本發(fā)明領(lǐng)域?qū)儆诨瘜W(xué)、化妝品和醫(yī)藥，涉及一種E-3-(苯基衍生物-次甲基)-吡喃并二氫黃酮衍生物及制備及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
黃酮類化合物在自然界中種類繁多，含量豐富，提取制備工藝簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉。由于天然黃酮系植物酶的次生代謝產(chǎn)物，多含有酚羥基。由于酚羥基分布不均勻，分占兩個(gè)苯環(huán)，未形成鄰二酚OH，抗氧化性作用較弱，代表性的化合物如橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、地奧司明、野漆樹苷、芹菜素、橙皮素、柚皮素、甲基橙皮苷。即使含有鄰二酚羥基，由于兩個(gè)苯環(huán)具有較好的共平面性，分子與分子易于層層排列，形成結(jié)晶，水溶性低。
綠色植物合成黃酮類化合物，主要在植物體內(nèi)發(fā)揮抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎的功效，用于保護(hù)植物。黃酮類化合物水溶性較低，為了發(fā)揮功效，在植物體內(nèi)常合成苷類化合物。由于苷類化合物極性較大，難以通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)的細(xì)胞膜，生物利用度角度。在動(dòng)物體內(nèi)吸收，大多數(shù)是利用腸道細(xì)菌，對(duì)苷類的降解，產(chǎn)生苷元被吸收，吸收量有限，導(dǎo)致黃酮苷類化合物生物利用度低下，代表性的化合物，如橙皮苷、地奧司明、黃芩苷。
在黃酮3-位引入取代基，與黃酮-2-苯基存在空間位阻，發(fā)生扭曲，水溶性增加，代表性化合物如蘆丁。由于天然黃酮多存在5,7-二OH，對(duì)黃酮的A環(huán)有顯著的活化作用，當(dāng)在在黃酮-3位引入取代基，導(dǎo)致A環(huán)上也能發(fā)生反應(yīng)，副產(chǎn)物較多，且性質(zhì)相近，難以分離，產(chǎn)率不高，其研究受限。因此，對(duì)5,7-二OH二氫黃酮的3位進(jìn)行取代，一直受到制約。
當(dāng)對(duì)7-OH進(jìn)行芐基、甲氧基等保護(hù)，容易開環(huán)，生成査爾酮，具有較好的惰性，無(wú)法再進(jìn)行羥醛縮合。因此，對(duì)于含有7-OH的二氫黃酮，在其3-位和苯甲醛及其衍生物縮合，有著及其嚴(yán)重的困難。
用酸酐保護(hù)7-OH，形成酯鍵，由于羥醛縮合，需要酸堿催化，酯鍵容易水解，導(dǎo)致副反應(yīng)較多，產(chǎn)率不高，因此酯鍵保護(hù)同樣受到明顯限制。
多環(huán)類化合物，具有較好的活性：由飽和環(huán)構(gòu)成的，如四環(huán)三萜皂苷、五環(huán)三萜皂苷、強(qiáng)行苷等甾環(huán)；由芳香環(huán)構(gòu)成的如木脂素、黃酮、蒽醌雖也有一定活性，分子中環(huán)的個(gè)數(shù)還是過(guò)于單薄，繼續(xù)增加其環(huán)狀化合物，有利于增大其比表面積，進(jìn)而增加和靶標(biāo)的結(jié)合力，有利于提高活性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供一種E-3-(苯基衍生物-次甲基)-吡喃并二氫黃酮衍生物及制備及應(yīng)用，其調(diào)節(jié)二氫黃酮7,8-吡喃吡喃環(huán)上的取代基、3-次甲基苯基上的取代基，構(gòu)建有著不同極性的新型黃酮，提升二氫黃酮中雙鍵、酚羥基、形成較大的共軛結(jié)構(gòu)，以及合適的脂水分配系數(shù)，以期在抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、擴(kuò)張心腦血管等作用具有更好的活性。
本發(fā)明一種E-3-(苯基衍生物-次甲基)-吡喃并二氫黃酮衍生物，其結(jié)構(gòu)通式如(Ⅰ)所示，
其中：R1可為-H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH＝C(CH3)2、-CH＝C(CH3)CH2CH2CH＝C(CH3)2；R2可為-H、-CH3；R3可為-H、-OH；R4可為-H、-OH、-OCH3、-N(CH3)2、-F、-Cl中單基團(tuán)或多基團(tuán)；R5可為-OH、-OCH3、-N(CH3)2-F、-Cl、-COOH中單基團(tuán)或多基團(tuán)；X可為-CH或-CH2。
本發(fā)明另一目的是公開一種E-3-(苯基衍生物-次甲基)-吡喃并二氫黃酮衍生物制備，其是以吡喃并(7,8)-二氫黃酮，在極性溶劑中，以有機(jī)堿+有機(jī)酸為催化劑，與苯甲醛衍生物通過(guò)aldol condensation反應(yīng)制得，其中吡喃并(7,8)-二氫黃酮與苯甲醛衍生物的質(zhì)量mol比例為3:1-1:3，控制反應(yīng)溫度在室溫-100℃，控制反應(yīng)時(shí)間為1h-72h。
本發(fā)明所述的吡喃并(7,8)-二氫黃酮，其結(jié)構(gòu)式見(II)，
其中：R1、R2、R3與結(jié)構(gòu)(I)中的R1、R2、R3、X基團(tuán)含義相同，R1可為-H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH＝C(CH3)2、-CH＝C(CH3)CH2CH2CH＝C(CH3)2；R2可為-H、-CH3；R3可為-H、-OH；R4可為-H、-OH、-OCH3、-N(CH3)2、-F、-Cl中單基團(tuán)或多基團(tuán)；X可為-CH或-CH2。
本發(fā)明所述的苯甲醛衍生物，結(jié)構(gòu)式見(III)
其中：R5與結(jié)構(gòu)(I)中的R4基團(tuán)含義相同：可為-OH、-OCH3、-N(CH3)2-F、-Cl、-COOH中單基團(tuán)或多基團(tuán)。
本發(fā)明所述的極性溶劑為DMSO、THF、醇類任意一種，所述的醇類為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇任意一種。
本發(fā)明所述的有機(jī)堿為二甲胺、二乙胺、四氫吡咯、哌啶、嗎啉任意一種，優(yōu)選為四氫吡咯。
