本發明涉及一種超氧化物歧化酶的制備方法，更具體地說，本發明涉及一種超氧化物歧化酶的層析純化制備方法，屬于超氧化物歧化酶技術領域。
背景技術：
超氧化物歧化酶(SOD)是一種廣泛存在于生物體內，能催化超氧負離子發生歧化反應的金屬酶類。根據其中心離子的不同分為CU／Zn-SOD，Mn-SOD，Fe-SOD三種。在體內可以清除超氧陰離子自由基，從而起到抗氧化、抗衰老、防輻射等作用。由于該類酶能有效清除機體內的超氧自由基，從而有效地預防活性氧對生物品的毒害作用，因而具有抗輻射、抗腫瘤及延緩機體內的超氧自由基，從而有效地預防活性氧對生物體的毒害作用，因而具有抗輻射、抗腫瘤及延緩機體衰老等功能，在保健品、醫藥和化妝品行業中有重要的應用價值。目前我國傳統工業大多從動物的血液和內臟器官中提取，但這類原料來源有限，成分復雜，且在儲存、運輸等方面存在諸多不便，因此容易導致生產工藝復雜化，使生產成本大幅度上升。所以，尋找廉價、易得的原料，通過比較簡便的方法生產高純度的SOD成了生產企業和研究人員關注的熱點。近來的研究發現，大蒜細胞中含有豐富Zn-SOD、Cu-SOD，其分子量約為32000，與從牛血等動物血紅蛋白中所提取的十分接近，而且其它各項性能也來源豐富、易于處理而使生產成本大大降低，而且生產工藝也能得到很大的簡化，這對于擴大生產規模，實現的廣泛應用將是十分有益的。
現有制備方法制得的產品生物活性較低，工藝復雜，不易于實現工業化生產。
技術實現要素：
本發明旨在解決現有技術中制備方法的問題，提供一種超氧化物歧化酶的層析純化制備方法，能夠制得生物活性較高的產品，并實現工業化生產。
為了實現上述發明目的，其具體的技術方案如下：
一種超氧化物歧化酶的層析純化制備方法，其特征在于：包括以下工藝步驟：
A、準確量取BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹脂，轉移至層析柱內；用酒精洗至柱內流出液于水中不產生白色渾濁；用去離子水洗凈層析柱內樹脂的酒精；
B、用1N HCl對大孔弱堿離子交換樹脂進行轉型處理，再用去離子水洗至中性，備用；
C、準確稱取SOD提取物粗品，溶解于含有酒精的去離子水中，備用；
D、以50ml/h的流速使配制好的SOD提取物粗品溶液通過層析柱；用去離子水洗去層析柱內殘留的SOD溶液；
E、用酒精、NaCl水溶液洗脫樹脂吸附的SOD提取物，收集流出液，濃縮即得純化產品。
本發明在步驟A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹脂為100ml。
本發明在步驟C中，所述SOD提取物粗品為20g。
本發明在步驟C中，所述酒精濃度為20%，去離子水為200ml。
本發明在步驟E中，所述酒精濃度為40-50%，所述NaCl水溶液的濃度為20%。
本發明帶來的有益技術效果：
1、本發明采用BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹脂層析法使SOD粗品提取物得到有效純化，產品生物活性由50-100U/mg提高到了3000U/mg。該工藝簡單、易于操作、產品純化成本低、易于實現工業化生產。
2、本發明根據SOD的分子量大小及物理化學性質，尤其是SOD的分子極性，采用大孔樹脂層析技術對大蒜SOD提取物粗品進一步分離純化，以期獲得含量較高的SOD產品。其生物活性約為3000U/mg左右。
具體實施方式
實施例1
一種超氧化物歧化酶的層析純化制備方法，包括以下工藝步驟：
A、準確量取BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹脂，轉移至層析柱內；用酒精洗至柱內流出液于水中不產生白色渾濁；用去離子水洗凈層析柱內樹脂的酒精；
B、用1N HCl對大孔弱堿離子交換樹脂進行轉型處理，再用去離子水洗至中性，備用；
C、準確稱取SOD提取物粗品，溶解于含有酒精的去離子水中，備用；
D、以50ml/h的流速使配制好的SOD提取物粗品溶液通過層析柱；用去離子水洗去層析柱內殘留的SOD溶液；
E、用酒精、NaCl水溶液洗脫樹脂吸附的SOD提取物，收集流出液，濃縮即得純化產品。
實施例2
在實施例1的基礎上，優選的：
在步驟A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹脂為100ml。
在步驟C中，所述SOD提取物粗品為20g。
在步驟C中，所述酒精濃度為20%，去離子水為200ml。
在步驟E中，所述酒精濃度為40%，所述NaCl水溶液的濃度為20%。
實施例3
在實施例1-3的基礎上，優選的：
在步驟A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹脂為100ml。
在步驟C中，所述SOD提取物粗品為20g。
在步驟C中，所述酒精濃度為20%，去離子水為200ml。
在步驟E中，所述酒精濃度為50%，所述NaCl水溶液的濃度為20%。
實施例4
在實施例1-3的基礎上，優選的：
在步驟A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹脂為100ml。
在步驟C中，所述SOD提取物粗品為20g。
在步驟C中，所述酒精濃度為20%，去離子水為200ml。
在步驟E中，所述酒精濃度為45%，所述NaCl水溶液的濃度為20%。