本公開涉及分子生物學領域，并且特別地涉及可用于鑒定豆科植物中增強對亞洲大豆銹病(asr)的致病因子的抗性的基因的組合物和方法。本公開進一步涉及能夠與由增強asr抗性的基因編碼的多肽相互作用的效應多肽、使用這些多肽序列來分離由增強asr抗性的基因編碼的多肽的方法以及用于選擇植物以在栽培區種植的方法。

背景技術：

1、大豆病害是大豆生產的主要威脅，導致產量損失和籽粒品質降低。由活體營養真菌豆薯層銹菌(phakopsora?pachyrhizi)和(在較小程度上)密切相關的真菌山螞蝗層銹菌(phakopsora?meibomiae)引起的亞洲大豆銹病(asr)可引起范圍從10％-90％的產量損失。

2、因此，需要開發用于鑒定asr抗性基因的組合物和方法。本公開提供了此類組合物和方法。

技術實現思路

1、提供了核酸構建體和表達盒，這些核酸構建體和表達盒包含可操作地連接到調節元件的編碼效應多肽或其功能片段的多核苷酸，該效應多肽與seq?id?no:1-8或10-309中任一個具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性。在某些實施例中，至少一個調節序列是啟動子(例如，異源啟動子)。

2、還提供了嵌合多肽，這些嵌合多肽包含可操作地連接到異源肽(例如，蛋白質標簽)的效應多肽或其功能片段，該效應多肽包含與seq?id?no:1-8或10-309中任一個具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性的氨基酸序列。進一步提供了編碼這些嵌合多肽的多核苷酸以及包含編碼這些嵌合多肽的這些多核苷酸的核酸構建體和表達盒。

3、還提供了宿主細胞(例如，細菌細胞、真菌細胞、植物細胞)，這些宿主細胞包含編碼本文所述的效應多肽、其功能片段或嵌合多肽的多核苷酸(例如，分離的多核苷酸、重組多核苷酸、核酸構建體、表達盒)中的任一種。

4、提供了用于鑒定ccrpp1樣蛋白的方法，這些方法包括鑒定結合嵌合多肽的一種或多種多肽，該嵌合多肽包含可操作地連接到異源肽(例如，蛋白質標簽)的效應多肽或其功能片段，該效應多肽包含與seq?id?no:1-8中任一個具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在某些實施例中，該方法進一步包括在宿主細胞中表達該嵌合多肽和該一種或多種鑒定出的相互作用多肽，以及測定該宿主細胞的hr細胞死亡、h2o2積累、標記基因或標記代謝物表達或其任何組合的存在。

5、還提供了用于鑒定ccrpp1樣蛋白的方法，這些方法包括鑒定結合效應多肽或其功能片段的一種或多種多肽，該效應多肽與seq?id?no:1-8中任一個具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性。在某些實施例中，該方法進一步包括在宿主細胞中表達該效應多肽或其功能片段和該一種或多種鑒定出的相互作用多肽，以及測定該宿主細胞的hr細胞死亡、h2o2積累、標記基因或標記代謝物表達或其任何組合的存在。

6、進一步提供了用于選擇植物用以在栽培區種植的方法，這些方法包括提供包含來自栽培區的多個豆薯層銹菌分離株的樣品，測定包含與seq?id?no:1-8中任一個具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性的核苷酸序列的多核苷酸的存在，以及當該多核苷酸存在時選擇表達ccrpp1多肽、ccrpp1樣多肽或其組合的植物用以在該栽培區種植。

7、還提供了用于鑒定asr26等位基因的方法，這些方法包括提供包含多個豆薯層銹菌分離株的群體，以及在該群體中檢測asr26等位基因。在某些實施例中，該方法進一步包括在宿主細胞中表達鑒定出的asr26等位基因和ccrpp1多肽、ccrpp1樣多肽或其組合，以及測定該宿主細胞的hr細胞死亡、h2o2積累、標記基因或標記代謝物表達或其任何組合的存在。

8、提供了用于鑒定不與ccrpp1競爭的asr抗性多肽的方法，這些方法包括鑒定結合效應多肽或其功能片段的一種或多種多肽，該效應多肽與seq?id?no:10-309中任一個具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性，測定該一種或多種鑒定出的多肽與與seq?id?no:1-8中任一個具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性的多肽的相互作用，以及選擇不與與seq?id?no:1-8中任一個具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性的該多肽相互作用的一種或多種多肽。

9、進一步提供了用于檢測樣品中的可溶性ccrpp1蛋白的方法，這些方法包括孵育混合物，該混合物包含與seq?id?no:1-8中任一個具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的asr26多肽和含有ccrpp1蛋白的樣品，從該混合物中分離該asr26多肽和與其結合的多肽，以及在所分離的asr26多肽和與其結合的多肽中檢測ccrpp1蛋白的存在，從而檢測可溶性ccrpp1蛋白。

10、序列表簡述

11、根據形成本技術的一部分的以下具體實施方式和隨附序列表可以更全面地理解本公開。本文所附的序列描述和序列表符合如在37c.f.r.§§1.831-1.835中所規定的專利申請中關于核苷酸和氨基酸序列公開的規則。