培養料B至一級培養罐，得到一級發酵液，同時以相同的速度將一級發酵液輸入滅過菌的二級培養罐，待二級培養罐內的二級發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度將二級發酵液輸入滅過菌的芽孢培養罐，待芽孢培養罐內發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度輸出發酵液。

每個連續生產的周期控制在10-12天以內，在一個生產周期內每隔24小時，取樣檢測是否污染雜菌，一旦發現污染雜菌，立即停止，重新滅菌開始新一輪生產。

上述的一級培養罐、二級培養罐、芽孢培養罐的體積比為2:2:1。

上述的發酵液控制其流經系統的速度，使一級培養罐和二級培養罐內發酵液的平均滯留培養時間均為6-10小時，芽孢培養罐內發酵液的平均滯留培養時間均為3-5小時，控制該連續系統內的平均總培養時間為15-25小時。

枯草芽孢桿菌的連續培養方法，包括下述的步驟：

(1)種子培養

a.試管斜面菌種活化

將保存的枯草芽孢桿菌菌種轉接到試管斜面培養基上，保持33℃，培養30小時進行菌種活化；

試管斜面培養基配方為：葡萄糖4g/L，蛋白胨3g/L，NaCl1g/L，牛肉膏0.5g/L，瓊脂20g/L，pH7.1，121℃滅菌20分鐘；

b.三角瓶種子培養

從活化好的試管中挑取1-2環枯草芽孢桿菌菌種接種到三角瓶中，接種后保持33℃，120rpm，培養17小時；

三角瓶培養基配方為：葡萄糖20g/L，蛋白胨15g/L，NaCl5g/L，牛肉膏0.5g/L，pH7.1，121℃滅菌30分鐘；

c.種子罐菌種培養

將上述培養好的三角瓶菌種按0.8％接種量接種到種子罐中的培養料A中，培養溫度31℃，通氣量0.8(V/V·min)，轉速120rpm，培養19小時；

種子罐培養料A配方為：葡萄糖20g/L，玉米粉5g/L，蛋白胨15g/L，牛肉膏0.5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5，該培養料經連消裝置滅菌后，輸送至種子罐中；

(2)取培養料B：培養料B配料為，淀粉20g/L，玉米粉5g/L，豆粕粉30g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，MnSO₄5mg/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5；

(3)將步驟(2)中的培養料B在配料罐中混合均勻，送至連消裝置滅菌，再輸送至維持罐中，經過冷卻裝置冷卻，將冷卻后的培養料B輸送至已滅菌處理的料液儲罐中；

培養料B從料液儲罐中輸入一級培養罐，輸入培養料的量為一級培養罐總體積的80％，

從種子罐接種0.5-1％的種子到一級培養罐的培養料A中，培養6-10小時后，再次連續開始從料液儲罐以恒定速度向一級培養罐中輸入培養料B；

一級培養罐發酵培養的條件為，溫度33-35℃，攪拌槳轉速150rpm，通風量0.6-0.8(V/V·min)；

同時以同樣速度將經一級培養罐發酵所得的一級發酵液輸入滅過菌的二級培養罐，待二級培養罐內的二級發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度將所得的二級發酵液輸送至滅過菌的芽孢培養罐；所述的二級培養罐發酵培養條件為，溫度33-35℃，攪拌槳轉速200rpm，通風量0.8-1.1(V/V·min)；

待芽孢培養罐內發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度輸出最終所得的發酵液，然后一直維持該系統的恒定連續發酵狀態；

