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一種含有質粒的大腸桿菌的發酵方法和生產質粒的方法與流程

文檔序號:41761016發布日期:2025-04-29 18:30閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種含有質粒的大腸桿菌的發酵方法,其包括兩級發酵:

2.如權利要求1所述的發酵方法,其特征在于,s1和s2采用發酵培養基為發酵基礎培養基,其包含有磷酸氫二鉀三水合物、磷酸二氫鉀、酵母浸出粉、甘油、消泡劑、硫酸卡那霉素和七水硫酸鎂的液體培養基;

3.如權利要求1所述的發酵方法,其特征在于,所述s1中,一級罐留種比例為0.5%-1%,并補充與轉移到二級罐中的發酵液相等體積的新鮮發酵基礎培養基進行連續培養。

4.如權利要求1所述的發酵方法,其特征在于,所述s1中,培養溫度最優為31-33℃,更優為32℃;維持od為25-35,更優維持od為28-32,最優維持od為30。

5.如權利要求4所述的發酵方法,其特征在于,所述s2中,培養溫度最優為39-41℃,更優為40℃。

6.如權利要求1所述的發酵方法,其特征在于,所述s2中,采用的補料方式為do反饋補料,即補充發酵補料培養基,具體地補料體積35-45ml/次,補料時間3-5h,進行2-5個循環的連續發酵,優選具體地補料體積40ml/次,補料時間4h,進行3-4個循環的連續發酵;

7.如權利要求6所述的發酵方法,其特征在于,所述補料培養基配方如下:甘油300g/l;酵母粉250g/l;七水硫酸鎂1g/l;微量元素母液?10ml/l;其中微量元素母液按1000ml計,含有七水硫酸亞鐵6.95g;二水氯化鈣1.47?g;四水氯化錳9.90?g;七水硫酸鋅2.88g;六水氯化鈷0.357?g;二水氯化銅0.256?g;四水鉬酸銨1.85?g;十水硼酸鈉3.05g;濃鹽酸25ml;

8.如權利要求1至7任一項所述的發酵方法,其特征在于,所述大腸桿菌是野生型大腸桿菌或其衍生的大腸桿菌如突變的大腸桿菌,例如dh5α、dh10b、bl21、jm109、jm110、top10、hb101、xl0-gold、m110、scs10等系列大腸桿菌。

9.如權利要求1至7任一項所述的發酵方法,其特征在于,所述質粒是適合于大腸桿菌的質粒,例如puc系列質粒如puc19,plyss,prare,pgex系列載體如pgex-1λt、pgex-2t、pgex-3t,pet系列載體如pet-28a-c?(+)、ppl系列載體如ppl-lamda,pezz18、pinii系列載體如pinii-ompa1、pinii-coma1、pinii-coma2、pinii-coma3,pkk223系列載體如pkk223-3,pvax1,或穿梭載體如pyes2/nt/lacz。

10.一種生產質粒的方法,其特征在于,其包括采用如權利要求1至9任一項所述的發酵方法獲得含有質粒的大腸桿菌的步驟,以及從中收集所述質粒的步驟。


技術總結
本發明公開一種含有質粒的大腸桿菌的發酵方法和生產質粒的方法。所述發酵方法包括下述二級發酵步驟:一級罐發酵,采用恒溫發酵30?34℃發酵,維持OD為20?40;二級罐發酵,將一級罐中的發酵液轉移到二級罐中,溫度恒溫在37℃至42℃發酵,且采用補料發酵的方式進行培養。本發明采用兩級發酵的方式,可以連續發酵至少50h以上,二級罐可以連續生產至少4個循環。在一個發酵周期內,單位時間質粒產量至少提高300%以上,提升效果明顯。且大大縮短質粒高效生產的周期,且連續循環還可繼續進行,在整個發酵周期內,種子培養和前期及后處理的占比時間會大大縮短,可以節省大量發酵時間成本,可以達到以相同時間來高產質粒的目的。

技術研發人員:張璐楠,楊鴻凱,孫辛亮
受保護的技術使用者:艾棣維欣(蘇州)生物制藥有限公司
技術研發日:
技術公布日:2025/4/28
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