本發明涉及微生物發酵技術的應用，具體地說是一種發酵型煙用玫瑰花提取物及其制備方法。
背景技術：
玫瑰是薔薇科薔薇屬落葉叢生灌木，玫瑰花又名徘徊花、刺玫、筆頭花等，玫瑰花中含有的天然玫瑰油的主要成分是單萜類化合物，如芳樟醇、香葉醇、香茅醇以及玫瑰醚、倍半萜烯、倍半萜含氧化合物及苯衍生物，這種天然玫瑰油不僅氣味宜人而且抗氧化，抗腫瘤，擴張血管，降血糖等等功效。如今，不同口味的香煙越來越收到消費者的青睞，尤其對于女性香煙消費者而言，具有花香的香煙不僅改善了香煙刺喉的缺點而且清香的花香味使人心情愉悅。
中國發明專利(授權公告號CN102406231 B授權公告日2013.12.11)公開了一種發酵型煙用玫瑰花提取物及其制備方法。它是將玫瑰花水提取物加入葡萄糖制得培養基，將保藏號為CCTCC NO：M209272、保藏名稱為釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae HHL-1的培養物制得培養液，然后將培養基置入培養液中進行發酵制備而成。該發明所制備的發酵型煙用玫瑰花提取物具有濃郁的玫瑰花香，并帶有宜人的酸甜香氣，添加到卷煙中，其具有豐富煙香、增加甜感、降低刺激性及柔和煙氣的作用。但是釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae HHL-1發酵會產生大量的酒香味，這種酒香味濃郁，掩蓋了玫瑰花水提取物的清香，而且制備玫瑰花水提取物會有大量的玫瑰花殘渣，玫瑰花殘渣里含有大量蛋白質，淀粉，纖維素以及各種礦物質，如何將這些殘渣再利用將很大程度地節約資源，降低生產成本。
技術實現要素：
本發明的目的就是針對上述缺陷，提供一種發酵型煙用玫瑰花提取物及其制備方法，得到的發酵型煙用玫瑰花提取物不僅降低了對喉部鼻部的刺激而且具有明顯的玫瑰花香，該制備工藝簡單，降低了生產成本。
為實現上述目的，本發明的技術方案是：
一種發酵型煙用玫瑰花提取物，它是將玫瑰花水提取物與玫瑰花殘渣酶解液混合制成玫瑰花培養基，將米曲霉與釀酒酵母制成種子液加入玫瑰花培養基中發酵制備而成；所述玫瑰花殘渣酶解液是向玫瑰花殘渣液中加入纖維素酶；所述玫瑰花殘渣液是制備玫瑰花水提取物后得到的濾渣，并向濾渣中加入水而得。
優選地，所述纖維素酶占玫瑰花殘渣液重量的0.05～0.1％，所述米曲霉與釀酒酵母種子液中米曲霉與釀酒酵母的總量為1×108～3×108cfu/mL。
一種發酵型煙用玫瑰花提取物的制備方法，包括以下步驟：
1)將玫瑰花曬干，研磨成玫瑰花粉，取100g玫瑰花粉加入900g無菌水，回流提取4～5h，0.2μm微孔濾膜過濾，收集濾液與濾渣；濾液為玫瑰花水提取物，濾渣進行下一步處理；
2)向濾渣中加入9倍重量的無菌水得到玫瑰花殘渣液，并控制pH為5.0～6.5，向玫瑰花殘渣液中加入纖維素酶，酶解反應完畢后離心，取上清液得到玫瑰花殘渣酶解液；
3)將步驟1)得到的玫瑰花水提取物與步驟2)得到的玫瑰花殘渣酶解液混合，再加入0.05～0.50％氯化鈉和0.08～0.2％的葡糖糖經過高壓滅菌鍋處理制得玫瑰花培養基，控制玫瑰花培養基的pH為6.5～7.5；
4)將米曲霉與釀酒酵母菌種接入YPD液體培養基中，恒溫搖床溫度為25～30℃，轉速為150～160rpm，培養1～2天后得到米曲霉與釀酒酵母種子液；
