本發明涉及胰島素類似物(或人胰島素前體)晶體的制備方法，尤其涉及一種B30位蘇氨酸缺失人胰島素(desB30)晶體的制備方法，屬于重組人胰島素及其類似物晶體的制備領域。
背景技術：
：近年來隨著人們生活水平的提升，糖尿病患者數量也持續增加。目前，糖尿病已成為繼心腦血管疾病、惡性腫瘤后的第三大威脅人類健康的慢性非傳染性疾病。中國糖尿病患病人數已突破一億，并取代印度成為世界第一，世界衛生組織(WHO)預測至2025年全球糖尿病人數將突破3.0億。胰島素制品是公認的最有效的糖尿病治療手段之一。隨著科學技術的發展，從提取動物胰島素到有機合成胰島素、半合成人胰島素，到現如今占主要市場的重組人胰島素，胰島素的工業化生產過程已經歷了翻天覆地的變化。去除B30位蘇氨酸的胰島素(desB30)是通過重組微生物發酵得到胰島素前體經純化、酶切后得到的重要中間體，后續通過不同的修飾反應和純化后可制備得到地特胰島素、德谷胰島素或其它胰島素類似物。地特胰島素是一種中性、可溶的長效胰島素，它是原型胰島素去除了B鏈第30為蘇氨酸，通過酰化作用在B29位賴氨酸側鏈氨基結合一個14碳的直鏈脂肪酸而成，具有藥效長并可減少低血糖的出現等優點。德谷胰島素是新一代可溶性、超長效基礎胰島素類似物，其分子保留了絕大部分的人胰島素氨基酸序列，僅是去掉人胰島素B鏈30位的蘇氨酸，并通過谷氨酸連接子將一個十六碳脂肪二酸側鏈連接到B29位賴氨酸上，具有藥效長，低血糖發生率低的特點。雖然desB30樣品經過胰島素前體發酵液微孔過濾、初級純化、酶切和等電點沉淀，但由于發酵產物的成分相對復雜，酶切得到的desB30純度約在80％左右，還是有很多可見和不可見的色素或其它蛋白或核酸等，影響后續工藝的開發，同時易造成對純化介質的污染，影響其使用次數。除此之外，直接等電點沉淀的desB30還存在不穩定、易降解或脫氨等缺點，因此需要增加一步工藝去除這些雜質，提高澄清度和純度以及儲存穩定性。通過對desB30樣品進行結晶工藝研究，獲得晶型相對均一的晶體，desB30以固態晶體形式存在，樣品更穩定，更易貯存。另外desB30晶體的純度高，有利于后續修飾反應的開展。因此，進行desB30的結晶工藝研究具有重要意義。技術實現要素：本發明所要解決的技術問題是提供一種B30位蘇氨酸缺失人胰島素(desB30)晶體的制備方法，該方法操作簡單，結晶的收率高，所制備的desB30晶體形狀規則、大小均一，而且純度高。為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是：本發明首先公開了一種B30位蘇氨酸缺失人胰島素晶體的制備方法，包括以下步驟：(1)將B30位蘇氨酸缺失人胰島素溶解，加入有機溶劑、鋅離子、檸檬酸三鈉和無機鹽，得到結晶液；(2)調節結晶液的pH值，進行結晶，即得。其中，步驟(1)所述結晶液中檸檬酸三鈉的濃度為0.01-0.1M，優選為0.01-0.05M，更優選為0.025-0.05M，最優選為0.04-0.05M。步驟(1)所述結晶液中鋅離子與B30位蘇氨酸缺失人胰島素的摩爾比為7-20：1，優選為10-15：1，更優選為10-12：1，最優選為10-11：1。所述鋅離子來自于常見的鋅源，優選的，所述鋅離子來自于氯化鋅、醋酸鋅或碘化鋅中的任意一種，優選為氯化鋅或醋酸鋅中的任意一種。步驟(1)所述結晶液中有機溶劑的體積百分比為5-20％，優選為8-18％，更優選為9-15％，最優選為10-15％；所述有機溶劑選自丙酮、乙腈或2-甲基-2,4-戊二醇(MPD)中的任意一種，優選為丙酮。步驟(1)所述結晶液中無機鹽的濃度為0.01-0.05M，優選為0.01-0.03M，最優選為0.01-0.02M。所述無機鹽選自氯化鈉、硫酸銨或醋酸銨中的任意一種或兩種，優選為氯化鈉。步驟(1)所述結晶液中B30位蘇氨酸缺失人胰島素的濃度為3-9g/L，優選為3-5g/L。