本發(fā)明所述的有機(jī)酸，為甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、苯甲酸、苯乙酸、苯丙酸，乳酸、琥珀酸、酒石酸，優(yōu)選為冰醋酸。
本發(fā)明反應(yīng)條件溫和，可在醇、THF、DMSO中進(jìn)行，aldol condensation反應(yīng)部位單一，產(chǎn)物易于提純，整個(gè)制備工藝簡(jiǎn)單，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明的原理是：
5,7-二OH二氫黃酮化合物，易于制備5-OH-吡喃并(7,8)-二氫黃酮。本發(fā)明利用天然界含量豐富，提取工藝簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉的橙皮素、柚皮素為原料。通過(guò)制環(huán)，增加3-次甲基-苯基衍生物，增加了環(huán)數(shù)目、并可增加酚OH、-OCH3、胺基，顯著擴(kuò)大了共軛性，脂水分配系數(shù)易于調(diào)節(jié)，得到顏色豐富多彩的E-3-(苯基衍生物-次甲基)-吡喃并二氫黃酮衍生物，在水溶性、醇溶性、抗氧化能增加，在抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、心腦血管保護(hù)等方面作用，較原有的黃酮具有先天優(yōu)勢(shì)，更易制備成合適的制劑，使其具有進(jìn)一步應(yīng)用在食品、藥品、化妝品領(lǐng)域，潛在的臨床應(yīng)用前景及潛在的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
具體實(shí)施方式：下面結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。本發(fā)明實(shí)施例公開了E-3-(苯基衍生物-次甲基)-吡喃并二氫黃酮衍生物的制備的方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例1：E-3-(3,4,5-三OCH3苯次甲基)-8,8-二甲基吡喃并橙皮素的制備：取8,8-二甲基吡喃并橙皮素0.404g，3,4,5-三OCH3苯甲醛0.223g，四氫呋喃5.0mL，吡咯140μL，冰醋酸130μL，70℃密閉反應(yīng)24h?；厥辗磻?yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝3/1為洗脫劑，收集橘黃棕色色帶，回收溶劑，得橙黃色固體412mg(Cpd1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.92(s,1H:5-OH),7.97(s,1H:1”-H),7.10(d,J＝2.1Hz,1H:2'-H),6.90(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H:6'-H),6.78(d,J＝8.3Hz,1H:5'-H),6.57(d,J＝10.1Hz,1H:10-H),6.48(d,3H:3”-H+7”-H+H-2),5.83(s,1H:6-H),5.62(s,1H:3'-OH),5.44(d,J＝10.1Hz,1H:9-H),3.86(s,6H:4'-OCH3+5”-OCH3),3.65(s,6H:6”-OCH3+4”-OCH3),1.39(d,J＝10.2Hz,6H:(8-CH3)2；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ185.01(C-4),162.33(C-6a),159.72(C-5),159.21(C-10aa),153.18(C-4”+C-6”),147.00(C-4'),146.03(C-3'),139.54(C-1”),138.81(C-5”),131.25(C-1'),130.54(C-3),129.37(C-9),125.84(C-2”),119.60(C-6'),115.26(C-10),114.01(C-2'),110.41(C-5'),107.53(C-3”+C-7”),103.27(C-4a),103.01(C-10a),96.89(C-6),78.35(C-8),77.74(C-2),60.97(5”-OCH3),55.94(4”-OCH3+6”-OCH3+4'-OCH3),28.63(8-CH3),28.59(8-CH3)；ES-,1.02e6，[M-H]-555.45(100％),[M]-556.41,[M+H]-557.49；ES+,1.88e6，[M+H]+547.42(100％),[M+H]+548.37,[M+Na]+569.41,[M+Na+H]+570.36,[M+K]+585.33,[M+K+H]+586.32；calcalc.for：C31H30O9，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例2：E-3-(3,4-二OCH3苯次甲基)-8,8-二甲基吡喃并橙皮素的制備：取,8-二甲基吡喃并橙皮素0.368g，3,4-二OCH3苯甲醛0.180g，四氫呋喃5.0mL，吡咯120μL，冰醋酸100μL，70℃密閉反應(yīng)24h?；厥辗磻?yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝3.5/1為洗脫劑，收集橘黃棕色色帶，回收溶劑，得橙黃色382mg(Cpd2)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.97(s,1H:5-OH),7.99(s,1H:1”-H),7.11(d,J＝2.1Hz,1H:2'-H),6.90(dd,J＝8.3,1.8Hz,2H:H-6'+7”-H),6.84(d,J＝8.4Hz,1H:5'-H),6.77(d,J＝8.0Hz,2H:6”-H+3”-H),6.57(d,J＝10.0Hz,1H:10-H),6.49(s,1H:H-2),5.83(s,1H:H-6),5.63(s,1H:3'-OH),5.43(d,J＝10.0Hz,1H:9-H),3.87(d,6H:4'-OCH3+5”-OCH3),3.67(s,3H:4”-OCH3),1.39(d,6H:(8-CH3)2；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ185.25(C-4),162.16(C-7),159.67(C-5),159.18(C-10aa),150.63(C-5”),148.90(C-4”),