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檢測人FGFR3基因突變的引物組及其試劑盒的制作方法

文檔序號:11126311閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.檢測人FGFR3基因突變的引物組,該引物組包括12對特異性擴增FGFR3基因第2至第7外顯子以及第9至第19外顯子的引物;

所述的FGFR3基因外顯子2的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物FP1與核苷酸序如SEQ ID NO.2所示的引物RP1;

所述的FGFR3基因外顯子3的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的引物FP2與核苷酸序如SEQ ID NO.4所示的引物RP2;

所述的FGFR3基因外顯子4的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的引物FP3與核苷酸序如SEQ ID NO.6所示的引物RP3;

所述的FGFR3基因外顯子5與外顯子6的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的引物FP4與核苷酸序如SEQ ID NO.8所示的引物RP4;

所述的FGFR3基因外顯子7的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的引物FP5與核苷酸序如SEQ ID NO.10所示的引物RP5;

所述的FGFR3基因外顯子9的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的引物FP6與核苷酸序如SEQ ID NO.12所示的引物RP6;

所述的FGFR3基因外顯子10的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的引物FP7與核苷酸序如SEQ ID NO.14所示的引物RP7;

所述的FGFR3基因外顯子11的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的引物FP8與核苷酸序如SEQ ID NO.16所示的引物RP8;

所述的FGFR3基因外顯子12與外顯子13的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的引物FP9與核苷酸序如SEQ ID NO.18所示的引物RP9;

所述的FGFR3基因外顯子14與外顯子15的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示的引物FP10與核苷酸序如SEQ ID NO.20所示的引物RP10;

所述的FGFR3基因外顯子16與外顯子17的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示的引物FP11與核苷酸序如SEQ ID NO.22所示的引物RP11;

所述的FGFR3基因外顯子18與外顯子19的PCR擴增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示的引物FP12與核苷酸序如SEQ ID NO.24所示的引物RP12。

2.一種用于檢測FGFR3基因突變的測序引物組,該引物組包括12條第2至第7外顯子以及第9至第19外顯子的測序引物;包括:

外顯子2的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.1的引物FP1;

外顯子3的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.3的引物FP2;

外顯子4的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.5的引物FP3;

外顯子5與外顯子6的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.7的引物FP4;

外顯子7的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.9的引物FP5;

外顯子9的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.11的引物FP6;

外顯子10的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.14的引物RP7;

外顯子11的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.15的引物FP8;

外顯子12與外顯子13的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.17的引物FP9;

外顯子14與外顯子15的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.19的引物FP10;

外顯子16與外顯子17的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.21的引物FP11;

外顯子18與外顯子19的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.24的引物RP14。

3.一種用于檢測FGFR3基因突變的試劑盒,其特征在于,包括:

權利要求1所述用于檢測FGFR3基因突變的由第2至第7外顯子以及第9至第19外顯子的PCR擴增引物組成的引物組;

PCR擴增試劑;

PCR產物純化試劑;

含有權利要求2所述用于檢測FGFR3基因突變的測序引物組的DNA測序試劑。

4.如權利要求3所述的試劑盒,其特征在于,所述PCR擴增試劑包括:2.5mM dNTP,含Mg2+的10×PCR緩沖液,5U/μl Taq DNA聚合酶,去RNase與DNase水;

所述PCR擴增體系中各組分的工作濃度為:200μM dNTP,1×PCR緩沖液,0.025U/μl Taq DNA聚合酶,上游引物和下游引物均為0.4μM,模板濃度為2.5~5ng/μl。

5.如權利要求3所述的試劑盒,其特征在于,所述PCR產物純化試劑包括:1U/μl SAP酶、10U/μl ExoI酶、去RNase與DNase水;

PCR產物純化體系中各組分的工作濃度為:0.05U/μl SAP酶、0.5U/μlExoI酶。

6.如權利要求3所述的試劑盒,其特征在于,所述DNA測序試劑包括:權利要求2所述用于檢測FGFR3基因突變的測序引物組、BigDye 3.1混合液、0.125M EDTA溶液、無水乙醇、體積百分比75%乙醇溶液、Hi-Di甲酰胺溶液、去RNase與DNase水。

7.如權利要求6所述的試劑盒,其特征在于,所述測序引物組中的測序引物工作濃度為0.64pMol/L。

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