步驟(1)所述溶解是用稀酸溶解B30位蘇氨酸缺失人胰島素；其中，所述稀酸的濃度為10-40mM，優選為15-30mM；最優選為20-25mM；所述稀酸選自鹽酸、檸檬酸或醋酸中的任意一種。步驟(2)所述調節結晶液的pH值包括：先調節結晶液的pH值為7.6-8.5，然后加入有機酸調節pH值為5.7-6.2；優選為，先調節結晶液的pH值為7.8-8.0，然后加入有機酸調節pH值為5.8-6.0。其中，可采用常見的堿調節pH值至7.6-8.5，例如氨水或氫氧化鈉，優選為氨水；所述有機酸為檸檬酸。步驟(2)所述結晶的方式選自①-②中的任意一種：①室溫靜置15-50min，低速攪拌3-6h，然后2-8℃靜置5-9h，得到結晶；優選為，室溫靜置40-50min，低速攪拌3-4h，然后4℃靜置8-9h，得到結晶；②室溫靜置5-6h，然后4℃靜置8-10h。所述室溫為10-25℃。B30位蘇氨酸缺失胰島素與人胰島素相比，缺少一個氨基酸；與地特胰島素相比，缺少在B29位賴氨酸側鏈氨基酰化結合一個14碳的直鏈脂肪酸；與德谷胰島素相比，缺少在B29位賴氨酸側鏈通過谷氨酸連接子連接的16碳脂肪二酸側鏈；所以，其結構和性質與人胰島素、地特胰島素或德谷胰島素均不相同，其結晶方法需要進行探索。本發明desB30樣品為等電點沉淀離心后收集的樣品，純度只有80％左右，可見和不可見的雜質較多，結晶難度大。本發明對desB30的結晶條件進行了優化。本發明試驗發現，檸檬酸三鈉對結晶體系影響較大，檸檬酸三鈉濃度太低，結晶體系無法緩沖，會導致樣品部分形成沉淀，無法結晶；檸檬酸三鈉濃度過高，會導致上清中desB30樣品的殘余大幅增加，影響收率。本發明確定結晶液中檸檬酸三鈉的濃度為0.025-0.05M，結晶效果好。結晶液中鋅離子和desB30的摩爾比對結晶效率有顯著的影響。鋅離子和desB30的摩爾比在7-20：1范圍內，desB30結晶效果較好，上清中殘余的未結晶的desB30低于8.6％；而鋅離子和desB30的摩爾比在10-15：1，desB30結晶效果更佳，上清殘余比低于6.7％；鋅離子和desB30的摩爾比為11：1，desB30結晶效果最佳；當鋅離子和desB30的摩爾比超出上述范圍，會導致上清中殘余的未結晶的desB30量顯著增加，影響收率。結晶液中有機溶劑濃度及desB30濃度對結晶的效果也有較大的影響。有機溶劑濃度雖對上清中殘余的未結晶的desB30量影響不是很明顯，但是對晶體大小影響明顯。有機溶劑濃度過高，體積百分比超出20％后，晶體大小會明顯變小。因此，本發明確定有機溶劑比例在10-15％，desB30結晶效果較好。結晶液中desB30的濃度較低時，結晶殘余雖然比較低，但結晶效率比較低，不適合生產；當蛋白濃度比較高，達14g/L，會導致上清中殘余的未結晶的desB30量明顯增加；當蛋白濃度過高，達20g/L，會導致蛋白沉淀從而無法結晶。因此，本發明確定DesB30蛋白濃度在3-9g/L，結晶效果較好。酸調節結晶液的pH終點也會對上清中殘余的未結晶的desB30比例產生影響，pH超出5.7-6.2，尤其是超出5.8-6.0的范圍會導致desB30損失明顯增加。結晶方式對最后晶體的形態以及收率影響很大。本發明試驗發現，只是靜置結晶，上清殘余較多，損失較大，而且晶形較大；攪拌或者搖床結晶，上清殘余少，收率高，但是晶形小，破碎的多。本發明通過多次試驗，確定先靜置讓晶核變大，然后再低速攪拌促進結晶析出，最后低溫靜置，結晶效果較好。本發明通過對結晶條件的優化，所制備的desB30晶體形狀規則、大小均一，desB30結晶的最終收率達到95％以上，純度提高10％。同時，本發明獲得的desB30結晶易于與上清分離，可通過直接吸取上清收集，或采用自然沉降或離心的方式收集，樣品中殘余的試劑不影響后續酰化工序，而且收集的晶體易凍干或冷凍保存，冷凍干燥時間短。