本發(fā)明涉及一種海帶多糖陽離子陽離子衍生物及其制備方法，以及在延長食管癌患者生存期方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
多糖一類由單糖聚合而成的多聚糖，是由醛糖或酮糖通過苷鏈連接而成；海帶多糖，狹義上講，就是指昆布多糖。由于人們逐漸淡化"海帶"與"昆布"的區(qū)別，因此叫"昆布多糖"也叫"海帶多糖"。廣義上講，是指從海帶中提純的多糖成分，包括海帶寡糖、褐藻糖膠、海帶淀粉等。腫瘤細胞由于基因突變，能夠在人體內(nèi)無限繁殖。海帶多糖中的褐藻糖膠，可以通過激活巨噬細胞，產(chǎn)生細胞毒素，抑制腫瘤細胞增殖而殺死腫瘤細胞;另外，海帶多糖也可以通過抑制腫瘤血管生成而抑制腫瘤生長，也可以直接抑制腫瘤細胞生長。研究表明，海帶多糖中的褐藻糖膠，可以使癌細胞的基質(zhì)和同質(zhì)黏附性下降，細胞分離率增強，細胞穿過基底膜能力減弱。也就是說，海帶多糖可使細胞的惡性表型發(fā)生變化，使其轉(zhuǎn)移能力受到抑制。除此之外，海帶多糖可以增加癌細胞對化療藥物的敏感性。
近年來很多研究發(fā)現(xiàn)通過影響腫瘤細胞表面電荷可以改變腫瘤的生物學行為。腫瘤細胞膜電荷是否可以作為一個潛在的抗腫瘤藥物作用靶標，是腫瘤研究工作者亟待探究思考的問題。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的正是為了提供一種海帶多糖陽離子衍生物及其制備方法，以及在延長食管癌患者生存期方面的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的可通過下述技術(shù)措施來實現(xiàn)：
本發(fā)明的海帶多糖陽離子衍生物是由以下重量百分比（或份數(shù)）的原料制備而成：它是由以下重量份數(shù)的原料制備而成：海帶多糖粉末90-110份，醚化劑3-氯-2-羥丙基三甲基氯化銨2-6份，水120-140份，氫氧化鈉1-3份。
上述海帶多糖陽離子衍生物的制備方法包括以下步驟：首先稱取原料海帶多糖粉末、醚化劑3-氯-2-羥丙基三甲基氯化銨、水、氫氧化鈉；然后將上述原料混合并置于50℃的水浴中攪拌反應(yīng)0.5小時；反應(yīng)結(jié)束后，用pH 計測量反應(yīng)后溶液的 pH值，同時用 1 mol/L的 HCl中和至 pH6. 5左右，最后過濾，干燥，即可得成品；具體反應(yīng)式為：
上述海帶多糖陽離子衍生物可作為抑制食管癌細胞增殖的食品，也可作為輔助化療的保健品，用于延長食管癌患者的生存期和減輕化療副作用。
本發(fā)明的有益效果如下：
本發(fā)明的海帶多糖陽離子衍生物是一種陽離子化合物，可以抑制食管癌細胞增殖，延長食管癌患者的生存期，最大的好處是無化療副作用，不會抑制骨髓細胞，不會造成患者脫發(fā)及肝腎損傷。
具體實施方式
實施例1
本發(fā)明的海帶多糖陽離子衍生物是由以下重量百分比的原料制備而成：海帶多糖粉末108份，醚化劑3-氯-2-羥丙基三甲基氯化銨4份，水138份，氫氧化鈉2份。
上述海帶多糖陽離子衍生物的制備方法包括以下步驟：首先稱取原料海帶多糖粉末108份，醚化劑3-氯-2-羥丙基三甲基氯化銨4份，水138份，氫氧化鈉2份；然后將上述原料混合并置于50℃的水浴中攪拌反應(yīng)0.5小時；反應(yīng)結(jié)束后，用pH 計測量反應(yīng)后溶液的 pH值，同時用 1 mol/L的 HCl中和至 pH6. 5左右，最后過濾，干燥，即可得成品。
上述海帶多糖陽離子衍生物是一種陽離子化合物，具有抑制食管癌細胞增殖的效果，具體實驗過程是：
1、細胞培養(yǎng)