146.98(C-4'),146.02(C-3'),138.83(C-1”),131.18(C-1'),129.33(C-3),126.86(C-9),125.77(C-2”),124.17(C-6'),119.46(C-7”),115.31(C-10),114.00(C-2'),113.07(C-5'),111.15(C-6”),110.43(C-3”),102.99(C-10a),103.28(C-4a),96.84(C-6),78.28(C-8),77.65(C-2),55.71(4”-OCH3),55.93(5”-OCH3),55.91(4”-OCH3),28.62(8-CH3),28.53(8-CH3)；ES-,5.66e5，[M-H]-515.37(100％),[M]-516.28,[M+H]-517.44,[M+K]-555.45；ES+,2.59e6，[M+H]+517.44(100％),[M+H]+517.15,[M+2H]+518.86,[M+Na]+539.52,[M+Na+H]+540.45,[M+K]+555.26；cal calc.for：C30H28O8，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例3：E-3-(3,4,5-三OCH3苯次甲基)-8,8-二甲基二氫吡喃并橙皮素的制備：
稱取8,8-二甲基二氫吡喃并橙皮素0.154g，三OCH3苯甲醛0.084g，四氫呋喃4.0mL，四氫吡咯40ul，冰醋酸30μL，75℃攪拌反應(yīng)24h，回收反應(yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝3/1為洗脫劑，收集橘黃棕色色帶，回收溶劑，得黃色固體161mg(Cpd3)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.00(s,1H:5-OH),7.96(s,1H:1”-H),7.10(d,J＝1.8Hz,1H:2'-H),6.90(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H:6'-H),6.78(d,J＝8.3Hz,1H:5'-H),6.5(s,2H:3”-H+7”-H),6.46(s,H:2-H),5.82(s,1H:6-H),5.60(s,1H:3'-OH),3.85(6H:4'-OCH3+5”-OCH3),3.65(s,6H:6”-OCH3+4”-OCH3),2.14-2.69(M,2H:10-CH2),1.56-1.79(M,2H:9-CH2),1.29-1.31(s,6Hz,(8-CH3)2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δA環(huán)：163.10(C-6a),97.06(C-6),162.21(C-5),102.19(C-4a),157.57(C-10aa),102.82(C-10a)；B環(huán)：131.45(C-1'),114.03(C-2'),145.96(C-3'),146.88(C-4'),110.37(C-5'),119.61(C-6'),55.94(4'-OCH3),C環(huán)：77.45(C-2),130.99(C-3),184.93(C-4)；D環(huán)：27.01(8-CH3),26.63(8-CH3),76.29(C-8),31.87(C-9),15.67(10-CH2)；E環(huán)：139.44(C-1”),129.50(C-2”),107.49(C-3”+C-7”),153.16(C-4”+C-6”),138.49(C-5”),60.96(5”-OCH3),55.90(4”-OCH3+6”-OCH3)；ES-,1.46e5，[M-H]-547.41(100％),[M]-548.35；ES+,2.20e6，[M+H]+549.4,[M+Na]+571.441(100％),[M+Na+H]+572.36,[M+K]+587.46,[M+K+H]+588.49；cal calc.for：C31H32O9，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例4：E-3-(3,4-二OH苯次甲基)-8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素的制備：稱取8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素0.622g，3，4-二OH苯甲醛0.200g，四氫呋喃5.0mL，四氫吡咯70μL，冰醋酸60μL，60℃攪拌反應(yīng)48h，回收反應(yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝2/1為洗脫劑，收集橘黃棕色色帶，回收溶劑，以10％乙醇加熱洗滌，棄去乙醇液，旋干，得深橘黃色固體418mg(Cpd4)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.85(d,J＝2.5Hz,1H：5-OH),7.84(1H：1"-H),7.06(d,J＝1.7Hz,1H：2'-H),6.85(dd,J＝8.3,1.9Hz,2H:6'-H+3"-H),6.79–6.68(m,3H：5'-H+7”-H+6”-H),6.60(d,J＝10.2Hz,1H：10-H),6.45(s,1H:H-2),5.6-6.2(4H:6-H+3'-OH+4”-OH+5”-OH),5.38(dd,J＝10.2,6.9Hz,1H:9-H),5.05(m,1H:13-H),3.83(s,3H:4-OCH3),2.03(td,J＝15.1,7.6Hz,2H：12-CH2),1.78–1.67(m,2H：11-CH2),1.58(dd,6H：14-(CH3)2),1.36(d,J＝8.3Hz,3H:8-CH3)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δA環(huán)：162.81(C-7),96.82(C-6),159.78(C-5),103.18(C-4a),159.03(C-10aa),102.93(C-10a)；B環(huán)130.93(C-1'),113.93(C-2'),146.24(C-3'),146.93(C-4'),110.60(C-5'),119.50(C-6')；C環(huán)：185.69(C-4),129.08(C-3),80.93(C-2)；D環(huán)：77.23(C-8),27.48(8-CH3),124.77(C-9),115.87(C-10),41.86(C-11),22.65(C-12),123.80(C-13),131.92(C-14),25.66(14-CH3),17.64(14-CH3)；E環(huán)139.11(C-1”),126.76(C-2”),115.65(C-3”),143.61(C-4”),145.72(C-5”),116.99(C-6”),124.53(C-7”)。