芽孢培養罐培養條件為，溫度38-40℃，攪拌槳轉速150rpm，通風量0.6-0.8(V/V·min)。

本發明的枯草芽孢桿菌的連續培養方法專用的發酵系統，包括依次串聯連接的配料罐、連消裝置、維持罐、冷卻裝置、料液儲罐、一級培養罐、二級培養罐、芽孢培養罐；

冷卻裝置與一級培養罐之間并聯有種子罐；

芽孢培養罐連接有輔料罐；

配料罐與連消裝置之間連接有輸送泵Ⅰ；所述的維持罐與冷卻裝置之間有輸送泵Ⅱ；

儲料罐、一級培養罐、二級培養罐、芽孢培養罐之間均有恒流泵。

冷卻裝置產生的熱水可用于連消裝置預熱，從而減少能耗，節約成本。

本發明的有益效果在于，可以高度機械化和自動化，枯草芽孢桿菌的質量和品質比較穩定均一；

本發明方法由于高度的自動化操作，減少了人為因素和與外界接觸的機會，從而減少了操作帶來的污染幾率，不易發生雜菌污染和菌種變異；

本發明方法實施過程中，各個培養罐體內的溫度探頭等檢測儀器無須經過多次高溫滅菌，減少損傷，延長各檢測儀器的壽命；

本發明方法耗費在非生產的準備時間比較少，提高了產量和生產效率；

本發明方法將菌種繁殖、菌體高速生長和芽孢產生的過程分別進行控制，使二級培養罐和芽孢培養罐的菌體一直處于一個比較高的濃度，有效提高了枯草芽孢桿菌菌體濃度和芽孢率。

附圖說明

圖1為本發明的枯草芽孢桿菌連續培養的流程圖；

圖中，1-配料罐，2-連消裝置，3-維持罐，4-輸送泵Ⅰ，5-料液儲罐，6-一級培養罐，7-種子罐，8-二級培養罐，9-芽孢培養罐，10-輔料罐，11-冷卻裝置，12-輸送泵Ⅱ。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施方式來對本發明作更進一步的說明，以便本領域的技術人員更了解本發明，但并不以此限制本發明。

實施例1

枯草芽孢桿菌的連續培養方法專用的發酵系統，包括依次串聯連接的配料罐1、連消裝置2、維持罐3、冷卻裝置11、料液儲罐5、一級培養罐6、二級培養罐8、芽孢培養罐9；

冷卻裝置11與一級培養罐6之間并聯有種子罐7；

芽孢培養罐9連接有輔料罐10；

配料罐1與連消裝置2之間連接有輸送泵Ⅰ4；維持罐3與冷卻裝置11之間有輸送泵輸送泵Ⅱ12；

儲料罐、一級培養罐6、二級培養罐8、芽孢培養罐9之間均有恒流泵。

具體的步驟是，從種子罐7接種0.5-1％的枯草芽孢桿菌菌種到一級培養罐6的培養料A中，培養8-12小時，然后從料液儲罐5中以恒定速度輸入培養料B至一級培養罐6，得到一級發酵液，再以相同的速度將發酵液輸入滅過菌的二級培養罐8，待二級培養罐8內的二級發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度將二級發酵液輸入滅過菌的芽孢培養罐9，待芽孢培養罐9內發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度輸出終產物發酵液。

步驟(1)中培養料A的滅菌處理時，將配料罐1中的物料通過輸送泵Ⅰ4輸送至連消裝置2滅菌，再輸送至維持罐3中暫存，通過輸送泵Ⅱ12將暫存的物料送至冷卻裝置11中冷卻至30-37℃，將冷卻后的物料送至種子罐中；

步驟(3)中培養料B的滅菌處理步驟具體為，將配料罐1中的物料通過輸送泵Ⅰ4輸送至連消裝置2滅菌，再輸送至維持罐3中暫存，通過輸送泵Ⅱ12將暫存的物料送至冷卻裝置11中冷卻至30-37℃，將冷卻后的物料送至料液儲罐5，從料液儲罐5中將物料送至一級培養罐6培養。