同時，desB30以固態晶體形式存在，相比液體或以無定形的等電點沉淀的凍存形式，樣品更穩定，更易貯存。另外，本發明制備的desB30晶體純度高、溶解性好，且溶液澄清度高，可與后續修飾工藝直接銜接，制備地特胰島素或德谷胰島素等胰島素類似物，適用于工業化生產。本發明B30位蘇氨酸缺失人胰島素晶體的制備方法，利用等電點沉淀離心收集的desB30樣品直接進行結晶，結晶后收集的樣品可直接溶解用于后續修飾反應，能夠很好的與上下游工藝相銜接。本發明方法將對后續desB30的修飾和純化工藝產生有利的影響，例如減輕后續純化上樣壓力，降低對純化填料的污染，增加填料的可循環使用次數等。本發明技術方案與現有技術相比，具有以下有益效果：本發明B30位蘇氨酸缺失人胰島素(desB30)晶體的制備方法，結晶的收率高，操作簡單，可用于desB30蛋白的工業化結晶。本發明所制備的desB30結晶形狀規則、大小均一，而且純度高，溶解性好，溶液澄清度高，有助于后續修飾反應的開發。附圖說明圖1是實施例1制備的desB30結晶放大200倍鏡檢圖；圖2是實施例2制備的desB30結晶放大200倍鏡檢圖；圖3是實施例3制備的desB30結晶放大200倍鏡檢圖；圖4是實施例4制備的desB30結晶放大200倍鏡檢圖；圖5是實施例5制備的desB30結晶放大200倍鏡檢圖；圖6是實施例6制備的desB30結晶放大200倍鏡檢圖；圖7是實施例7制備的desB30結晶放大200倍鏡檢圖；圖8是實施例8制備的desB30結晶放大200倍鏡檢圖；圖9為結晶前后desB30高效液相檢測圖譜對比；圖10為試驗例4中試驗組4有機溶劑比例為20％制備的desB30結晶鏡檢圖。具體實施方式下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但是應理解所述實施例僅是范例性的，不對本發明的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和范圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改或替換均落入本發明的保護范圍。1、材料desB30蘇氨酸缺失人胰島素：昂德生物藥業有限公司提供。檸檬酸(C6H8O7.H2O)購自國藥集團化學試劑有限公司，批號20131120；氯化鈉(NaCl)購自上海凌峰化學試劑有限公司，批號20160122；鹽酸(HCl)購自國藥集團化學試劑有限公司，批號20160301；氫氧化鈉(NaOH)購自上海凌峰化學試劑有限公司，批號20160108；乙酸(C2H4O2)購自上海天蓮化工科技有限公司，批號2015-06-15-149；乙腈(CH3CN，HPLC級)購自賽默飛世多科技(中國)有限公司，批號155757；丙酮(C3H6O)購自國藥集團化學試劑有限公司，批號為20160615；檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7·2H2O)購自SangonBiotech，批號C226BA0012；氨水(NH3.H2O)購自上海凌峰化學試劑有限公司，批號20100720；氯化鋅(ZnCl2)購自上海凌峰化學試劑有限公司，批號20130705；醋酸鋅(C4H6O4Zn)購自默克股份兩合公司，批號1.08802.0250；碘化鋅(ZnI2)購自上海凌峰化學試劑有限公司，批號20110408；硫酸銨購自上海凌峰化學試劑有限公司，批號20120508；醋酸銨購自上海凌峰化學試劑有限公司，批號20110807；分析型高效液相儀器為安捷倫1260，分析型色譜柱為Kromasil300-5-C4(4.6mm×250mm)；pH計購自梅特勒-托利多(上海)儀器有限公司，型號S210。