本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種含硒類化合物及其制備技術(shù)。

背景技術(shù)：

作為一種主要的翻譯后修飾，賴氨酸側(cè)鏈酰基化及其去酰基化已在近年證明能有效地調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)被修飾蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能[1-3]。細(xì)胞內(nèi)蛋白賴氨酸側(cè)鏈酰基化及去酰基化是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程，其中的酰基可以是較小的乙酰基(acetyl)也可以是較龐大的丁二酰基(succinyl)或十四酰基(myristoyl)。需要指出的是，根據(jù)現(xiàn)有的知識(shí)，酰基化可以是酶催化的過(guò)程(比如被乙酰轉(zhuǎn)移酶家族成員(protein lysine acetyltransferases)所催化)[4]也可以是非酶催化的過(guò)程[5]，而去酰基化是酶催化的過(guò)程，即被蛋白酰基賴氨酸去酰化酶家族成員(protein acyl-lysine deacylases)所催化[6-8]。

Sirtuin代表一類細(xì)胞內(nèi)蛋白酰基賴氨酸去酰化酶[7,8]。Sirtuin能催化NAD⁺和酰基賴氨酸的縮合，形成去酰化的產(chǎn)物以及煙酰胺(nicotinamide)和2’-O-AADPR。現(xiàn)有研究表明，除了組蛋白(histones)，sirtuin也接受其它細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)作為天然底物[9]。從細(xì)菌到人類的各種活性生物體中均已發(fā)現(xiàn)了sirtuin[10]。酵母中的沉默信息調(diào)節(jié)蛋白2(Sir2)是所發(fā)現(xiàn)的首例sirtuin；它的蛋白乙酰賴氨酸去乙酰催化活性是在2000年被發(fā)現(xiàn)的[11]。迄今為止，哺乳類動(dòng)物和人體中已發(fā)現(xiàn)了7個(gè)sirtuin，即SIRT1,SIRT2,SIRT3,SIRT4,SIRT5,SIRT6,SIRT7。SIRT1,SIRT2和SIRT3均能有效地催化去除較小的乙酰基(acetyl)和較龐大的十四酰基(myristoyl)；SIRT5能有效地催化去除丁二酰基(succinyl)；SIRT6能有效地催化去除十四酰基(myristoyl)[1,7]。

Sirtuin催化的去酰化反應(yīng)已被證明能有效地調(diào)節(jié)一些非常重要的生命過(guò)程，比如基因轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞凋亡，DNA損傷修復(fù)，代謝[12-14]，并且該去酰化反應(yīng)的抑制被認(rèn)為是當(dāng)今發(fā)展針對(duì)一些人類疾病(比如癌癥和代謝疾病)的一個(gè)重要新型策略[15-17]。Sirtuin抑制劑也應(yīng)能幫助更進(jìn)一步探索抑制sirtuin催化的去酰化反應(yīng)的治療潛力。

現(xiàn)有的sirtuin抑制劑主要由兩大途徑獲得[7,15,18]：化合物庫(kù)篩選(包括虛擬篩選)和sirtuin催化機(jī)制導(dǎo)向的設(shè)計(jì)。后者是由本申請(qǐng)發(fā)明人課題組(在美國(guó)Akron大學(xué)期間)和John M.Denu教授課題組(美國(guó)Wisconsin大學(xué)Madison分校)所開(kāi)拓的一個(gè)重要領(lǐng)域[19,20]。到目前為止，多種sirtuin催化機(jī)制導(dǎo)向的抑制劑所賴以發(fā)揮sirtuin抑制功效的催化機(jī)制導(dǎo)向的sirtuin抑制彈頭已被發(fā)現(xiàn)[7,18]；但是在所有的彈頭當(dāng)中，目前只有硫脲彈頭能被sirtuin催化形成一個(gè)絕對(duì)不能夠被繼續(xù)催化轉(zhuǎn)化的中間體(即化學(xué)穩(wěn)定的異硫脲中間體)；而其它的彈頭被sirtuin催化形成的中間體仍然能夠緩慢地被sirtuin繼續(xù)催化轉(zhuǎn)化形成終產(chǎn)物，以至于削弱對(duì)于sirtuin的抑制功效。然而，

