本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)提取
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種方格星蟲(chóng)中蛋白質(zhì)的提取方法。
背景技術(shù)：
：方格星蟲(chóng)，又稱為光裸星蟲(chóng)，俗稱″沙蟲(chóng)″。它的形狀很像一根腸子，呈長(zhǎng)筒形，體長(zhǎng)約10～20厘米，且渾身光裸無(wú)毛，體壁縱肌成束，每環(huán)肌交錯(cuò)排列，形成方塊格子狀花紋，方格星蟲(chóng)雖然沒(méi)有海參、魚(yú)翅、鮑魚(yú)的名貴，但味道鮮美脆嫩，為海參、魚(yú)翅所不及。生長(zhǎng)在沿海灘涂，因?yàn)閷?duì)生長(zhǎng)環(huán)境的質(zhì)量十分敏感，一旦污染則不能成活，因而有″環(huán)境標(biāo)志生物″之稱。目前的海產(chǎn)品中蛋白質(zhì)的提取方法一般采用水溶液提取法和有機(jī)溶劑提取法，水提法蛋白提取率低，有機(jī)溶劑提取法容易溶劑殘留，方格星蟲(chóng)含有豐富的蛋白質(zhì)，而目前沒(méi)有涉及一種方格星蟲(chóng)中蛋白質(zhì)的提取方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的提供一種簡(jiǎn)單方便、提取率高、提取蛋白純度高的方格星蟲(chóng)中蛋白質(zhì)的提取方法。本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：一種方格星蟲(chóng)中蛋白質(zhì)的提取方法，所述提取方法包括以下步驟：步驟一、將方格星蟲(chóng)中的沙子清洗干凈，采用按重量比1∶1加入水，采用高速攪拌機(jī)攪碎成蟲(chóng)漿；步驟二、將蟲(chóng)漿置于超聲波中1-2小時(shí)后，再放置到電磁場(chǎng)中20-30分鐘；步驟三、按重量比100∶1往蟲(chóng)漿中加入蛋白酶，置于高壓反應(yīng)釜中，加入醋酸將PH調(diào)節(jié)至3-5，溫度為50-60℃，攪拌3-6小時(shí)后，再放置在水浴中溫度為100-120℃滅酶，得到酶解蟲(chóng)漿，離心提取上清液，將上清液冷凍干燥即得所述蛋白質(zhì)。優(yōu)選的是，步驟一中在進(jìn)行高速攪拌前還包括將方格星蟲(chóng)采用濃度為80％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氯化鈉溶液浸泡1-2小時(shí)后，采用清水漂洗2-3次。優(yōu)選的是，步驟三中所述蛋白酶為胰蛋白酶和木瓜蛋白酶按體積比1∶1混合，所述蛋白酶的添加量為2000-6000U/g。優(yōu)選的是，步驟三中高壓反應(yīng)釜的壓力為1-2Mpa，攪拌速度為100rmp/min。優(yōu)選的是，步驟二中超聲波的工作頻率為300-500赫茲，電磁場(chǎng)的感應(yīng)強(qiáng)度為3000-4000Gs。優(yōu)選的是，步驟三中上清液冷凍干燥前經(jīng)過(guò)離子交換柱2-3次。優(yōu)選的是，在步驟二前還包括往蟲(chóng)漿加入體積比為1∶1乙酸乙酯進(jìn)行脫脂，通過(guò)減壓濃縮脫脂，同時(shí)回收乙酸乙酯。本發(fā)明的有益效果如下：本發(fā)明將蟲(chóng)漿經(jīng)過(guò)超聲波和電磁場(chǎng)后，將蟲(chóng)漿的細(xì)胞破碎利于方格星蟲(chóng)中蛋白質(zhì)的酶解，再通過(guò)高壓酶解提取，胰蛋白酶和木瓜蛋白酶復(fù)配使用，顯著提高方格星蟲(chóng)中蛋白質(zhì)的提取率，優(yōu)選的在提取前采用高濃度鹽水對(duì)方格星蟲(chóng)進(jìn)行處理，使得細(xì)胞處理脫水狀態(tài)，在打蟲(chóng)漿的時(shí)候容易破碎，提高蛋白質(zhì)的酶解率，酶解前還進(jìn)行脫脂處理和離心后經(jīng)過(guò)離子交換處理，能顯著提高蛋白質(zhì)的純度。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書(shū)文字能夠據(jù)以實(shí)施。實(shí)施例1本實(shí)施例方格星蟲(chóng)中蛋白質(zhì)的提取方法包括以下步驟：步驟一、將方格星蟲(chóng)中的沙子清洗干凈，采用按重量比1∶1加入水，采用高速攪拌機(jī)攪碎成蟲(chóng)漿；步驟二、將蟲(chóng)漿置于超聲波中1小時(shí)后，再放置到電磁場(chǎng)中20分鐘；步驟三、按重量比100∶1往蟲(chóng)漿中加入蛋白酶，置于高壓反應(yīng)釜中，加入醋酸將PH調(diào)節(jié)至3-5，溫度為50℃，攪拌3小時(shí)后，再放置在水浴中采用水浴鍋進(jìn)行水浴加熱溫度為100℃滅酶，得到酶解蟲(chóng)漿，離心提取上清液，將上清液冷凍干燥即得所述蛋白質(zhì)。