1.一種含有質粒的大腸桿菌的發酵方法,其包括兩級發酵:
2.如權利要求1所述的發酵方法,其特征在于,s1和s2采用發酵培養基為發酵基礎培養基,其包含有磷酸氫二鉀三水合物、磷酸二氫鉀、酵母浸出粉、甘油、消泡劑、硫酸卡那霉素和七水硫酸鎂的液體培養基;
3.如權利要求1所述的發酵方法,其特征在于,所述s1中,一級罐留種比例為0.5%-1%,并補充與轉移到二級罐中的發酵液相等體積的新鮮發酵基礎培養基進行連續培養。
4.如權利要求1所述的發酵方法,其特征在于,所述s1中,培養溫度最優為31-33℃,更優為32℃;維持od為25-35,更優維持od為28-32,最優維持od為30。
5.如權利要求4所述的發酵方法,其特征在于,所述s2中,培養溫度最優為39-41℃,更優為40℃。
6.如權利要求1所述的發酵方法,其特征在于,所述s2中,采用的補料方式為do反饋補料,即補充發酵補料培養基,具體地補料體積35-45ml/次,補料時間3-5h,進行2-5個循環的連續發酵,優選具體地補料體積40ml/次,補料時間4h,進行3-4個循環的連續發酵;
7.如權利要求6所述的發酵方法,其特征在于,所述補料培養基配方如下:甘油300g/l;酵母粉250g/l;七水硫酸鎂1g/l;微量元素母液?10ml/l;其中微量元素母液按1000ml計,含有七水硫酸亞鐵6.95g;二水氯化鈣1.47?g;四水氯化錳9.90?g;七水硫酸鋅2.88g;六水氯化鈷0.357?g;二水氯化銅0.256?g;四水鉬酸銨1.85?g;十水硼酸鈉3.05g;濃鹽酸25ml;
8.如權利要求1至7任一項所述的發酵方法,其特征在于,所述大腸桿菌是野生型大腸桿菌或其衍生的大腸桿菌如突變的大腸桿菌,例如dh5α、dh10b、bl21、jm109、jm110、top10、hb101、xl0-gold、m110、scs10等系列大腸桿菌。
9.如權利要求1至7任一項所述的發酵方法,其特征在于,所述質粒是適合于大腸桿菌的質粒,例如puc系列質粒如puc19,plyss,prare,pgex系列載體如pgex-1λt、pgex-2t、pgex-3t,pet系列載體如pet-28a-c?(+)、ppl系列載體如ppl-lamda,pezz18、pinii系列載體如pinii-ompa1、pinii-coma1、pinii-coma2、pinii-coma3,pkk223系列載體如pkk223-3,pvax1,或穿梭載體如pyes2/nt/lacz。
10.一種生產質粒的方法,其特征在于,其包括采用如權利要求1至9任一項所述的發酵方法獲得含有質粒的大腸桿菌的步驟,以及從中收集所述質粒的步驟。