硫的極化度和親核性相對(duì)于硒來(lái)說(shuō)都較小，所以硫脲彈頭在sirtuin催化下與NAD⁺的親核取代反應(yīng)的能力比硒脲要差，并且硫脲的抗氧化能力也比硒脲的要弱。

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技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種硒脲彈頭及其構(gòu)建方法，以提高之前報(bào)道的硫脲彈頭的極化度和親核性，且提高其抗氧化能力。

現(xiàn)已存在的sirtuin原型抑制彈頭及其衍生型彈頭主要包括硫酰基賴氨酸類(目前最強(qiáng)但是側(cè)鏈硫酰胺在體內(nèi)代謝后能呈現(xiàn)肝毒性)和硫脲類(也較強(qiáng)，能避開(kāi)硫酰基賴氨酸的代謝毒性問(wèn)題，并且具有抗氧化功效)。為了更進(jìn)一步優(yōu)化硫脲類sirtuin抑制彈頭，本發(fā)明中發(fā)展了硒脲類sirtuin抑制彈頭。硫脲類(或者硒脲類)彈頭被sirtuin催化處理得到穩(wěn)定的異硫脲(或者異硒脲)中間體，以至于抑制sirtuin的催化活性。

為了解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的具體技術(shù)方案如下：

一種硒脲彈頭的構(gòu)建方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟一，甲酰胺充分溶解于經(jīng)過(guò)干燥的二氯甲烷(DCM)中，加入伯吉斯試劑，加熱回流反應(yīng)至完全反應(yīng)，生成淡黃色液體；在所述淡黃色液體中加DCM稀釋后，加入蒸餾水分液，洗去過(guò)量的伯吉斯試劑以及相關(guān)副產(chǎn)物，得到有機(jī)層A；對(duì)所述有機(jī)層A加入飽和食鹽水分液，分離掉過(guò)量的水，得有機(jī)層B；在有機(jī)層B中加入無(wú)水硫酸鈉干燥處理，經(jīng)過(guò)濾、旋蒸后，得到產(chǎn)物一；在所述加熱回流反應(yīng)過(guò)程中，需要防止空氣中的水汽進(jìn)入反應(yīng)體系；甲酰胺與DCM的比例為1mmol比2ml～5ml；甲酰胺與伯吉斯試劑摩爾比為1：1.2～1.6；

步驟二，將產(chǎn)物一充分溶解于四氫呋喃(THF)中，加入三乙胺及硒粉并加熱回流至充分反應(yīng)，生成深黃色液體；對(duì)所述深黃色液體使用硅藻土過(guò)濾，得濾液，經(jīng)旋干、稀鹽酸酸化后，加乙酸乙酯萃取兩次，得有機(jī)層C；對(duì)有機(jī)層C用蒸餾水洗去過(guò)量的酸后，再用飽和食鹽水分離掉過(guò)量的水，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾取有機(jī)層并經(jīng)旋蒸后，得產(chǎn)物二；所述步驟二為無(wú)水無(wú)氧反應(yīng)；產(chǎn)物一與THF的比例為1mmol比10ml～15ml；產(chǎn)物一與三乙胺及

硒粉的摩爾比是1比0.7比3；

所述產(chǎn)物二為R1-N＝C＝Se結(jié)構(gòu)通式(I)；R1是甲基(CH₃)或CH₂CH₂COOR2或或CH₂-(CH)₁₀-CH₃、CH₂-(CH)₁₁-CH₃、CH₂-(CH)₁₂-CH₃、CH₂-(CH)₁₃-CH₃、CH₂-(CH)₁₄-CH₃中的任意一種；R2是任何烷基、芳基或芳烷基；

步驟三，將載體或帶有保護(hù)基團(tuán)的載體充分溶解于混合溶劑A中，第一次加入三乙胺，調(diào)pH至7～8，第二次加入三乙胺，再加入上述產(chǎn)物二，之后混勻，放置在零下80攝氏度4.5～5.5min以減緩初始反應(yīng)速率，然后在4攝氏度環(huán)境下充分反應(yīng)，之后將反應(yīng)物濃縮然后直接用硅膠柱層析法或者高效液相色譜法(HPLC)純化，或使反應(yīng)物經(jīng)三氟乙酸處理后進(jìn)行冰乙醚沉降處理然后用高效液相色譜法(HPLC)純化；之后得到中間產(chǎn)物；所述的混合溶劑A為N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和超純水(ddH₂O)的混合物，體積比為50:13；載體和混合溶劑A的比例關(guān)系為1mmol/15.75mL；所述的第二次加入三乙胺的量與載體的摩爾比為1:1；

