本實(shí)用新型屬于疫病檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種口蹄疫病毒RT-LAMP檢測試劑盒，可用于動物口蹄疫病毒的檢測。

背景技術(shù)：

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的以口腔黏膜、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水皰性疹為主要癥狀的急性、烈性、接觸性傳染病,又稱為“口瘡”、“辟癀”“5號病”等。FMDV主要侵害豬、牛、羊等主要家畜和其他家養(yǎng)、野生偶蹄動物，宿主范圍廣泛，易感動物多達(dá)70多種。該病傳播途徑多，速度快。大多數(shù)國家都屬于“口蹄疫疫區(qū)”，非口蹄疫的國家或區(qū)域僅占少數(shù)。2013 年，全球口蹄疫疫情集中在亞、非地區(qū)以及與亞洲相鄰的歐洲部分地區(qū)暴發(fā)，全球共有 44 個國家或地區(qū)報告發(fā)生口蹄疫疫情或分離到口蹄疫病毒。多次世界范圍內(nèi)的暴發(fā)流行，造成巨大的政治、經(jīng)濟(jì)損失。

FMDV屬于微RNA 病毒科（Picornaviridae）的口蹄疫病毒屬（Aphthovirus），與所有微RNA 病毒一樣含有單股正鏈 RNA 基因組，其長度約 8300nt，其功能如同 mRNA，編碼病毒聚蛋白。FMDV包括A 型、O型、C型、亞洲I（Asia1）型、SATⅠ型、SATⅡ型和SATⅢ型7個血清型，每個血清型又有許多不同的亞型，各血清型之間沒有交叉性免疫，同一血清型的各亞型之間僅有部分交叉免疫，使得口蹄疫的診斷和防控更加困難。在我國，口蹄疫的流行形勢比較嚴(yán)峻，目前僅分離得到 A 型、O 型和Asia 1 型。近年來，A 型和O型口蹄疫疫情不斷發(fā)生，給養(yǎng)殖戶造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。不同血清型、不同遺傳譜系口蹄疫病毒的混雜存在及周邊國家口蹄疫疫情復(fù)雜、流行毒株跨境傳播的威脅，進(jìn)一步加大了我國口蹄疫防控的復(fù)雜性和難度。因此，建立一種快速檢測口蹄疫病毒及區(qū)分血清型的方法有助于該病的防控和診治。在動物及其副產(chǎn)品的進(jìn)出口檢疫中也有著重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒于以上缺陷，本實(shí)用新型的目的是提供一種檢測靈敏度高、檢測快速的口蹄疫病毒RT-LAMP檢測試劑盒，且試劑盒在運(yùn)輸過程中對試劑管有更好的穩(wěn)固效果，在使用中拿取更方便。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的本實(shí)用新型采用如下技術(shù)方案：口蹄疫病毒RT-LAMP檢測試劑盒，包括盒體，與盒體后側(cè)面連接的盒蓋，試劑管固定座和試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)，其中所述試劑管固定座為上、下、前和后四個壁組成的方形管狀結(jié)構(gòu)，在所述上壁設(shè)置有反應(yīng)液管存放孔Ⅰ、反應(yīng)液管存放孔Ⅱ、酶溶液管存放孔、陽性對照管存放孔、陰性對照管存放孔和DEPC水管存放孔，在所述試劑管固定座的上方設(shè)置試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)，所述試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)設(shè)置有與反應(yīng)液管存放孔Ⅰ、反應(yīng)液管存放孔Ⅱ、酶溶液管存放孔、陽性對照管存放孔、陰性對照管存放孔和DEPC水管存放孔相對應(yīng)的穩(wěn)固孔。

具體地，所述試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)的上表面設(shè)置有說明書存放槽，用于存放操作說明書。

所述試劑管固定座的兩相對的邊上設(shè)置有半圓形缺口，在使用過程中便于將試劑管固定座取出，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時便于試劑管的取放。

所述試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)的兩相對的邊上設(shè)置有凹槽，便于使用時取出試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)。

本實(shí)用新型發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：（1）試劑盒簡便、易保存、取用試劑方便；（2）不需要特殊的試劑與設(shè)備；（3）特異性好：應(yīng)用六個區(qū)域，四條引物，根據(jù)是否擴(kuò)增就能判斷靶標(biāo)物質(zhì)的存在與否，陽性率可達(dá)99.2%，假陽性率小于0.1%；（4）快速、高效簡便的擴(kuò)增，整個檢測時間僅需要1小時；（5）鑒定簡便，可通過肉眼可視化觀察檢測結(jié)果，無需電泳等其他分析步驟，陽性結(jié)果為綠色，陰性結(jié)果為橙色；（6）操作簡便實(shí)用，可廣泛應(yīng)用于基層口岸臨床口蹄疫病毒篩查。