實施例1制備desB30結晶液，各組分濃度分別為：desB30濃度為3g/L，丙酮濃度為15％(體積百分比)、檸檬酸三鈉濃度為0.05M，硫酸銨濃度為0.03M，鋅離子與desB30的摩爾比為10:1。結晶過程：稱取一定量的desB30樣品，溶于20mM的鹽酸，采用高效液相檢測其濃度為13.91mg/ml，精確量取8.62mldesB30溶液加入錐形瓶中；加入19.4ml水混勻待用；加入丙酮6ml；加入1％ZnCl2溶液2.9ml；加入1M檸檬酸三鈉2ml；加入硫酸銨0.16g；用氨水調節pH為8.0，然后加入檸檬酸調節pH值為5.95，終體積為40ml。室溫靜置5h，然后4℃溫度下靜置8h得到結晶。取上清液檢測樣品殘余，結果為3.6％。取結晶懸浮液在200倍顯微鏡下鏡檢，結果見圖1，可見結晶多數為規則的六棱體，有少量性狀不規則晶體。實施例2制備desB30結晶液，各組分濃度分別為：desB30濃度為3g/L，丙酮濃度為15％(體積百分比)、檸檬酸三鈉濃度為0.05M，氯化鈉濃度為0.01M，鋅離子與desB30的摩爾比為11:1。結晶過程：稱取一定量的desB30樣品，溶于20mM的鹽酸，采用高效液相檢測其濃度為13.91mg/ml，精確量取8.62mldesB30溶液加入錐形瓶中；加入16.5ml水混勻待用；加入丙酮6ml；加入1％ZnCl2溶液3.2ml；加入1M檸檬酸三鈉2ml；加入0.023g氯化鈉；用氨水調節pH為8.0，然后加入檸檬酸調節pH值為5.93，終體積為40ml。室溫靜置50min，然后低速攪拌3h后，再在4℃溫度下靜置9h得到結晶。取上清液檢測樣品殘余，結果為3.6％。取結晶懸浮液在200倍顯微鏡下鏡檢，結果見圖2，可見絕大多數晶體形狀規整，大小均一且晶體較大。實施例3制備desB30結晶液，各組分濃度分別為：desB30濃度為4g/L，乙腈濃度為15％(體積百分比)、檸檬酸三鈉濃度為0.025M，氯化鈉濃度為0.03M，鋅離子與desB30的摩爾比為11:1。結晶過程：稱取一定量的desB30樣品，溶于20mM的鹽酸，采用高效液相檢測其濃度為14.15mg/ml，精確量取11.31mldesB30溶液加入錐形瓶中；加入10.77ml水混勻待用；加入乙腈6ml；加入1％ZnI2溶液9.85ml；加入1M檸檬酸三鈉1ml；加入0.07g氯化鈉；用氨水調節pH為7.9，然后加入檸檬酸調節pH值為5.95，終體積為40ml。室溫靜置5h，然后4℃溫度下靜置8h得到結晶。取上清液檢測樣品殘余，結果為3.5％。取結晶懸浮液在200倍顯微鏡下鏡檢，結果見圖3，可見晶體大小均一，形狀規則，極少量沒有形成完整晶體。實施例4制備desB30結晶液，各組分濃度分別為：desB30濃度為3g/L，乙腈濃度為15％(體積百分比)、檸檬酸三鈉濃度為0.05M，硫酸銨濃度為0.03M，鋅離子與desB30的摩爾比為10:1。結晶過程：稱取一定量的desB30樣品，溶于15mM的鹽酸，采用高效液相檢測其濃度為13.91mg/ml，精確量取8.62mldesB30溶液加入錐形瓶中；加入20.1ml水混勻待用；加入乙腈6ml；加入1％ZnCl2溶液3.2ml；加入1M檸檬酸三鈉2ml；加入3.96g硫酸銨；用氫氧化鈉調節pH為8.0，然后加入檸檬酸調節pH值為5.85，終體積為40ml。室溫靜置6h，然后4℃溫度下靜置9h得到結晶。取上清液檢測樣品殘余，結果為7.5％。取結晶懸浮液在200倍顯微鏡下鏡檢，結果見圖4，可見有少部分未成形晶體，其余晶體形狀規則，大小均一。實施例5制備desB30結晶液，各組分濃度分別為：desB30濃度為5g/L，MPD濃度為10％(體積百分比)、檸檬酸三鈉濃度為0.05M，氯化鈉濃度為0.02M，鋅離子與desB30的摩爾比為11:1。