ES-,1.02e6，[M-H]-555.45(100％),[M]-556.41,[M+H]-557.49；ES+,9.39e5，[M+H]+557.36(100％),[M+Na]+579.34,[M+Na+H]+580.17；cal calc.for：C33H32O8，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例5：E-3-(4-OH苯次甲基)-8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素的制備：稱取8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素0.440g，4-OH苯甲醛0.123g，四氫呋喃5.0mL，四氫吡咯60μL，冰醋酸50μL，60℃攪拌反應(yīng)48h，回收反應(yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝2.5/1為洗脫劑，收集橘黃棕色色帶，回收溶劑，得深橘黃色固體396mg(Cpd 5)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.93(s,1H:5-OH),7.95(s,1H:1”-H),7.17(d,8.4Hz,2H:3”-H+7”-H),7.09(d,1.9Hz,1H:2'-H),6.89(1H:6'-H),6.84-6.74(q,3H:5'-H+6”-H+4”-H),6.60(dd,J＝10.2Hz,7.3Hz,1H:10-H),6.45(s,1H:2-H),5.84(s,1H:6-H),5.37(dd,J＝10.2,1H:9-H),5.05(m,1H:13-H),3.86(s,3H:4'-OCH3),2.02(m,2H:12-CH2),1.76–1.49(m,8H:11-CH2+(14-CH3)2),1.36(d,3H:8-CH3)。13C NMR(101MHz,CDCl3)δ：A環(huán)：162.56(C-6a),96.71(C-6),159.72(C-5),103.20(C-4a),159.08(C-10aa),102.77(C-10a)；B環(huán)：131.06(C-1'),113.91(C-2'),145.96(C-3'),146.95(C-4'),110.47(C-5'),119.41(C-6'),55.89(4”-OCH3),C環(huán)：80.71(C-2),128.84(C-3),185.54(C-4)；D環(huán)：29.72(8-CH3),77.24(C-8),124.67(C-9),115.96(C-10),41.84(C-11),22.58(12-CH2),123.84(C-13),131.88(C-14),25.63(14-CH3),17.65(14-CH3)(D環(huán)及側(cè)鏈?zhǔn)苁中杂绊懀宸至?；E環(huán)：138.83(C-1”),126.21(C-2”),132.42(C-3”+C-7”),116.04(C-4”+C-6”),158.12(C-5”)。ES-,3.75e6，[M-H]-539.44(100％),[M]-540.41,[M]-541.39；ES+,5.24e6，[M+H]+541.47(100％),[M+H]+542.43,[M+Na]+563.33。cal calc.for：C33H32O7，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例6：E-3-(3-OH-4-OCH3苯次甲基)-8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素的制備：稱取CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素0.424g，3-OH-4-OCH3-苯甲醛0.148g，四氫呋喃5.0mL，四氫吡咯60μL，冰醋酸50μL，60℃密閉攪拌反應(yīng)48h，回收反應(yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝2.5/1為洗脫劑，收集橘黃棕色色帶，回收溶劑，得橘黃色固體252mg(Cpd 6)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.93(s,1H:5-OH),7.92(s,1H:1”-H),7.08(s,1H:2'-H),6.87(d,2H:7”-H+6'-H),6.82(2H:3”-H+5'-H),6.77(d,J＝8.4Hz,1H:6”-H),6.60(dd,J＝10.2Hz,7.3Hz,1H:10-H),6.49(s,1H:2-H),5.84(s,1H:6-H),5.60(d,J＝3.4Hz,2H:3'-OH+4”-OH),5.37(dd,J＝10.2,1H:9-H),5.05(d,J＝6.5Hz,1H:13-H),3.90(s,3H:5”-OCH3),3.86(s,3H:4'-OCH3),2.02(dd,J＝19.3,7.9Hz,2H:12-CH2),1.76–1.49(m,8H:11-CH2+(14-CH3)2),1.36(d,J＝6.3Hz,3H:8-CH3)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δA環(huán):162.58(C-6a),96.71(C-6),159.76(C-5),103.23(C-4a),159.11(C-10aa),102.89(C-10a)；B環(huán):131.08(C-1'),113.87(C-2'),145.67(C-3'),146.92(C-4'),110.46(C-5'),119.30(C-6'),55.89(4”-OCH3)；C環(huán):185.43(C-4),129.79(C-3),80.76(C-2)；D環(huán):138.58(C-1”),127.48(C-2”),116.11(C-3”),145.99(C-4”),148.11(C-5”),110.64(C-6”),123.44(C-7”),55.99(5”-OCH3)；E環(huán):77.30(C-8),27.47(8-CH3),124.65(C-9),115.97(C-10),41.85(C-11),22.58(C-12),23.85(C-13),131.86(C-14),25.62(14-CH3),17.64(14-CH3)。