本發明涉及醫藥化學領域，具體涉及一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A二氫嘧啶類化合物及其合成方法。

背景技術：

腫瘤已嚴重威脅到人類的健康，尋找有效安全、毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是腫瘤藥物研發工作者孜孜以求的目標。隨著藥物化學的發展，以嘧啶環為結構母核的化合物在腫瘤治療中的作用引起廣泛關注。

甘草查爾酮A被視為脹果甘草的種屬特異性成分，其結構如下所示。

近年來，研究發現甘草查爾酮A具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、降脂、解痙和抗瘧抗寄生蟲等多種生物活性，在醫藥領域具有很大的開發價值。但甘草查爾酮A是平面性強的分子，水溶性差，所以，通過合理、安全的結構修飾來增強甘草查爾酮A的水溶性，開發天然產物甘草查爾酮A的更多生物活性成為亟待解決的問題。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A二氫嘧啶類化合物及其合成方法。

本發明的實現過程如下：

結構通式（I）所示的化合物，

其中：R為C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的芐基、硝基；

所述的取代為單取代或多取代，取代基為：鹵素、C1-C4的烷氧基、氰基、三氟甲基、苯氧基。

結構通式（I）所示的化合物的合成方法，以甘草查爾酮A、脲類化合物為原料，以有機堿為催化劑，在甲苯作為反應溶劑的條件下進行合成；

。

具體來說，包括如下步驟，

（1）向反應器中按摩爾比為1:1~1:1.5加入甘草查爾酮A、脲類化合物，加入有機溶劑混合均勻，加入有機堿催化劑，80℃~120℃回流反應3~8小時；

（2）將步驟（1）反應體系的固液混合物減壓濃縮后，柱層析分離提純，干燥得到目標產物。

步驟（1）中所述的甘草查爾酮A與硫脲類化合物的摩爾比優選為1:1 ~1:1.3，有機溶劑為甲苯或DMF，反應溫度優選為105℃~115℃，有機堿優選為三乙胺。

嘧啶環是很多天然化合物和合成藥物中的核心結構單元，作為雜環化合物中的一個重要分支，嘧啶類化合物因其具有高效、低毒，以及其環上取代基可以多方位的變換而在藥物領域中得到廣泛應用。將嘧啶環引入甘草查爾酮A的化學結構中，有望增強其生物活性，提高選擇性，具有重要的理論價值和實際應用價值。

本發明的優點在于：原料環保，生產成本低，操作安全性高，反應條件溫和，可實現反應原料的充分利用，適用于工業化生產，解決了現有技術產率低的問題，同時將嘧啶環引入到甘草查爾酮A的化學結構中，對探究該類化合物的生物活性與總結構效關系具有重要的理論價值和應用價值。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步闡述。這些實施例僅是出于解釋說明的目的，而不限制本發明的范圍和實質。

一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A二氫嘧啶類化合物的合成方法包括如下步驟：

（1）向反應器中按摩爾比為1:1~1:1.5加入甘草查爾酮A、脲類化合物，加入甲苯或DMF混合均勻，其中溶劑體積小于反應器容積的2/3，加入有機堿催化劑三乙胺，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到80℃~120℃，回流反應3~8小時；

（2）反應過程中使用薄層色譜追蹤，及時監測反應的進行程度，待原料反應完全后停止加熱，撤去冷凝裝置；

（3）將步驟（2）反應體系的固液混合物減壓濃縮后，柱層析分離提純，干燥得到目標產物。

本發明部分優選實施方案中的化合物結構式如下所示：

實施例1

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-甲基-5,6-二氫嘧啶-2（1H ）-酮（1）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和56.92mg(1.3mmol) 1-甲基脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應3小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（113.41mg），總收率48.65%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 3.47 (3H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 156.1, 155.0, 154.0, 148.8, 133.7, 129.3, 129.1, 125.2, 116.4, 116.0, 111.1, 103.8, 56.1, 53.2, 40.1, 39.8, 35.2, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 395.3635, found: 395.3042

實施例2

1-芐基-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H ） - 酮（2）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和115.39mg(1.3mmol) 1-芐基脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應5小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（121.79mg），總收率43.79%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.23-7.26(5H, m), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, s), 4.22 (2H, s), 3.83 (3H, s), 1.81-1.66 (2H, m), 1.69 ( 6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 156.1, 155.0, 154.0, 148.8, 136.4, 133.2, 129.1, 127.9, 127.0, 125.2, 116.4,116.0,111.1, 103.8, 56.1, 51.5, 50.6, 40.8, 39.8,28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 471.4595, found: 471.3804