實施例2

枯草芽孢桿菌的連續培養方法，包括下述的步驟：

(1)種子培養

a.試管斜面菌種活化

將保存的枯草芽孢桿菌菌種轉接到試管斜面培養基上，保持33℃，培養30小時進行菌種活化；

試管斜面培養基配方為：葡萄糖4g/L，蛋白胨3g/L，NaCl1g/L，牛肉膏0.5g/L，瓊脂20g/L，pH7.1，121℃滅菌20分鐘；

b.三角瓶種子培養

從活化好的試管中挑取1-2環枯草芽孢桿菌菌種接種到三角瓶中，接種后保持33℃，120rpm，培養17小時；

三角瓶培養基配方為：葡萄糖20g/L，蛋白胨15g/L，NaCl5g/L，牛肉膏0.5g/L，pH7.1，121℃滅菌30分鐘；

c.種子罐菌種培養

將上述配制好的三角瓶菌種按0.8％接種量接種到種子罐中的培養料A中，培養溫度31℃，通氣量0.8(V/V·min)，轉速120rpm，培養19小時；

種子罐培養料A配方為：葡萄糖20g/L，玉米粉5g/L，蛋白胨15g/L，牛肉膏0.5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5。該培養料經連消裝置滅菌后，輸送至種子罐中；

(2)取培養料B：培養料B配料為，淀粉20g/L，玉米粉5g/L，豆粕粉30g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，MnSO₄5mg/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5；

(3)將步驟(2)中的培養料在配料罐中混合均勻，送至連消裝置滅菌，再輸送至維持罐中，經過冷卻裝置冷卻，將冷卻后的培養料輸送至已滅菌處理的料液儲罐中；

培養料從料液儲罐中輸入一級培養罐，輸入培養料的量為一級培養罐總體積的80％，從種子罐接種0.8％的種子到一級培養罐，培養8小時后，再次連續開始從料液儲罐以恒定速度向一級培養罐中輸入培養料；

一級培養罐發酵培養的條件為，溫度34℃，攪拌槳轉速150rpm，通風量0.7V/V·min；

同時以同樣速度將經一級培養罐6發酵所得的一級發酵液輸入滅過菌的二級培養罐8，待二級培養罐8內的二級發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度將所得的二級發酵液輸送至滅過菌的芽孢培養罐9；二級培養罐8發酵培養條件為，溫度34℃，攪拌槳轉速200rpm，通風量0.9V/V·min；

待芽孢培養罐9內發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度輸出最終所得的發酵液，然后一直維持該系統的恒定連續發酵狀態；

芽孢培養罐9培養條件為，溫度39℃，攪拌槳轉速150rpm，通風量0.7V/V·min。

一級培養罐6、二級培養罐7、芽孢培養罐9的體積比為2:2:1。

每個連續生產的周期控制在10-12天以內，在一個生產周期內每隔24小時，取樣檢測是否污染雜菌，一旦發現污染雜菌，立即停止，重新滅菌開始新一輪生產。

發酵液控制其流經系統的速度，使一級培養罐6和二級培養罐8內發酵液的平均滯留培養時間均為8小時，芽孢培養罐9內發酵液的平均滯留培養時間均為4小時，控制該連續系統內的平均總培養時間為20小時。

該系統可實現高度機械化和自動化，減少了人為因素和與外界接觸的機會，減少污染幾率，能夠連續獲得高質量且穩定的發酵液，發酵液的枯草芽孢桿菌活菌數可達到約120億/mL左右，其芽孢率高達95.0％；

與傳統的分批生產相比較，本發明各個培養罐體內的溫度探頭等檢測儀器無須經過多次高溫滅菌，減少損傷，延長各檢測儀器的壽命；

本發明方法在其生產周期內，備料、滅菌需要10小時左右，進入培養罐后到開始收獲發酵液耗時15-25小時，然后一直有產品形成，一直是生產時間，即本發明的連續系統內每個周期的平均總培養時間為15-25小時；而傳統的分批生產每批次都需要備料、滅菌耗費6小時，種子罐培養耗時20小時，培養罐耗時28小時，清洗罐體耗時4小時，即每個周期的耗時為58小時，由此可見本發明耗費在非生產的準備時間比較少，每個生產周期約生產效率提高了1倍左右。