5)向玫瑰花培養基中加入米曲霉與釀酒酵母種子液，在發酵罐中發酵；
6)發酵完畢后，離心發酵液，取上清液，將上清液用旋轉蒸發儀濃縮得到濃縮發酵液，向濃縮發酵液中添加重量百分比為2～20％的丙二醇，即得到發酵型煙用玫瑰花提取物。
優選地，所述步驟2)中纖維素酶占玫瑰花殘渣液重量的0.05～0.1％，酶解時間為2～3h；所述步驟4)中米曲霉與釀酒酵母種子液中米曲霉與釀酒酵母的總量為1×108～3×108cfu/mL；所述步驟5)中發酵工藝為：pH值為6.0～8.0，攪拌轉速為250～300rpm，通氣量為6～8VVM，發酵溫度為25℃～30℃，發酵時間為2d～4d；所述步驟5)中米曲霉與釀酒酵母種子液的體積為玫瑰花培養基體積的5～10％，所述步驟6)中旋轉蒸發儀的溫度為70～80℃，轉速為120～140rpm，時間為1～2h。
本發明采用的纖維素酶、胰蛋白酶與果膠酶購于武漢生物制品研究所，米曲霉菌種購自武漢大學菌種保藏中心，釀酒酵母為來自專利公開號102406231A中的釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae HHL-1，中的為旋轉蒸發儀的型號為BUCHIR-3000型。
本發明的有益效果是：
1、本發明采用米曲霉與釀酒酵母共同發酵，相比于單純利用釀酒酵母，其香氣清淡，不會掩蓋玫瑰花的花香，而且能柔和玫瑰花花香，使煙用玫瑰花提取物不刺鼻喉，煙氣更加飄逸。
2、結合酶解法制備玫瑰花提取物，不僅充分利用玫瑰花的殘渣，降低了生產成本，而且能使玫瑰花的香味物質更充分的釋放，香氣充足。
具體實施方式
為更好地理解本發明，結合具體實例對發明進行詳細的說明。
實施例1
發酵型煙用玫瑰花提取物的制備方法，包括以下步驟：
1)將玫瑰花曬干，研磨成玫瑰花粉，取100g玫瑰花粉加入900g無菌水，回流提取4h，0.2μm微孔濾膜過濾，收集濾液與濾渣；濾液為玫瑰花水提取物，濾渣進行下一步處理；
2)向濾渣中加入9倍重量的無菌水得到玫瑰花殘渣液，并控制pH為5.0，向玫瑰花殘渣液中加入纖維素酶，纖維素酶占玫瑰花殘渣液重量的0.05％，酶解時間為3h；酶解反應完畢后離心，取上清液得到玫瑰花殘渣酶解液；
3)將步驟1)得到的玫瑰花水提取物與步驟2)得到的玫瑰花殘渣酶解液混合，再加入0.05％氯化鈉和0.08％的葡糖糖經過高壓滅菌鍋處理制得玫瑰花培養基，控制玫瑰花培養基的pH為6.5；
4)將米曲霉與釀酒酵母菌種接入YPD液體培養基中，恒溫搖床溫度為25℃，轉速為160rpm，培養2天后得到米曲霉與釀酒酵母種子液，米曲霉與釀酒酵母種子液中米曲霉與釀酒酵母的總量為1×108cfu/mL；
5)向玫瑰花培養基中加入米曲霉與釀酒酵母種子液，米曲霉與釀酒酵母種子液的體積為玫瑰花培養基體積的10％；在發酵罐中發酵，發酵工藝為：pH值為6.0，攪拌轉速為250rpm，通氣量為6VVM，發酵溫度為25℃℃，發酵時間為2d；
6)發酵完畢后，離心發酵液，取上清液，將上清液用旋轉蒸發儀濃縮得到濃縮發酵液，旋轉蒸發儀的溫度為70℃，轉速為140rpm，時間為2h；向濃縮發酵液中添加重量百分比為2％的丙二醇，即得到發酵型煙用玫瑰花提取物。
實施例2
發酵型煙用玫瑰花提取物的制備方法，包括以下步驟：