附圖說明

本實(shí)用新型的裝置可以通過附圖給出的非限定性實(shí)施例進(jìn)一步說明。

圖1為本實(shí)用新型的俯視結(jié)構(gòu)示意圖（不含試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)）；

圖2為本實(shí)用新型的縱切面結(jié)構(gòu)示意圖；

圖中：1-盒體，2-試劑管固定座，3-試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)，4-盒蓋，5-反應(yīng)液管存放孔Ⅰ，6-反應(yīng)液管存放孔Ⅱ，7-酶溶液管存放孔，8-陽性對照管存放孔，9-陰性對照管存放孔，10-DEPC水管存放孔，11-半圓形缺口，12-說明書存放槽，13-凹槽，14-穩(wěn)固孔。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對本實(shí)用新型做進(jìn)一步說明。但是應(yīng)該理解，這些描述只是示例的，而非要限制本發(fā)明的范圍。此外，在以下說明中，省略的對公知結(jié)構(gòu)和技術(shù)的描述，以避免不要混淆本發(fā)明的概念。

參見圖1和圖2，口蹄疫病毒RT-LAMP檢測試劑盒，包括盒體1，與盒體1后側(cè)面連接的盒蓋4，其特征在于：還包括試劑管固定座2和試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)3，其中所述試劑管固定座2為上、下、前和后四個壁組成的方形管狀結(jié)構(gòu)，在所述上壁設(shè)置有反應(yīng)液管存放孔Ⅰ5、反應(yīng)液管存放孔Ⅱ6、酶溶液管存放孔7、陽性對照管存放孔8、陰性對照管存放孔9和DEPC水管存放孔10，反應(yīng)液管存放孔Ⅰ5和反應(yīng)液管存放孔Ⅱ6中存放反應(yīng)液管5’，酶溶液管存放孔7中存放酶溶液管，陽性對照管存放孔8中存放陽性對照管，陰性對照管存放孔9中存放陰性對照管9’，DEPC水管存放孔10中存放DEPC水管10’。在所述試劑管固定座2的上方設(shè)置試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)3，所述試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)3設(shè)置有與反應(yīng)液管存放孔Ⅰ5、反應(yīng)液管存放孔Ⅱ6、酶溶液管存放孔7、陽性對照管存放孔8、陰性對照管存放孔9和DEPC水管存放孔10相對應(yīng)的穩(wěn)固孔14，使試劑管在試劑盒中更穩(wěn)固，便于運(yùn)輸。

所述試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)3的上表面設(shè)置有說明書存放槽12，用于存放操作說明書。所述試劑管固定座2的兩相對的邊上設(shè)置有半圓形缺口11。所述試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)3的兩相對的邊上設(shè)置有凹槽13。使得試劑管固定座2和試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)3更容易取出。

試劑盒的盒體1、盒蓋4、試劑管固定座2和試劑管穩(wěn)固結(jié)構(gòu)3均由紙板制成。

兩支反應(yīng)液管所含有組分均一致，均包括口蹄疫病毒內(nèi)引物、外引物、環(huán)引物、2*LAMP Buffer緩沖液、鈣黃綠素溶液；酶溶液管含有5U/μL Bst DNA聚合酶和反轉(zhuǎn)錄酶的混合液；陽性對照管，管內(nèi)為口蹄疫病毒陽性重組質(zhì)粒DNA；陰性對照管，管內(nèi)為無口蹄疫病毒感染的健康牛血清基因組DNA;DEPC水管，管內(nèi)為無RNA酶的DEPC水。

具體的檢測步驟為：1）制備待檢測樣本的模板RNA，選用商品化的病毒RNA提取試劑盒，提取待測樣本中的病毒RNA。2）擴(kuò)增體系為：20μL擴(kuò)增反應(yīng)液，2μL酶混合液，3μL待檢測樣本模板RNA或陽性對照或陰性對照，反應(yīng)總體積為25μL；3）將配制好的步驟2）中的擴(kuò)增反應(yīng)體系的PCR管置于63 ℃恒溫反應(yīng)60 min，80℃反應(yīng)10 min終止反應(yīng)。4）結(jié)果判定：反產(chǎn)物顯現(xiàn)綠色則為陽性，橙色則為陰性。