實(shí)施例2本實(shí)施例方格星蟲(chóng)中蛋白質(zhì)的提取方法包括以下步驟：步驟一、將方格星蟲(chóng)中的沙子清洗干凈，將方格星蟲(chóng)采用濃度為80％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氯化鈉溶液浸泡2小時(shí)后，采用清水漂洗3次，采用按重量比1∶1加入水，采用高速攪拌機(jī)攪碎成蟲(chóng)漿；步驟二、將蟲(chóng)漿置于超聲波中2小時(shí)后，再放置到電磁場(chǎng)中30分鐘；步驟三、按重量比100∶1往蟲(chóng)漿中加入蛋白酶，置于高壓反應(yīng)釜中，高壓反應(yīng)釜的壓力為1Mpa，攪拌速度為100rmp/min，加入醋酸將PH調(diào)節(jié)至3-5，溫度為60℃，攪拌6小時(shí)后，再放置在水浴中溫度為120℃滅酶，得到酶解蟲(chóng)漿，離心提取上清液，將上清液冷凍干燥即得所述蛋白質(zhì)，所述蛋白酶為胰蛋白酶和木瓜蛋白酶按體積比1∶1混合，所述蛋白酶的添加量為2000U/g。其中，步驟二中超聲波的工作頻率為300赫茲，電磁場(chǎng)的感應(yīng)強(qiáng)度為3000Gs。其中，步驟三中上清液冷凍干燥前經(jīng)過(guò)離子交換柱2次。其中，在步驟二前還包括往蟲(chóng)漿加入體積比為1∶1乙酸乙酯進(jìn)行脫脂，通過(guò)減壓濃縮脫脂，同時(shí)回收乙酸乙酯。實(shí)施例3本實(shí)施例方格星蟲(chóng)中蛋白質(zhì)的提取方法包括以下步驟：步驟一、將方格星蟲(chóng)中的沙子清洗干凈，采用按重量比1∶1加入水，采用高速攪拌機(jī)攪碎成蟲(chóng)漿；步驟二、將蟲(chóng)漿置于超聲波中2小時(shí)后，再放置到電磁場(chǎng)中30分鐘；步驟三、按重量比100∶1往蟲(chóng)漿中加入蛋白酶，置于高壓反應(yīng)釜中，加入醋酸將PH調(diào)節(jié)至3-5，溫度為60℃，攪拌6小時(shí)后，再放置在水浴中溫度為120℃滅酶，得到酶解蟲(chóng)漿，離心提取上清液，將上清液冷凍干燥即得所述蛋白質(zhì)。其中，步驟一中在進(jìn)行高速攪拌前還包括將方格星蟲(chóng)采用濃度為80％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氯化鈉溶液浸泡2小時(shí)后，采用清水漂洗3次。其中，步驟三中所述蛋白酶為胰蛋白酶和木瓜蛋白酶按體積比1∶1混合，所述蛋白酶的添加量為6000U/g。其中，步驟三中高壓反應(yīng)釜的壓力為2Mpa，攪拌速度為100rmp/min。其中，步驟二中超聲波的工作頻率為500赫茲，電磁場(chǎng)的感應(yīng)強(qiáng)度為4000Gs。其中，步驟三中上清液冷凍干燥前經(jīng)過(guò)離子交換柱3次。其中，在步驟二前還包括往蟲(chóng)漿加入體積比為1∶1乙酸乙酯進(jìn)行脫脂，通過(guò)減壓濃縮脫脂，同時(shí)回收乙酸乙酯。對(duì)比例1與實(shí)施例1相同，缺少步驟二。對(duì)比例2與實(shí)施例2相同，缺少將方格星蟲(chóng)采用濃度為80％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氯化鈉溶液浸泡2小時(shí)后，采用清水漂洗3次這個(gè)步驟。對(duì)比例3與實(shí)施例2相同，缺少了步驟三中上清液冷凍干燥前經(jīng)過(guò)離子交換柱2次和在步驟二前往蟲(chóng)漿加入體積比為1∶1乙酸乙酯進(jìn)行脫脂，通過(guò)減壓濃縮脫脂，同時(shí)回收乙酸乙酯。采用紫外吸收法測(cè)試蛋白質(zhì)含量，稱量沙蟲(chóng)去沙后重量M，再稱量實(shí)施例1-3和對(duì)比例1-3得到產(chǎn)品重量M1，再測(cè)試實(shí)施例1-3和對(duì)比例1-3得到產(chǎn)品中的蛋白含量M2，計(jì)算蛋白質(zhì)提取率＝M1/M*100％和蛋白質(zhì)純度＝M2/M1*100％，結(jié)果如下表：實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3對(duì)比例1對(duì)比例2對(duì)比例3提取率(％)8.210.29.85.856.47.2純度(％)78.286.988.270.271.169.5由此看出本發(fā)明的蛋白質(zhì)提取率和純度顯著增高。盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開(kāi)如上，但其并不僅僅限于說(shuō)明書(shū)和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的實(shí)施例。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3