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一種霍亂弧菌環介導等溫擴增試劑盒及其應用的制作方法

文檔序號:11145803閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種霍亂弧菌環介導等溫擴增試劑盒,其特征在于,該試劑盒包括LAMP引物、2×反應緩沖液、Bst DNA聚合酶、熒光目視檢測試劑、超純水和霍亂弧菌DNA模板;所述的LAMP引物包括外引物F3與B3和內引物是FIP與BIP;其中以外引物F3和B3作為PCR診斷引物;

其中引物的序列分別為:

F3 CTGAAACCTTTGTTGCCGC

B3 GCCCATAGAAAGAGTCGCTG

FIP GGCAGGATGGTAACCCCTGAGTAAAGATCCAGGCCAAGTTCG

BIP TTACCGATGAAGAAGTCGCCGCTTGGCTTCAACCACTTCAGT;

所述的2×反應緩沖液包括Tris-HCL、KCL、MgSO4、(NH4)2SO4、Tween20、Betaine和dNTPs。

2.根據權利要求1所述的霍亂弧菌環介導等溫擴增試劑盒,其特征在于,所述的霍亂弧菌DNA模板取自細菌基因組DNA提取試劑盒。

3.根據權利要求1所述的霍亂弧菌環介導等溫擴增試劑盒,其特征在于,所述的熒光目視檢測試劑采用鈣黃綠素熒光試劑,熒光試劑在反應前加入。

4.根據權利要求1所述的霍亂弧菌環介導等溫擴增試劑盒,其特征在于,所述的2×反應緩沖液包括Tris-HCL 35-55mM、KCL 18-32mM、MgSO4 15-25mM、(NH4)2SO4 22-28mM、Tween20 0.3-0.6℅、Betaine 1.5-3 M 和dNTPs3-4.5mM。

5.一種霍亂弧菌環介導等溫擴增試劑盒的應用,其特征在于,具體操作步驟包括:

(1)LAMP引物的設計與合成

(2)霍亂弧菌DNA模板的提取

(3)LAMP反應體系建立

(4)LAMP檢測方法。

6.根據權利要求5所述的霍亂弧菌環介導等溫擴增試劑盒的應用,其特征在于,所述的LAMP反應體系建立LAMP反應體系以25μL計,

2×反應緩沖液 12.5 μL

Bst DNA聚合酶 1 μL

FIP 40 pmol

BIP 40 pmol

F3 5 pmol

B3 5 pmol

霍亂弧菌DNA 2 μL

超純水 補足25 μL。

7.根據權利要求5所述的霍亂弧菌環介導等溫擴增試劑盒的應用,其特征在于,所述的LAMP檢測方法是采用特異性檢測、敏感性檢測和熒光可視化檢測的方法。

8.根據權利要求5所述的霍亂弧菌環介導等溫擴增試劑盒的應用,其特征在于,所述的LAMP檢測方法采用實時濁度儀進行密閉全程監控。

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