若將上述的培養過程的培養基和培養料調整如下：

試管斜面菌種活化中，試管斜面培養基配方為：葡萄糖4g/L，蛋白胨3g/L，NaCl1g/L，牛肉膏0.5g/L，瓊脂20g/L，pH7.0-7.5，121℃下滅菌20分鐘；

三角瓶培養基配方為：葡萄糖15g/L，豆粕粉16g/L，蛋白胨1g/L，NaCl1g/L，KH2PO4 0.3g/L，K2HPO4 0.3g/L，pH7.0-7.5，121℃滅菌20分鐘：

種子罐中的培養料A的配方為：葡萄糖20g/L，玉米粉5g/L，豆粕粉20g/L，(NH4)2HPO4 0.5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl2 1g/L，MgSO4·7H2O 1.2g/L，KH2PO4 0.3g/L，K2HPO4 0.7g/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5；

取培養料B：培養料B配料為，淀粉/葡萄糖25g/L，玉米粉6g/L，豆粕粉30g/L，(NH4)2HPO4 0.5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl2 1g/L，MgSO4·7H2O 1.0g/L，KH2PO4 0.3g/L，K2HPO4 0.3g/L，MnSO4 5mg/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5；

培養的方法完全相同，僅僅是將培養基和培養料作調整，發酵液的枯草芽孢桿菌活菌數可達到約90億/mL左右，其芽孢率為89.1％；本發明人在實驗過程中，同時也研究了地衣芽孢桿菌的連續培養，發現上述的培養對于地衣芽孢桿菌，其培養效果較好，但是該培養基和培養料，用于枯草芽孢桿菌，其效果要差一些，以上的實驗表明，本發明的培養方法中，培養基、培養料的選擇，也會對芽孢率和活菌數產生影響。從培養料A送到種子罐中接種三角瓶中的菌種，然后將培養料B送至一級培養罐中，同時將經種子罐培養后中的菌種接種至一級培養罐中發酵，再經過二級培養罐中發酵，再轉入芽孢培養罐中發酵，至最后得到含有枯草芽孢桿菌的終產物發酵液，此為一個生產周期。

實施例3

枯草芽孢桿菌的連續培養方法，包括下述的步驟：

(1)種子培養

a.試管斜面菌種活化

將保存的枯草芽孢桿菌菌種轉接到試管斜面培養基上，保持32℃，培養24小時進行菌種活化；

試管斜面培養基配方為：葡萄糖4g/L，蛋白胨3g/L，NaCl1g/L，牛肉膏0.5g/L，瓊脂20g/L，pH7.0，121℃滅菌20分鐘；

b.三角瓶種子培養

從活化好的試管中挑取1-2環菌種接種到三角瓶中，接種后保持32℃，100rpm，培養16小時；

所述的三角瓶培養基配方為：葡萄糖20g/L，蛋白胨15g/L，NaCl5g/L，牛肉膏0.5g/L，pH7.0，121℃滅菌30分鐘；

c.種子罐菌種培養

將上述配制好的三角瓶菌種按0.5-1％接種量接種到種子罐中的培養料A中，培養溫度30℃，通氣量0.5(V/V·min)，轉速100rpm，培養18小時；

種子罐培養料A配方為：葡萄糖20g/L，玉米粉5g/L，蛋白胨15g/L，牛肉膏0.5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5。該培養料經連消裝置滅菌后，輸送至種子罐中。

(2)取培養料B：培養料B配料為，淀粉20g/L，玉米粉5g/L，豆粕粉30g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，MnSO₄5mg/L，消泡劑1g/L，pH7.0；

(3)將步驟(2)中的培養料在配料罐中混合均勻，送至連消裝置滅菌，再輸送至維持罐中，經過冷卻裝置冷卻，將冷卻后的培養料輸送至已滅菌處理的料液儲罐中；

培養料從料液儲罐中輸入一級培養罐，輸入培養料的量為一級培養罐總體積的80％，從種子罐接種0.5％的種子到一級培養罐，培養6小時后，再次連續開始從料液儲罐以恒定速度向一級培養罐中輸入培養料；