步驟四，對(duì)上述中間產(chǎn)物進(jìn)行處理，使R1中的保護(hù)基團(tuán)離去，純化后，得到最終產(chǎn)物即帶有載體的硒脲彈頭。

所述的甲酰胺為R1NHCHO結(jié)構(gòu)通式(II)；R1是甲基(CH₃)或CH₂CH₂COOR2或或CH₂-(CH)₁₀-CH₃、CH₂-(CH)₁₁-CH₃、CH₂-(CH)₁₂-CH₃、CH₂-(CH)₁₃-CH₃、CH₂-(CH)₁₄-CH₃中的任意一種；R2是任何烷基、芳基或芳烷基。

3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種硒脲彈頭的構(gòu)建方法，其特征在于：所述步驟三中載體或帶有保護(hù)基團(tuán)的載體包含以下結(jié)構(gòu)：

所述載體或帶有保護(hù)基團(tuán)的載體為：

一種根據(jù)所述的構(gòu)建方法得到的帶有載體的硒脲彈頭，其特征在于具有下列結(jié)構(gòu)通式(III)：

R1是甲基(CH₃)或CH₂CH₂COOH或CH₂CH₂COOR2或或

CH₂-(CH)₁₀-CH₃、CH₂-(CH)₁₁-CH₃、CH₂-(CH)₁₂-CH₃、CH₂-(CH)₁₃-CH₃、CH₂-(CH)₁₄-CH₃中的任意一種；R2是任何烷基、芳基或芳烷基。

所述的帶有載體的硒脲彈頭，其特征在于所述結(jié)構(gòu)通式(III)為具有以下結(jié)構(gòu)通式(IV)的化合物：

R1是甲基(CH₃)或CH₂CH₂COOH或CH₂CH₂COOR2或或

CH₂-(CH)₁₀-CH₃、CH₂-(CH)₁₁-CH₃、CH₂-(CH)₁₂-CH₃、CH₂-(CH)₁₃-CH₃、CH₂-(CH)₁₄-CH₃中的任意一種；R2是任何烷基、芳基或芳烷基。

所述的帶有載體的硒脲彈頭，其特征在于所述結(jié)構(gòu)通式(III)為具有以下結(jié)構(gòu)通式(V)的化合物：

R1是甲基(CH₃)或CH₂CH₂COOH或CH₂CH₂COOR2或或

CH₂-(CH)₁₀-CH₃、CH₂-(CH)₁₁-CH₃、CH₂-(CH)₁₂-CH₃、CH₂-(CH)₁₃-CH₃、CH₂-(CH)₁₄-CH₃中的任意一種；R2是任何烷基、芳基或芳烷基。

所述的帶有載體的硒脲彈頭，其特征在于所述結(jié)構(gòu)通式(III)為具有以下結(jié)構(gòu)通式(VI)的化合物：

R1是甲基(CH₃)或CH₂CH₂COOH或CH₂CH₂COOR2或或

CH₂-(CH)₁₀-CH₃、CH₂-(CH)₁₁-CH₃、CH₂-(CH)₁₂-CH₃、CH₂-(CH)₁₃-CH₃、CH₂-(CH)₁₄-CH₃中的任意一種；R2是任何烷基、芳基或芳烷基。

所述的帶有載體的硒脲彈頭，其特征在于所述結(jié)構(gòu)通式(III)為具有以下結(jié)構(gòu)通式(VII)的化合物：

R1是甲基(CH₃)或CH₂CH₂COOH或CH₂CH₂COOR2或或

CH₂-(CH)₁₀-CH₃、CH₂-(CH)₁₁-CH₃、CH₂-(CH)₁₂-CH₃、CH₂-(CH)₁₃-CH₃、CH₂-(CH)₁₄-CH₃中的任意一種；R2是任何烷基、芳基或芳烷基。