ES-,6.27e5，[M-H]-569.46(100％),[M]-570.49,[M+H]-571.33；ES+,2.23e6，[M+H]+571.49(100％),[M+2H]+572.53,[M+Na]+593.46,[M+Na+H]+594.43。cal calc.for：C34H34O8，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例7：E-3-(3,4,5-三OCH3苯次甲基)-8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素的制備：稱取CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素0.268g，3,4,5-三OCH3苯甲醛0.121g，四氫呋喃5.0mL，四氫吡咯50μL，冰醋酸40μL，70℃密閉攪拌回流反應(yīng)48h，回收反應(yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝3/1為洗脫劑，收集橘黃棕色色帶，回收溶劑，得橘黃色固體200mg(Cpd 7)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.92(s,1H:5-OH),7.96(s,1H:1”-H),7.10(d,J＝1.8Hz,1H:2'-H),6.90(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H:6'-H),6.78(d,J＝8.3Hz,1H:5'-H),6.61(d,J＝10.2Hz,1H:10-H),6.48(3H:3”-H+7”-H+H-2),5.81(s,1H:6-H),5.66(s,1H:3'-OH),5.38(d,J＝10.2,1H:9-H),5.05(m,1H:13-H),3.85(6H:4'-OCH3+5”-OCH3),3.65(s,6H:6”-OCH3+4”-OCH3),2.03(m,2H:12-CH2),1.72-1.62(M,8H:11-CH2+8-CH3+14-CH3),1.36(d,3H:14-CH3)。13C NMR
(101MHz,CDCl3)δA環(huán)：162.77(C-6a),159.75(C-5),159.15(C-10aa),107.52(C-4a),103.19(C-10a),96.74(C-6)；B環(huán)：131.28(C-1'),115.90(C-2'),146.03(C-3'),147.00(C-4'),114.04(C-5'),119.61(C-6'),55.95(4'-OCH3)；C環(huán)：80.79(C-2),130.56(C-3),184.94(C-4)；D環(huán)：77.75(C-8),27.19(8-CH3),124.75(C-9),115.90(C-10),41.65(C-11),22.58(C-12),123.80(C-13),131.83(C-14),25.60(14-CH3),17.55(14-CH3)；E環(huán)：139.52(C-1”),129.39(C-2”),110.41(C-3”+C-7”),153.18(C-4”+C-6”),138.74(C-5”),60.97(5”-OCH3),55.95(4”-OCH3+6”-OCH3)。ES-,5.18e5，[M-H]-613.52,[M]-614.45,[M+K]-653.37,[M+H-CH3]-600.61；ES+,5.93e6,[M+H]+615.53,[M+Na]+637.50(100％),[M+Na+H]+638.50,[M+K]+653.47,[M+K+H]+654.43。cal calc.for：C34H34O8，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例8：E-3-(N,N-二CH3苯次甲基)-8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素的制備：稱取CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素0.268g，N,N-二CH3苯甲醛0.121g，四氫呋喃5.0mL，四氫吡咯50μL，冰醋酸40μL，70℃密閉攪拌回流反應(yīng)48h，回收反應(yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝4.5/1為洗脫劑，收集橘紅色色色帶，回收溶劑，得橘紅色固體250mg(Cpd 8)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.19(s,1H:5-OH),7.98(s,1H:1”-H),7.21(d,J＝8.7Hz,2H:3”-H+7”-H),7.13(d,J＝2.1Hz,1H:2'-H),6.94–6.86(m,1H:6'-H),6.75(d,J＝8.4Hz,1H:5'-H),6.62(dd,3H:10-H+4”-H+6”-H),6.54(s,1H:H-2),5.83(s,1H:6-H),5.60(s,1H:3'-OH),5.36(dd,J＝10.1,7.3Hz,1H:9-H),5.06(m,J＝6.9Hz,1H:13-H),3.85(s,3H:4'-OCH3),3.00(s,6H:5”-N(CH3)2),2.14–1.93(m,2H:12-CH2),1.76–1.53(m,8H:11-CH2+8-CH3+14-CH3),1.35(d,J＝7.4Hz,3H:14-CH3)。13C NMR(101MHz,CDCl3)δA環(huán)：162.09(C-6a),96.56(C-6),159.67(C-5),103.25(C-4a),159.11(C-10aa),102.72(C-10a)；B環(huán)：131.43(C-1'),114.03(C-2'),145.92(C-3'),146.83(C-4'),110.36(C-5'),119.40(C-6'),55.89(4”-OCH3)；C環(huán)：80.56(C-2),126.01(C-3),185.43(C-4)；D環(huán)：27.43(8-CH3),77.73(C-8),124.51(C-9),116.13(C-10),41.83(C-11),22.68(12-CH2),123.92(C-13),131.84(C-14),25.69(14-CH3),17.66(14-CH3)(D環(huán)及側(cè)鏈?zhǔn)苁中杂绊?