EC9706食管癌細胞用含10％胎牛血清、100 mg／ml鏈霉素、100mg／ml青霉素的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，放在37℃，5％CO：培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至對數(shù)生長期。海帶多糖陽離子衍生物濃度為100μg／mL、200μg／mL、300mμgg／mL、，每種濃度溶液10mL，0．22I．Lm濾膜過濾除菌，40C保存?zhèn)溆谩?/p>
2、細胞生長抑制試驗MTT
MTT比色法測定細胞增殖抑制率。收集對數(shù)生長期細胞接種于96孔板中，調(diào)整細胞密度為1×105個·mL-1，每孔100 μl。加藥組加入以上3種不同濃度的海帶多糖陽離子衍生物液，空白對照組只加培養(yǎng)液。每個劑量設(shè)12個平行孔，分別培養(yǎng)12，24和48 h，加入5 g·L-1四甲基唑氮藍20μl,繼續(xù)培養(yǎng)，4 h后，棄培養(yǎng)液，加入DMS0150μl完全顯色后采用酶標儀測定各孔490nm(OD)值。按下列公式計算細胞生長抑制率(1nhibition mte，lR)。IR=(對照組OD一實驗組OD)／(對照組OD一空白組OD)×100％。
不同濃度海帶多糖陽離子衍生物對EC9706細胞增殖的影響見下表，MTT比色法顯示，對照組細胞呈現(xiàn)正常的生長周期，不同濃度的海帶多糖陽離子衍生物隨著濃度增加與對照組相比較有明顯差異，具體數(shù)據(jù)見表1。
實施例2
本發(fā)明的海帶多糖陽離子衍生物，它是由以下重量百分比的原料制備而成，海帶多糖粉末91份，醚化劑3-氯-2-羥丙基三甲基氯化銨2份，水123份，氫氧化鈉1份，其制備方法如實施例1。
海帶多糖陽離子衍生物可作為輔助化療的保健品，用于延長食管癌患者的生存期和減輕化療副作用，其實驗過程是：將中晚期食管癌患者40例隨機分為兩組，對照組20例給予常規(guī)化學治療，觀察組20例給予化療輔以海帶多糖陽離子衍生物治療。觀察記錄兩組患者的生存期和毒副作用情況。結(jié)果觀察組的生存期顯著長于對照組（P＜0.05）。觀察組患者的消化道毒性癥狀得到顯著改善，對照組無明顯改善，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P ＜０.05）。骨髓抑制情況：治療組無一例患者出現(xiàn)明顯的骨髓抑制現(xiàn)象，而對照組有13例出現(xiàn)明顯的骨髓抑制現(xiàn)象，并以白細胞及血紅蛋白下降為甚，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。生存情況：觀察組中位生存期18個月，對照組11個月，觀察組中經(jīng)生存期顯著長于對照組（P＜0.05），兩組生存率比較差異有統(tǒng)計學意義，其結(jié)果見表2。
實施例3
本發(fā)明的海帶多糖陽離子衍生物，它是由以下重量百分比的原料制備而成，海帶多糖粉末100份，醚化劑3-氯-2-羥丙基三甲基氯化銨2份，水123份，氫氧化鈉1份，其制備方法如實施例1。
將中晚期食管癌放療后患者80例隨機分為兩組，對照組40例放療后給予常規(guī)治療，觀察組40例給常規(guī)治療（因各種原因放棄醫(yī)院治療）輔以海帶多糖陽離子衍生物治療，患者每日每次口服海帶多糖陽離子衍生物0.5g,bid。觀察記錄兩組患者的生存期和毒副作用情況。結(jié)果觀察組的生存期顯著長于對照組（P＜0.05）。 ２組比較差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05），其結(jié)果見表3。
表1不同濃度海帶多糖陽離子衍生物對EC9706細胞增殖的影響（,n=6）
表2兩組患者生存情況分析40例（%）
表3兩組放療后患者生存情況分析80例（%）