所述的帶有載體的硒脲彈頭，其特征在于所述結(jié)構(gòu)通式(III)為具有以下結(jié)構(gòu)通式(VIII)的化合物：

R1是甲基(CH₃)或CH₂CH₂COOH或CH₂CH₂COOR2或或

CH₂-(CH)₁₀-CH₃、CH₂-(CH)₁₁-CH₃、CH₂-(CH)₁₂-CH₃、CH₂-(CH)₁₃-CH₃、CH₂-(CH)₁₄-CH₃中的任意一種；R2是任何烷基、芳基或芳烷基。

以上所述任意一項(xiàng)的化合物在制備所有sirtuin催化活性抑制劑中的用途。

本發(fā)明具有有益效果。因?yàn)槲攘蛴兄叩臉O化度以至于更強(qiáng)的親核性，所以通過(guò)本發(fā)明的構(gòu)建方法得到的硒脲彈頭比之前報(bào)道的硫脲彈頭更容易進(jìn)行sirtuin催化的第一步與NAD⁺的親核取代反應(yīng)，以及比硫脲彈頭具有更強(qiáng)的抗氧化能力。所以本發(fā)明的硒脲類sirtuin抑制彈頭比硫脲類的sirtuin抑制彈頭更優(yōu)越。硒脲類sirtuin抑制彈頭的發(fā)展將極大地促進(jìn)發(fā)展有效的sirtuin抑制劑作為新型的治療人類疾病的藥物。

附圖說(shuō)明

圖1中從左到右分別為含有硒脲類SIRT5，SIRT1/2/3，SIRT6抑制彈頭的三個(gè)抑制劑。

圖2為本發(fā)明的硒脲類SIRT5抑制劑的合成方案。

圖3為本發(fā)明的硒脲類SIRT1/2/3抑制劑的合成方案。

圖4為本發(fā)明的硒脲類SIRT6抑制劑的合成方案。

圖5為本發(fā)明的另一個(gè)硒脲類SIRT5抑制劑的合成方案。

具體實(shí)施例

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。需要指出的是，本發(fā)明人課題組在之前的工作中(參見(jiàn)：Zang,W.；Hao,Y.；Wang,Z.；Zheng,W.Bioorg.Med.Chem.Lett.2015,25,3319-3324；Liu,J.；Zheng,W.Org.Biomol.Chem.2016,14,5928-5935)運(yùn)用了圖1中的肽骨架將硫脲類的抑制彈頭裝入以評(píng)估各個(gè)彈頭的sirtuin抑制強(qiáng)度，所示的三個(gè)彈頭的硫脲版是本申請(qǐng)發(fā)明人課題組之前所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的硫脲類SIRT5,SIRT1/2/3,SIRT6抑制彈頭，所以這些同樣的肽骨架也被用于裝入硒脲類sirtuin抑制彈頭以評(píng)估它們對(duì)于sirtuin的抑制強(qiáng)度，如圖1所示。

實(shí)施例1.一個(gè)含有硒脲類SIRT5抑制彈頭的抑制劑(圖1)的化學(xué)合成。該化合物的合成過(guò)程如圖2所示，具體步驟如下：

步驟一.3mmol H₃COOC(CH₂)₂NHCHO溶于15ml的DCM中，加3.6mmol伯吉斯試劑，回流反應(yīng)2h，生成黃色液體；加10ml的DCM稀釋，用10ml蒸餾水分液兩次，棄水層；5ml的飽和食鹽水分液，保留有機(jī)層。往有機(jī)層中加入無(wú)水硫酸鈉干燥，經(jīng)過(guò)濾，旋蒸，得到產(chǎn)物一。

步驟二.將產(chǎn)物一充分溶解于30ml的四氫呋喃(THF)中，加入三乙胺及0.48g硒粉加熱回流至充分反應(yīng)，生成深黃色液體；對(duì)所述深黃色液體使用硅藻土過(guò)濾，得濾液，經(jīng)旋蒸、稀鹽酸酸化后，再加乙酸乙酯萃取兩次，得有機(jī)層；對(duì)有機(jī)層繼續(xù)用蒸餾水洗去過(guò)量的酸后，再用飽和食鹽水分離掉過(guò)量的水，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾取有機(jī)層并經(jīng)旋蒸后，得產(chǎn)物二。所述步驟二為無(wú)水無(wú)氧反應(yīng)。