，峰分?；E環(huán)：139.66(C-1”),121.66(C-2”),132.77(C-3”+C-7”),111.80(C-4”+C-6”),151.37(C-5”),40.02(N-CH3)2。ES+,1.55e6,[M+H]+568.50,[M+2H]+569.45,[M+3H]+570.40,[M+Na]+590.46,[M+Na+H]+591.45,[M+Na+2H]+592.41,cal calc.for：C35H37NO6，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例9：E-3-(4-OH苯次甲基)-8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃吡喃并柚皮素的制備：稱取8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素0.311g，4-OH苯甲醛0.094g，四氫呋喃5.0mL，四氫吡咯45μL，冰醋酸40μL，70℃密閉攪拌回流反應(yīng)48h，回收反應(yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝2.5/1為洗脫劑，收集橘黃色色帶，回收溶劑，得橘黃色固體288mg(Cpd 9)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.91(1H:5-OH),7.95(s,1H:1”-H),7.30(t,J＝7.7Hz,2H:3”-H+7”-H),7.15(t,J＝7.7Hz,2H:2'-H+6'-H),6.79(dd,J＝7.77,2.2Hz,4H:3'-H+5'-H+4”-H+6”-H),6.60(d,J＝10.2Hz,1H:10-H),6.47(s,1H:H-2),5.83(s,1H:6-H),5.38(dd,J＝10.2Hz,1H:9-H),5.04(m,1H:13-H)),2.03(td,J＝15.5,8.0Hz,2H:12-CH2),1.77–1.52(m,8H:11-CH2+8-CH3+14-CH3),1.36(3H:14-CH3)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δA環(huán)：162.96(C-6a),96.81(C-6),159.83(C-5),103.22(C-4a),159.02(C-10aa),102.98(C-10a)；B環(huán)：129.81(C-1'),129.04(C-2'+C-6'),116.03(C-3'+C-5'),157.65(C-4')；C環(huán)：81.05(C-2),129.07(C-3),185.81(C-4)；D環(huán)：27.47(8-CH3),77.24(C-8),124.86(C-9),115.72(C-10),41.85(C-11),22.58(12-CH2),123.77(C-13),131.94(C-14),25.66(14-CH3),17.64(14-CH3)(D環(huán)及側(cè)鏈?zhǔn)苁中杂绊懀宸至?；E環(huán)：138.89(C-1”),126.45(C-2”),132.45(C-3”+C-7”),115.83(C-4”+C-6”),156.12(C-5”)；ES-,2.21e6，[M-H]-509.40(100％),[M]-510.37,[M+H]-511.37；ES+,2.62e6,[M+H]+511.42(100％),[M+2H]+512.34.cal calc.for：C32H30O6，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例10：E-3-(3,4-二OH苯次甲基)-8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并柚皮素的制備：稱取8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素0.326g，3,4-二OH苯甲醛0.110g，四氫呋喃5.0mL，四氫吡咯50μL，冰醋酸45μL，70℃密閉攪拌回流反應(yīng)48h，回收反應(yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝2/1為洗脫劑，收集橙紅色色帶，回收溶劑，得橙紅色固體246mg(Cpd 10)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.86(d,J＝1.8Hz,1H:5-OH),7.87(s,1H:1”-H),7.26(d,J＝6.8Hz,2H:2'-H+6'-H),6.82(d,J＝8.0Hz,1H:3”-H),6.74(d,J＝9.1Hz,4H:3'-H+5'-H+3”-H+6”-H),6.61(d,J＝10.1Hz,1H:10-H),6.49(s,1H:H-2),5.86(s,1H:6-H),5.41(dd,J＝10.1,6.6Hz,1H:9-H),5.12–5.00(m,1H:13-H),2.05(dd,J＝17.3,8.4Hz,2H:12-CH2),1.82–1.55(m,8H:11-CH2+8-CH3+14-CH3),1.38(d,J＝12.9Hz,3H:14-CH3).13C NMR(101MHz,CDCl3)δA環(huán)：162.33(C-6a),96.97(C-6),159.71(C-5),103.30(C-4a),159.09(C-10aa),103.03(C-10a)；B環(huán)：130.91(C-1'),129.00(C-2'+C-6'),115.99(C-3'+C-5'),157.59(C-4')；C環(huán)：81.02(C-2),125.88(C-3),185.74(C-4)；D環(huán)：28.54(8-CH3),78.41(C-8),126.47(C-9),115.78(C-10),41.64(C-11),22.65(12-CH2),123.47(C-13),132.42(C-14),25.68(14-CH3),17.58(14-CH3)(D環(huán)及側(cè)鏈?zhǔn)苁中杂绊?，峰分?；E環(huán)：138.95(C-1”),119.46(C-2”),145.83(C-4”),110.58(C-3”),146.97(C-5”),113.87(C-6”),115.25(C-7”)。ES-,4.72e6，[M-H]-525.41(100％),[M]-526.40,[M+H]-527.32；ES+,3.00e6，[M+H]+527.41(100％),[M+H]+528.40,[M+2H]+528.86,[M+Na]+549.43。cal calc.for：C32H30O7，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例11：
