技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種膠狀溶桿菌OH17遺傳操作系統(tǒng)的構(gòu)建方法；該系統(tǒng)從膠狀溶桿菌OH17菌株中提取基因組，PCR擴(kuò)增目的基因上下游片段，連接到自殺性質(zhì)粒上，構(gòu)建用于基因敲除的重組載體；重組載體通過電擊轉(zhuǎn)化的方式進(jìn)入OH17感受態(tài)細(xì)胞中，發(fā)生同源雙交換，獲得基因敲除突變株；通過PCR擴(kuò)增一段包含基因及其自身啟動(dòng)子的片段，連接到相應(yīng)的質(zhì)粒后，獲得回補(bǔ)菌株重組載體，將回補(bǔ)菌株重組載體通過電轉(zhuǎn)導(dǎo)入相應(yīng)基因敲除突變體感受態(tài)細(xì)胞中，篩選得到回補(bǔ)菌株；本發(fā)明構(gòu)建了OH17的遺傳操作系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了OH17的基因敲除以及互補(bǔ)，為該菌株的分子操作和基因功能研究提供基本保障。

技術(shù)研發(fā)人員：徐會(huì)永;劉鳳權(quán);趙楊揚(yáng);劉琳琳;錢國(guó)良;趙延存
受保護(hù)的技術(shù)使用者：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
文檔號(hào)碼：201611128010
技術(shù)研發(fā)日：2016.12.09
技術(shù)公布日：2017.05.31