實施例 3

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-苯基-5,6-二氫嘧啶-2（1H ） - 酮（3）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和104.61mg(1.3mmol) 1-苯基脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（130.64mg）， 總收率48.42%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.91-7.85 (4H, m), 7.43 (2H, t), 7.19 (1H, t), 6.93 (1H, t), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, s), 3.83 (3H, s), 1.99-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 139.1, 133.2, 129.1, 128.9, 127.5, 125.2, 121.6, 116.0,111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6;HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 457.3329, found: 457.2917

實施例 4

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（鄰甲苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（4）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和115.39mg(1.3mmol) 1-（鄰甲苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應8小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（136.41mg）， 總收率49.05%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 7.83 (2H, t), 7.24 (1H, t), 7.07 (1H, t), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, s), 3.83 (3H, s), 2.12 (3H, s), 1.99-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 136.0, 134.3,133.2, 130.7, 129.3, 129.1, 125.9, 125.2, 121.6, 118.9, 116.0, 111.1, 103.8, 61.6, 56.1, 40.4, 30.8, 28.6, 17.2; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 471.4599, found：471.4302

實施例 5

1-（2-氟苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（5）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和118.43mg(1.3mmol) 1-（2-氟苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到120℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（140.11mg）， 總收率49.96%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.69 (1H, d), 7.22 (5H, m),7.01 (1H, t), 6.98 (2H, d), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, d), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 162.8, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 133.2, 129.1, 129.0, 125.2, 124.5, 123.3, 121.6, 116.0, 115.7, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 475.3234， found：475.2763

實施例 6

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（2-甲氧基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（6）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和127.68mg(1.3mmol) 1-（2-甲氧基苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到105℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（141.72mg）， 總收率49.28%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.59 (1H, d),7.08 (2H, d), 6.95 (1H, t), 6.83 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (6H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm):164.4, 160.8, 160.2, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 133.2, 129.1, 128.2, 126.0, 125.2, 121.6, 121.2, 118.3 116.0, 112.8, 111.1, 103.8, 61.6, 56.1, 55.8, 40.4, 39.8, 28.6, HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd:487.4352, found:487.4986

實施例 7

1-（2-溴苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（7）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和165.23mg(1.3mmol) 1-（2-溴苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到115℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（142.35mg）， 總收率44.98%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 7.78 (1H, d), 7.86 (1H, d), 7.37 (1H, t), 7.08 (1H, t), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, m), 3.83 (3H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s);¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.4, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 140.9, 133.2, 131.8, 129.1,128.3, 125.2, 122.6, 121.6, 116.0, 111.1, 103.8, 60.6, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6, HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd:535.1254, found: 535.2014

實施例 8

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（間甲苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（8）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和115.39mg(1.3mmol) 1-（間甲苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（147.88mg）， 總收率53.17%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.73 (1H, s), 7.68 (1H, d), 7.31 (1H, t), 6.97 (2H, m), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 2.34 (3H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 ( 6H, s);¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm):164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 139.0, 138.6, 133.2, 129.1, 128.8, 125.4, 124.6, 121.6, 121.3, 116.0, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6, 21.3, HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 471.1306, found:471.1138

實施例 9

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-1-（3-羥基苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（9）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和116.90mg(1.3mmol) 1-（3-羥基苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到80℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（147.31mg）, 總收率52.75%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 7.32 (1H, m),7.26 (1H, t), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.69 (1H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (3H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s) 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm):164.6, 160.8, 158.7, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 140.5, 133.2, 130.3, 129.1, 128.3, 125.2, 121.6, 120.3, 116.0, 114.6, 111.1, 106.3, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6,HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 473.1883, found: 473.0462

實施例 10

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（3-（三氟甲基）苯基）-5，6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮10）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和156.85mg(1.3mmol) 1-（3-（三氟甲基）苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（131.67mg），總收率42.47%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 8.12 (1H, s), 7.85 (3H, d), 7.36 (2H, d), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 139.4, 133.2, 131.2, 130.8, 129.1, 128.3, 125.2, 124.1, 121.6, 120.7, 116.0, 114.6, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd:525.4309, found:525.3367

實施例 11

1-（4-氟苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（11）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和118.43mg(1.3mmol) 1-（4-氟苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（129.11mg）， 總收率46.04%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.79 (2H, d),7.22 (2H, t), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): HRMS (ESI) for (M+H)+: 164.6, 162.9, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 134.7, 133.2, 129.1, 125.2, 123.2, 121.6, 116.0, 115.7, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6; calcd: 475.4234, found: 475.3869

實施例 12

1-（4-氯苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（12）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和131.07mg(1.3mmol) 1-（4-氯苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（140.22mg）， 總收率48.32%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.88 (2H, d), 7.85 (2H, d),7.47 (2H, d), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (3H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 134.2, 133.2, 129.1, 129.0, 126.6, 125.2, 121.6, 116.0, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 491.8781, found: 491.7201