E-3-(3-OH-4-OCH3-苯次甲基)-8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并柚皮素的制備：稱取CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并橙皮素0.322g，3-OH-4-OCH3苯甲醛0.120g，無(wú)水乙醇5.0mL，四氫吡咯50μL，冰醋酸45μL，70℃密閉攪拌反應(yīng)48h，回收反應(yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝2.5/1為洗脫劑，收集橙黃色色帶，回收溶劑，得橘黃色固體298mg(Cpd11)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.95(s,1H:5-OH),7.95(s,1H:1”-H),7.33(t,J＝7.1Hz,2H:H+3”-H+7”-H),6.89-6.78(m,5H:6”-H+6'-H+2'-H+3'-H+5'-H),6.63(d,J＝10.2Hz,1H:10-H),6.54(s,1H:H-2),5.85(s,1H:6-H),5.47–5.37(m,1H:9-H),5.13–5.00(m,1H:13-H),3.93(s,3H:5”-OCH3),2.06(m,2H:12-CH2),1.81–1.56(m,8H:11-CH2+8-CH3+14-CH3),1.38(d,3H:14-CH3)。13C NMR(101MHz,CDCl3)δA環(huán)：162.76(C-6a),96.72(C-6),159.83(C-5),103.26(C-4a),159.02(C-10aa),102.81(C-10a)；B環(huán)：129.90(C-1'),129.05(C-2'+C-6'),115.77(C-3'+C-5'),156.14(C-4')；C環(huán)：80.91(C-2),128.85(C-3),185.65(C-4)；D環(huán)：27.45(8-CH3),77.24(C-8),124.73(C-9),115.89(C-10),41.85(C-11),22.58(12-CH2),123.80(C-13),131.90(C-14),25.63(14-CH3),17.64(14-CH3)(D環(huán)及側(cè)鏈?zhǔn)苁中杂绊?，峰分?；E環(huán)：138.74(C-1”),127.39(C-2”),116.08(C-3”),145.64(C-4”),148.20(C-5”),110.68(C-6”),123.58(C-7”)；ES-,7.06e5，[M-H]-539.23(100％),[M]-540.06；ES+,2.05e6，[M+H]+541.39(100％),[M+H]+542.43,[M+2H]+528.86,[M+Na]+563.36,[M+Na+H]+563.36。cal calc.for：C32H30O7，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例12：
E-3-(4-(N,N-二甲基)-苯次甲基)-8-CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并柚皮素的制備：稱取CH3-8-(4-CH3-戊-3-烯)-吡喃并柚皮素0.355g，對(duì)二甲胺基苯甲醛0.133g，無(wú)水乙醇5.0mL，四氫吡咯45μL，冰醋酸40μL，70℃密閉攪拌反應(yīng)48h，回收反應(yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝2.5/1為洗脫劑，收集橘紅色色帶，回收溶劑，得紅棕色色固體342mg(Cpd12)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.17(s,1H:5-OH),7.98(s,1H:1”-H),7.32(d,J＝7.8Hz,2H:3”-H+7”-H),7.19(d,J＝8.7Hz,2H:2'-H+6'-H),6.75(d,J＝8.1Hz,2H:3'-H+5'-H),6.60(m,3H:4”-H+6”-H+10-H),6.57(s,1H:H-2),5.83(s,1H:6-H),5.36(m,1H:9-H),5.05(d,J＝6.0Hz,1H:13-H),2.98(d,J＝11.8Hz,6H:5”-N(CH3)2,2.04(dt,J＝19.7,7.8Hz,2H:12-CH2),1.76–1.52(m,8H:11-CH2+8-CH3+14-CH3),1.35(d,J＝9.9Hz,3H:14-CH3)。13C NMR(101MHz,CDCl3)δA環(huán)：162.29(C-6a),96.50(C-6),159.06(C-5),103.25(C-4a),159.77(C-10aa),102.88(C-10a)；B環(huán)：129.99(C-1'),129.12(C-2'+C-6'),115.66(C-3'+C-5'),156.29(C-4')；C環(huán)：80.71(C-2),128.94(C-3),185.64(C-4)；D環(huán)：27.41(8-CH3),80.71(C-8),124.57(C-9),116.06(C-10),41.84(C-11),22.60(12-CH2),123.88(C-13),131.86(C-14),25.64(14-CH3),17.64(14-CH3)(D環(huán)及側(cè)鏈?zhǔn)苁中杂绊?，峰分?；E環(huán)：139.85(C-1”),126.05(C-2”),132.83(C-3”+C-7”),111.83(C-4”+C-6”),151.44(C-5”),40.01(N-CH3)2。ES+,1.02e6，[M+H]+538.50,[M+H]+539.62。cal calc.for：C34H35NO5，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例13：