結晶過程：稱取一定量的desB30樣品，溶于25mM的鹽酸，采用高效液相檢測其濃度為15.63mg/ml，精確量取7.68mldesB30溶液加入錐形瓶中；加入18.2ml水混勻待用；加入MPD4ml；加入1％醋酸鋅溶液7.07ml；加入1M檸檬酸三鈉2ml；加入0.05g氯化鈉；用氫氧化鈉調節pH為8.0，然后加入檸檬酸調節pH值為5.9，終體積為40ml。室溫靜置6h，然后4℃溫度下靜置10h得到結晶。取上清液檢測樣品殘余，結果為2.5％。取結晶懸浮液在200倍顯微鏡下鏡檢，結果見圖5，晶體形狀完整規則，均一性好。實施例6制備desB30結晶液，各組分濃度分別為：desB30濃度為3.5g/L，乙腈濃度為10％(體積百分比)、檸檬酸三鈉濃度為0.03M，氯化鈉濃度為0.01M，鋅離子與desB30的摩爾比為12:1。結晶過程：稱取一定量的desB30樣品，溶于25mM的鹽酸，采用高效液相檢測其濃度為15.63mg/ml，精確量取5.38mldesB30溶液加入錐形瓶中；加入20.6ml水混勻待用；加入乙腈4ml；加入1％醋酸鋅溶液7.71ml；加入1M檸檬酸三鈉1.2ml；加入0.02g氯化鈉；用氫氧化鈉調節pH為7.95，然后加入檸檬酸調節pH值為6.2，終體積為40ml。室溫靜置6h，然后4℃溫度下靜置9h得到結晶。取上清液檢測樣品殘余，結果為7.8％。取結晶懸浮液在200倍顯微鏡下鏡檢，結果見圖6，大部分晶體形狀完整，但視野中分布密度較小。實施例7制備desB30結晶液，各組分濃度分別為：desB30濃度為5g/L，丙酮濃度為10％(體積百分比)、檸檬酸三鈉濃度為0.04M，氯化鈉濃度為0.02M，鋅離子與desB30的摩爾比為11:1。結晶過程：稱取一定量的desB30樣品，溶于25mM的鹽酸，采用高效液相檢測其濃度為15.63mg/ml，精確量取32mldesB30溶液加入錐形瓶中；加入42.0ml水混勻待用；加入丙酮10ml；加入1％氯化鋅溶液13.33ml；加入1M檸檬酸三鈉4ml；加入0.05g氯化鈉；用氨水調節pH為8.0，然后加入檸檬酸調節pH值為6.0，終體積為100ml。室溫靜置40min，然后低速攪拌4h后，再在4℃溫度下靜置8h得到結晶。取上清液檢測樣品殘余，結果為2.6％，損失率較小。取結晶懸浮液在200倍顯微鏡下鏡檢，結果見圖7，晶體形狀規則且較完整。實施例8制備desB30結晶液，各組分濃度分別為：desB30濃度為5g/L，丙酮濃度為12％(體積百分比)、檸檬酸三鈉濃度為0.02M，氯化鈉濃度為0.03M，鋅離子與desB30的摩爾比為11:1。結晶過程：稱取一定量的desB30樣品，溶于30mM的鹽酸，采用高效液相檢測其濃度為17.33mg/ml，精確量取145mldesB30溶液加入錐形瓶中；加入42ml水混勻待用；加入丙酮60ml；加入1％氯化鋅溶液66.65ml；加入1M檸檬酸三鈉10ml；加入0.07g氯化鈉；用氨水調節pH為8.0，然后加入檸檬酸調節pH值為5.9，終體積為500ml。低速攪拌5h后，在4℃溫度下靜置9h得到結晶。取上清液檢測樣品殘余，結果為2.2％。取結晶懸浮液在200倍顯微鏡下鏡檢，結果見圖8，晶體破碎較多，且體積較小。實施例9對實施例1-8制備的desB30晶體再溶解檢測其純度。結晶前后desB30高效液相檢測圖譜對比見圖9。本發明中desB30樣品為等電點沉淀離心后收集的樣品，desB30的純度只有80％左右，可見和不可見的雜質較多，結晶難度大。本發明方法使結晶的最終收率達到95％以上，且純度提高10％，410nm下的OD值從結晶前的0.486降低為0.059，效果非常明顯。試驗例1檸檬酸三鈉濃度對上清中desB30殘余比例的影響分析了檸檬酸三鈉不同濃度對上清中desB30殘余比例的影響，不同處理組desB30結晶的主要參數見表1，其余結晶參數同實施例2。表1desB30結晶的參數從表1可以看出，在其他參數一致的條件下，檸檬酸三鈉濃度過高，達到0.1M以上，會導致上清中殘余的未結晶的desB30量大幅增加；而檸檬酸三鈉濃度過低，在0.01M以下，導致desB30無法結晶。