實施例 13

1-（4-氨基苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（13）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和116.15mg(1.3mmol) 1-（4-氨基苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（139.67mg）， 總收率50.12%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d),7.05 (2H, d), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.61 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 6.27 (2H, s), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 144.0, 133.2, 132.2, 129.1, 127.6, 125.2, 121.6, 116.5, 116.0, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 472.3469, found: 472.2864

實施例 14

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（4-甲氧基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（14）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和127.68mg(1.3mmol) 1-（4-甲氧基苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（136.83mg）， 總收率47.58%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.92 (1H, d), 7.85 (2H, d), 6.97 (3H, m), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, t), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 158.9, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 133.2, 131.4, 129.1, 125.2, 122.6, 121.6, 116.0, 114.5, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 55.8, 40.4, 39.8, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 485.4832, found: 485.4309

實施例 15

1-（2,4-二甲基苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（15）的制備。

在反應器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和126.16mg(1.3mmol) 1-（2,4-二甲基苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（142.12mg），總收率49.62%。

棕黃色結晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：7.85 (2H, d), 7.65 (1H, d), 7.08 (1H, s), 7.02 (1H, d), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 2.34 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 143.4, 134.2, 133.2, 133.0, 131.1, 129.1, 128.3, 126.2, 125.2, 121.6, 116.0, 111.1, 103.8, 61.6, 40.4, 39.8, 28.6, 21.6, 17.5 ; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 485.4822, found: 485.4376

實施例 16 本發明化合物的抗腫瘤活性測試

對本發明的化合物進行了腫瘤細胞增殖抑制試驗,試驗方法采用常規的MTT法。

細胞株選用：人前列腺癌(PC-3)，人胃腺癌細胞(SGC-7901)，人肺癌細胞(A-549)。培養液為DMEM+15%NBS+雙抗。

樣品液的配制：用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成的100 μmol/L的溶液或者均勻的混懸液，然后用DMSO的PBS(-)稀釋，最終濃度分別為0.1,1,10,20,40,60,80,100 μmol/L。

將抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶 (5-FU) 以同樣的條件配成對照品溶液。

細胞培養：貼壁生長腫瘤細胞細胞培養于含 10% 滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素（各100萬U/L）的 1640 培養液中，置于 37℃，5% CO2，飽和濕度的二氧化碳培養箱中培養。細胞貼壁生長，每 2～3 天傳代 1 次，傳代時首先倒出培養液，PBS洗 2 次，胰酶消化后，加入新鮮的培養液吹打均勻，調整細胞至適當濃度移入新的培養瓶中，添加培養液至適量。取對數生長期細胞用于實驗。

MTT法檢測細胞活性及IC₅₀的測定：

實驗原理：活細胞線粒體中脫氫酶能將黃色的MTT還原成不溶于水的藍紫色產物甲臜 (MTT formazan),并沉積在細胞中，生成的量與活細胞數目成正比，而死細胞沒有這種功能。DMSO能溶解藍紫色結晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標儀測定的光吸收值可反映細胞存活率。

實驗方法：取對數生長期細胞，消化、計數，以 3×105/mL 的密度接種于 96 孔培養板中，每孔100 μl。培養 24小時后，將待測化合物以0.1,1,10,20,40,60,80,100 μmol/L濃度處理細胞。實驗組每個濃度設5個復孔，以含0.4% DMSO的培養液作對照。藥物作用 48小時后，去上清，每孔加入100 μl MTT（2-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-3,5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽）(1mg/mL)，繼續培養 4小時，棄上清，每孔加入100μl DMSO，振蕩混勻，用酶標儀在570 nm處測定吸光度值，采用 IC₅₀ 計算軟件求出半數抑制濃度(IC₅₀)。

試驗結果詳見表1，其中，樣品是指相應實施例中制備的甘草查爾酮A二氫嘧啶類衍生物，樣品編號對應制備實施例中所得到的化合物的具體編號。

表1 化合物對不同腫瘤細胞的半數抑制濃度IC₅₀（單位：μmol/L）

表1結果顯示，化合物1-15在所測試的3種細胞株中均表現出了不同程度的抗腫瘤活性,其中化合物11、12和5的活性較好，對細胞呈現較強的抑制效果，在特定細胞株中抗腫瘤活性優于或等同于5-氟尿嘧啶，對不同腫瘤細胞株具有明顯選擇性。綜上，本發明的甘草查爾酮A二氫嘧啶類衍生物可作為抗腫瘤候選藥物進一步進行臨床前研究，也可以做為抗腫瘤先導化合物進一步研究。