一級培養罐發酵培養的條件為，溫度33℃，攪拌槳轉速150rpm，通風量0.6(V/V·min)；

同時以同樣速度將經一級培養罐發酵所得的一級發酵液輸入滅過菌的二級培養罐，待二級培養罐內的二級發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度將所得的二級發酵液輸送至滅過菌的芽孢培養罐；所述的二級培養罐發酵培養條件為，溫度33℃，攪拌槳轉速200rpm，通風量0.8(V/V·min)；

待芽孢培養罐內發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度輸出最終所得的發酵液，然后一直維持該系統的恒定連續發酵狀態；

芽孢培養罐培養條件為，溫度38℃，攪拌槳轉速150rpm，通風量0.6(V/V·min)。

發酵液的枯草芽孢桿菌活菌數可達到約116億/mL，其芽孢率高達94.2％。

實施例4

枯草芽孢桿菌的連續培養方法，包括下述的步驟：

(1)種子培養

a.試管斜面菌種活化

將保存的枯草芽孢桿菌菌種轉接到試管斜面培養基上，保持35℃，培養36小時進行菌種活化；

試管斜面培養基配方為：葡萄糖4g/L，蛋白胨3g/L，NaCl1g/L，牛肉膏0.5g/L，瓊脂20g/L，pH7.5，121℃滅菌20分鐘；

b.三角瓶種子培養

從活化好的試管中挑取1-2環菌種接種到三角瓶中，接種后保持35℃，150rpm，培養18小時；

三角瓶培養基配方為：葡萄糖20g/L，蛋白胨15g/L，NaCl5g/L，牛肉膏0.5g/L，pH7.5，121℃滅菌30分鐘；

c.種子罐菌種培養

將上述配制好的三角瓶菌種按1％接種量接種到種子罐中的培養料A中，培養溫度32℃，通氣量1(V/V·min)，轉速150rpm，培養20小時；

種子罐培養料A配方為：葡萄糖20g/L，玉米粉5g/L，蛋白胨15g/L，牛肉膏0.5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，消泡劑1g/L，pH7.5；該培養料經連消裝置滅菌后，輸送至種子罐中；

(2)取培養料B：培養料B配料為，淀粉20g/L，玉米粉5g/L，豆粕粉30g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，MnSO₄5mg/L，消泡劑1g/L，pH7.5；

(3)將步驟(2)中的培養料在配料罐中混合均勻，送至連消裝置滅菌，再輸送至維持罐中，經過冷卻裝置冷卻，將冷卻后的培養料輸送至已滅菌處理的料液儲罐中；

培養料從料液儲罐中輸入一級培養罐，輸入培養料的量為一級培養罐總體積的80％，從種子罐接種1％的種子到一級培養罐，培養10小時后，再次連續開始從料液儲罐以恒定速度向一級培養罐中輸入培養料；

一級培養罐發酵培養的條件為，溫度35℃，攪拌槳轉速150rpm，通風量0.8(V/V·min)；

同時以同樣速度將經一級培養罐發酵所得的一級發酵液輸入滅過菌的二級培養罐，待二級培養罐內的二級發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度將所得的二級發酵液輸送至滅過菌的芽孢培養罐；所述的二級培養罐發酵培養條件為，溫度35℃，攪拌槳轉速200rpm，通風量1.1(V/V·min)；

待芽孢培養罐內發酵液達到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度輸出最終所得的發酵液，然后一直維持該系統的恒定連續發酵狀態；

芽孢培養罐培養條件為，溫度40℃，攪拌槳轉速150rpm，通風量0.8(V/V·min)。

發酵液的枯草芽孢桿菌活菌數可達到約118億/mL，其芽孢率高達94.6％。