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一種聯(lián)產(chǎn)丙酮酸和α?酮戊二酸的重組光滑球擬酵母的制作方法

文檔序號:11144783閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種聯(lián)產(chǎn)丙酮酸和α-酮戊二酸的重組菌,其特征在于,所述重組菌是以光滑球擬酵母為宿主,以pY26-TEF-GPD為載體,過表達丙酮酸激酶CDC19基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌,其特征在于,所述CDC19基因是NCBI上Gene ID為851193的CDC19基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌,其特征在于,所述重組菌是以缺失了URA3基因的光滑球擬酵母T.glabrata CCTCC M202019為宿主,表達NCBI上Gene ID:851193的CDC19。

4.權(quán)利要求3所述重組菌的構(gòu)建方法,其特征在于,是以缺失了URA3基因的光滑球擬酵母T.glabrata CCTCC M202019為宿主,以pY26-TEF-GPD為載體,表達NCBI上Gene ID為851193的CDC19基因。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述重組菌按如下方法構(gòu)建:

(1)將目的片段CDC19經(jīng)過限制性內(nèi)切酶Not I和Pac I雙酶切消化后,定向克隆到表達質(zhì)粒pY26-TEF-GPD中,得到重組酵母表達質(zhì)粒pY26-CDC19;

(2)將重組質(zhì)粒pY26-CDC19電轉(zhuǎn)化至受體菌T.glabrata CCTCC M202019,在不含尿嘧啶的培養(yǎng)基中進行篩選,得到重組菌。

6.一種聯(lián)產(chǎn)丙酮酸和α-酮戊二酸的方法,其特征在于,是將權(quán)利要求1-3任一所述的重組菌應(yīng)用于丙酮酸和α-酮戊二酸的生產(chǎn)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,將權(quán)利要求1-3任一所述的重組菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基,在30℃,200~220rpm條件下進行發(fā)酵培養(yǎng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,所述發(fā)酵培養(yǎng)基每L中含有:葡萄糖50-120g,尿素0-5g,MgSO4.7H2O 0-1g,KH2PO4 0-5g,CH3COONa 0-5g,微量元素液10ml,維生素液10ml,初始pH=5.5;所述微量元素液每L含有MnCl2·4H2O 0-12g,F(xiàn)eSO4·7H2O 0-2g,CaCl2·2H2O 0-2g,CuSO4·5H2O 0-0.1g,ZnCl2 0-1g;所述維生素液每L含有:生物素0-0.01g,硫胺素0-2mg,吡哆醇0-0.2g,煙酸0-2g。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,所述接種的接種量按體積比為5-10%。

10.權(quán)利要求6-9任一所述方法在日化、食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)領(lǐng)域生產(chǎn)含丙酮酸和/或α-酮戊二酸的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

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