檸檬酸三鈉濃度在0.025-0.05M，desB30結晶效果好，上清殘余比僅2.8％-3.2％。試驗例2鋅離子和desB30摩爾比對上清中desB30殘余比例的影響分析了鋅離子和desB30不同摩爾比對上清中desB30殘余比例的影響。不同處理組desB30結晶的主要參數見表2，其余結晶參數同實施例2。表2desB30結晶的參數試驗組1234567DesB30濃度(g/L)3333333有機溶劑比例(％)15151515151515鋅離子：desB30摩爾比2:17:110:111:115:120:130:1檸檬酸三鈉濃度(M)0.050.050.050.050.050.050.05堿調節pH8.08.08.08.08.08.08.0酸調節pH5.935.935.935.935.935.935.93上清殘余比(％)15.77.95.83.76.78.614.3從表2可以看出，鋅離子和desB30的摩爾比在7-20：1范圍內，desB30結晶效果較好，上清中殘余的未結晶的desB30低于8.6％；而鋅離子和desB30的摩爾比在10-15：1，desB30結晶效果更佳，上清殘余比低于6.7％；但鋅離子和desB30的摩爾比超出上述范圍，導致上清中殘余的未結晶的desB30量顯著增加。試驗例3desB30蛋白濃度對上清中desB30殘余比例的影響分析了desB30蛋白濃度的不同對上清中desB30殘余比例的影響。不同處理組desB30結晶的主要參數見表3，其余結晶參數同實施例2。表3desB30結晶的參數試驗組1234567DesB30濃度(g/L)135891420有機溶劑比例(％)15151515151515鋅離子：desB30摩爾比11:111:111:111:111:111:111:1檸檬酸三鈉濃度(M)0.050.050.050.050.050.050.05堿調節pH8.08.08.08.08.08.08.0酸調節pH5.955.955.955.955.955.955.95上清殘余比(％)3.64.54.75.35.520.5無法結晶從表3可以看出，DesB30蛋白濃度比較低時，在1g/L以下，結晶殘余雖然比較低，但是結晶效率也比較低，不適合生產；當蛋白濃度比較高，達14g/L，會導致上清中殘余的未結晶的desB30量明顯增加；但當蛋白濃度過高，達到20g/L，會導致蛋白沉淀從而無法結晶。因此，DesB30蛋白濃度在3-9g/L，結晶效果好。試驗例4有機溶劑比例對上清中desB30殘余比例的影響分析了有機溶劑比例的不同對上清中desB30殘余比例的影響。不同處理組desB30結晶的主要參數見表4，其余結晶參數同實施例2。表4desB30結晶的參數試驗組1234DesB30濃度(g/L)3333有機溶劑比例(％)5101520鋅離子：desB30摩爾比11:111:111:111:1檸檬酸三鈉濃度(M)0.050.050.050.05堿調節pH8.08.08.08.0酸調節pH5.955.955.955.95上清殘余比(％)4.5％2.5％2.6％5.3％從表4可以看出，有機溶劑比例對上清中殘余的未結晶的desB30量影響不是很明顯，但是對晶體大小影響明顯；當有機溶劑比例過高，達到20％，晶體大小會明顯變小(圖10)。因此，有機溶劑比例在10-15％，desB30結晶效果較好。試驗例5酸調節pH終點對上清中desB30殘余比例的影響分析了酸調節pH終點的不同對上清中desB30殘余比例的影響。不同處理組desB30結晶的主要參數見表5，其余結晶參數同實施例2。表5desB30結晶的參數從表5可以看出，最終酸調節結晶液的pH終點，會對上清中殘余的未結晶的desB30比例產生影響，pH超出5.7-6.2，尤其是超出5.8-6.0的范圍，desB30損失會明顯增加。當前第1頁1 2 3