步驟三.稱取0.02mmol賴氨酸三聚體，加三乙胺調(diào)pH到7，再加入2.8 l三乙胺。同時(shí)取5μl的產(chǎn)物二溶于250μlDMF和65 l水的混和溶劑中。所配制的兩個(gè)溶液混合后，先在零下80攝氏度存放4.5min，然后在4攝氏度反應(yīng)2h，之后用冰乙醚沉降得到產(chǎn)物三。

步驟四.將產(chǎn)物三溶解于甲醇125μl和超純水42μl的混合溶劑中，加入2.1mg氫氧化鋰一水合物(LiOH·H₂O)，混合均勻，放置在零下80攝氏度4.5min以減緩初始反應(yīng)速率，然后在4攝氏度環(huán)境下充分反應(yīng)，鹽酸酸化后進(jìn)行冰乙醚沉降處理并使用高效液相色譜法(HPLC)純化，得到硒脲類SIRT5抑制彈頭及含有它的硒脲類SIRT5抑制劑。

實(shí)施例2.一個(gè)含有硒脲類SIRT1/2/3抑制彈頭的抑制劑(圖1)的化學(xué)合成。該化合物的合成過(guò)程如圖3所示，具體步驟如下：

步驟一.2mmol CH₃NHCHO溶于6ml的DCM中，加3mmol伯吉斯試劑，回流反應(yīng)2h；加5ml的DCM稀釋，用5ml蒸餾水分液兩次，棄水層；2ml飽和食鹽水分液，保留有機(jī)層。有機(jī)層中加入無(wú)水硫酸鈉干燥，經(jīng)過(guò)濾，旋蒸，得到產(chǎn)物一。

步驟二.將產(chǎn)物一充分溶解于24ml四氫呋喃(THF)中，加入三乙胺及0.72g硒粉加熱回流5h，生成粗品；對(duì)所述粗品使用硅藻土過(guò)濾，得濾液，經(jīng)旋整、稀鹽酸酸化后，再加乙酸乙酯萃取兩次，得有機(jī)層；對(duì)有機(jī)層繼續(xù)用蒸餾水洗去過(guò)量的酸后，再用飽和食鹽水分離掉過(guò)量的水，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾取有機(jī)層并經(jīng)旋蒸后，得產(chǎn)物二。所述步驟二為無(wú)水無(wú)氧反應(yīng)。

步驟三.稱取0.02mmol賴氨酸三聚體，加三乙胺調(diào)pH到7，再加入2.8 l三乙胺。同時(shí)取5μl的產(chǎn)物二溶于250μlDMF和65 l水的混和溶劑中。所配制的兩個(gè)溶液混合后，先在零下80攝氏度存放5min，然后在4攝氏度反應(yīng)2h，之后用冰乙醚沉降產(chǎn)物并使用高效液相色譜法(HPLC)純化，得到硒脲類SIRT1/2/3抑制彈頭及含有它的硒脲類SIRT1/2/3抑制劑。

實(shí)施例3.一個(gè)含有硒脲類SIRT6抑制彈頭的抑制劑(圖1)的化學(xué)合成。該化合物的合成過(guò)程如圖4所示。

步驟一.通過(guò)固相多肽合成(SPPS)的方法，側(cè)鏈完全保護(hù)的五肽被接在MBHA樹(shù)脂上。

步驟二.經(jīng)1％的TFA/DMF溶液處理，中間位置的賴氨酸側(cè)鏈被選擇性地脫保護(hù)釋放出游離的氨基。

步驟1a.1mmol H₃C(CH₂)₁₁NHCHO溶于10ml的DCM，加1.6mmol伯吉斯試劑，回流反應(yīng)3h；加5ml的DCM稀釋，用15ml蒸餾水分液兩次，棄水層；10ml飽和食鹽水分液，保留有機(jī)層；有機(jī)層中加入無(wú)水硫酸鈉干燥，經(jīng)過(guò)濾，旋蒸，得到產(chǎn)物一。