1)將玫瑰花曬干，研磨成玫瑰花粉，取100g玫瑰花粉加入900g無菌水，回流提取5h，0.2μm微孔濾膜過濾，收集濾液與濾渣；濾液為玫瑰花水提取物，濾渣進行下一步處理；
2)向濾渣中加入9倍重量的無菌水得到玫瑰花殘渣液，并控制pH為6.5，向玫瑰花殘渣液中加入纖維素酶，纖維素酶占玫瑰花殘渣液重量的0.1％，酶解時間為2h；酶解反應完畢后離心，取上清液得到玫瑰花殘渣酶解液；
3)將步驟1)得到的玫瑰花水提取物與步驟2)得到的玫瑰花殘渣酶解液混合，再加入0.50％氯化鈉和0.2％的葡糖糖經過高壓滅菌鍋處理制得玫瑰花培養基，控制玫瑰花培養基的pH為7.5；
4)將米曲霉與釀酒酵母菌種接入YPD液體培養基中，恒溫搖床溫度為30℃，轉速為150rpm，培養1天后得到米曲霉與釀酒酵母種子液，米曲霉與釀酒酵母種子液中米曲霉與釀酒酵母的總量為3×108cfu/mL；
5)向玫瑰花培養基中加入米曲霉與釀酒酵母種子液，米曲霉與釀酒酵母種子液的體積為玫瑰花培養基體積的5％；在發酵罐中發酵，發酵工藝為：pH值為8.0，攪拌轉速為300rpm，通氣量為8VVM，發酵溫度為30℃，發酵時間為4d；
6)發酵完畢后，離心發酵液，取上清液，將上清液用旋轉蒸發儀濃縮得到濃縮發酵液，旋轉蒸發儀的溫度為80℃，轉速為120rpm，時間為1h；向濃縮發酵液中添加重量百分比為20％的丙二醇，即得到發酵型煙用玫瑰花提取物。
實施例3
發酵型煙用玫瑰花提取物的制備方法，包括以下步驟：
1)將玫瑰花曬干，研磨成玫瑰花粉，取100g玫瑰花粉加入900g無菌水，回流提取4.5h，0.2μm微孔濾膜過濾，收集濾液與濾渣；濾液為玫瑰花水提取物，濾渣進行下一步處理；
2)向濾渣中加入9倍重量的無菌水得到玫瑰花殘渣液，并控制pH為6.0，向玫瑰花殘渣液中加入纖維素酶，纖維素酶占玫瑰花殘渣液重量的0.08％，酶解時間為2.5h；酶解反應完畢后離心，取上清液得到玫瑰花殘渣酶解液；
3)將步驟1)得到的玫瑰花水提取物與步驟2)得到的玫瑰花殘渣酶解液混合，再加入0.2％氯化鈉和0.1％的葡糖糖經過高壓滅菌鍋處理制得玫瑰花培養基，控制玫瑰花培養基的pH為7.0；
4)將米曲霉與釀酒酵母菌種接入YPD液體培養基中，恒溫搖床溫度為28℃，轉速為155rpm，培養2天后得到米曲霉與釀酒酵母種子液，米曲霉與釀酒酵母種子液中米曲霉與釀酒酵母的總量為2×108cfu/mL；
5)向玫瑰花培養基中加入米曲霉與釀酒酵母種子液，米曲霉與釀酒酵母種子液的體積為玫瑰花培養基體積的8％；在發酵罐中發酵，發酵工藝為：pH值為7.0，攪拌轉速為280rpm，通氣量為7VVM，發酵溫度為28℃，發酵時間為3d；
6)發酵完畢后，離心發酵液，取上清液，將上清液用旋轉蒸發儀濃縮得到濃縮發酵液，旋轉蒸發儀的溫度為75℃，轉速為130rpm，時間為1.5h；向濃縮發酵液中添加重量百分比為10％的丙二醇，即得到發酵型煙用玫瑰花提取物。
將實施例1～3進行評吸試驗，結果見表1：
表1
以上所述實施例僅表達了本發明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對本發明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發明的保護范圍。因此，本發明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。