E-3-(3,4-二OH苯次甲基)-8,8-二甲基吡喃并柚皮素的制備：取8,8-二甲基吡喃并柚皮素0.325g，3,4-二OH苯甲醛0.132g，四氫呋喃5.0mL，吡咯60ul，冰醋酸55ul，70℃密閉反應(yīng)48h?；厥辗磻?yīng)液至體積1/2，硅膠拌樣，以石油醚-乙酸乙酯＝2/1為洗脫劑，收集橘黃棕色色帶，回收溶劑，得橙紅色固體251mg(Cpd13)。ES-,1.73e6，[M-H]-457.35(100％),[M]-458.34,[M+H]-459.25；ES+,2.54e6，[M+H]+459.40(100％),[M+2H]+460.33,[M+Na]+481.35,[M+Na+H]+482.18,cal calc.for：C27H22O7，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例14
目的：測(cè)定其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物后溶解度的變化，以橙皮素、柚皮素的脫氫修飾產(chǎn)物為對(duì)照，根據(jù)藥典對(duì)極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、難溶的規(guī)定。取供實(shí)驗(yàn)化合物10mg，用移液槍或移液管加入不同溶劑，密閉超聲20s，密閉放置1h后觀察溶解現(xiàn)象，如果不溶，繼續(xù)增加溶劑體積用量，重復(fù)上述操作記錄溶液體積用量。根據(jù)藥典規(guī)定，判斷化合物溶解性能，見表1，
表1香葉木素、芹菜素及橙皮素、柚皮素結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物在不同溶劑中溶解度對(duì)照
表1表明吡喃環(huán)并橙皮素、吡喃環(huán)并柚皮素經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)3-次甲基苯衍生物的結(jié)構(gòu)修飾，新引入的E環(huán)，含有極性基團(tuán)，如羥基、胺基，甲氧基等，增大了同溶劑的作用力；此外，因空間位阻作用，B、E環(huán)發(fā)生發(fā)生扭曲，共平面變差，顯著增加了溶解性，溶解性能優(yōu)良。比橙皮素、柚皮素、香葉木素、芹菜素等黃酮類化合物，溶解度好很多。
實(shí)施例15
目的：初步評(píng)價(jià)結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物對(duì)抗氧化能力的影響：采用DPPH法，以橙皮素作為對(duì)照，進(jìn)行說(shuō)明。
對(duì)DPPH·清除試驗(yàn)：DPPH·是一種穩(wěn)定的自由基，其醇溶液呈深紫色，在517nm處有一吸收峰。反應(yīng)系統(tǒng)中的自由基清除劑可以和DPPH的單電子配對(duì)而使A517nm降低，因此，根據(jù)A517nm的變化來(lái)檢測(cè)自由基的清除情況，評(píng)價(jià)樣品的抗氧化能力。橙皮素設(shè)置6個(gè)梯度的濃度，為5、10、15、20、25、30、60μg/mL的樣品85％乙醇溶液，取2.0mL樣品，加人1.0mL，DPPH甲醇溶液(3.0×10-4mol/L)，混合30min后在520nm處測(cè)定各樣品吸光值(Ai)，每份樣品平行操作3次，最后取其平均值。DPPH·自由基清除率K按公式計(jì)算：K(％)＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100式中：Ac為2.0mL50％乙醇加入1.0mL DPPH甲醇溶液(3.0×10-4mol/L)混合后的吸光度，Aj為2.0mL樣品加入1.0mL，甲醇混合后的吸光度，結(jié)果見表2：
表2橙皮素及其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物的抗DPPH·的能力
清除DPPH·自由基的劑量主要和供電子有關(guān)，增加雙鍵，對(duì)抗氧化能力略有增加，增加能夠和羰基共軛的羥基，胺基，可以顯著提升抗氧化能力。橙皮素分子中含有3個(gè)酚羥基，其中兩個(gè)形成分子內(nèi)氫鍵，4-OH中O的孤對(duì)電子向羰基轉(zhuǎn)移，電子云密度顯著降低，而其結(jié)構(gòu)改造產(chǎn)物cpd4比橙皮素多了3個(gè)雙鍵，一個(gè)鄰二酚羥基，其抗氧化能力顯著飆升。同理，cp8也比hespertin抗氧化能力好很多。可以代替后者，可作為食品、藥品、化妝品中抗氧劑。
實(shí)施例16
目的：初步評(píng)價(jià)結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物對(duì)抗炎化能力的影響：采用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)法，以橙皮素及其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物為例說(shuō)明。
二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹：取昆明種小鼠132只,按體重隨機(jī)分為22組,每組6只,雌雄各半,即模型組(灌服0.5％CMC液0.4mL/20g)，陽(yáng)性藥組(萘普生45mg/kg)，橙皮素、cpd1-8化合物各為兩組(分別灌服0.6％及0.3％藥品)。以上各組小鼠每日給藥1次/d,連續(xù)5d,于末次給藥后30min,于小鼠右耳前后兩面均勻涂抹二甲苯50μL,右耳作對(duì)照,致炎后30min脫頸椎處死小鼠,以7mm直徑打孔器取下耳緣左、右片,分別用電子天平稱重,以左、右耳片重量差表示腫脹度,并計(jì)算抑制率(％)＝(模型組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/模型組平均腫脹度×100％。進(jìn)行組間顯著差比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3：
表3橙皮素及其衍生物對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的影響
與陰性組比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。