步驟1b.將產(chǎn)物一充分溶解于15ml四氫呋喃(THF)中，加入0.97ml三乙胺及0.24g硒粉加熱回流至充分反應(yīng)，生成粗品；對(duì)所述粗品使用硅藻土過(guò)濾，得濾液，經(jīng)旋蒸、稀鹽酸酸化后，再加乙酸乙酯萃取兩次，得有機(jī)層；對(duì)有機(jī)層繼續(xù)用蒸餾水洗去過(guò)量的酸后，再用飽和食鹽水分離掉過(guò)量的水，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾取有機(jī)層并經(jīng)旋蒸后，得產(chǎn)物二。所述步驟1b為無(wú)水無(wú)氧反應(yīng)。

步驟三.取5μl的產(chǎn)物二溶于250μl DMF和65 l水的混和溶劑中，然后將此溶液與步驟二得到的樹(shù)脂混合，先在零下80攝氏度存放5.5min，之后在4攝氏度反應(yīng)2h，然后樹(shù)脂用DMF和DCM洗滌，并用真空泵干燥，得到仍連接在樹(shù)脂上的含有硒脲類SIRT6抑制彈頭的側(cè)鏈完全保護(hù)的五肽。

步驟四.步驟三得到的干燥樹(shù)脂與TFA/DCM/H₂O的混合溶劑混勻，在室溫反應(yīng)4h后過(guò)濾，濾液經(jīng)旋蒸濃縮后用冰乙醚沉降產(chǎn)物并使用高效液相色譜法(HPLC)純化，得到硒脲類SIRT6抑制彈頭及含有它的硒脲類SIRT6抑制劑。

實(shí)施例4.另一個(gè)含有硒脲類SIRT5抑制彈頭的抑制劑的化學(xué)合成。該化合物的合成如圖5所示，具體過(guò)程如下：

步驟一.3mmol H₃COOC(CH₂)₂NHCHO溶于15ml的DCM中，加3.6mmol伯吉斯試劑，回流反應(yīng)2h，生成黃色液體；加10ml的DCM稀釋，用10ml蒸餾水分液兩次，棄水層；5ml飽和食鹽水分液，保留有機(jī)層；有機(jī)層中加入無(wú)水硫酸鈉干燥，經(jīng)過(guò)濾，旋蒸，得到產(chǎn)物一。

步驟二.將產(chǎn)物一充分溶解于30ml四氫呋喃(THF)中，加入三乙胺及0.48g硒粉加熱回流至充分反應(yīng)，生成深黃色液體；對(duì)所述深黃色液體使用硅藻土過(guò)濾，得濾液，經(jīng)旋蒸、稀鹽酸酸化后，再加乙酸乙酯萃取兩次，得有機(jī)層；對(duì)有機(jī)層繼續(xù)用蒸餾水洗去過(guò)量的酸后，再用飽和食鹽水分離掉過(guò)量的水，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾取有機(jī)層并經(jīng)旋蒸后，得產(chǎn)物二。所述步驟二為無(wú)水無(wú)氧反應(yīng)。

步驟三.取5μl的產(chǎn)物二溶于250μl DMF和65 l水的混合溶劑中，然后將此溶液與0.02mmol如圖5所示的環(huán)肽混合，先在零下80攝氏度存放4.5min，之后在4攝氏度反應(yīng)2h，旋蒸后得到產(chǎn)物三。

步驟四.產(chǎn)物三與TFA/DCM/H₂O的混合溶劑混勻，在室溫反應(yīng)4h后旋蒸濃縮，之后用冰乙醚沉降產(chǎn)物并使用高效液相色譜法(HPLC)純化，得到產(chǎn)物四。

步驟五.產(chǎn)物四然后溶解于甲醇125μl和超純水42μl的混合溶劑中，加入2.1mg氫氧化鋰一水合物(LiOH·H₂O)，混合均勻，放置在零下80攝氏度4.5min以減緩初始反應(yīng)速率，然后在4攝氏度環(huán)境下充分反應(yīng)，鹽酸酸化后進(jìn)行冰乙醚沉降處理并使用高效液相色譜法(HPLC)純化，得到最終產(chǎn)物即另一個(gè)含有硒脲類SIRT5抑制彈頭的抑制劑。