本發明屬于生物檢測，具體涉及elisa檢測用抗獨特型抗體及其在抗狂犬病病毒單克隆抗體藥代動力學評價中的應用。

背景技術：

1、狂犬病是由狂犬病毒引起的人獸共患全球性傳染疾病。對于狂犬病暴露，尤其嚴重暴露者應全稱注射狂犬疫苗與抗狂犬病抗體。目前狂犬病疫苗的種類主要包括狂犬病新型滅活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗、亞單位疫苗、病毒樣顆粒疫苗和口服疫苗。

2、目前，全球上市的重組抗狂犬病病病毒單克隆有兩個，分別為印度血清研究所的sii?rmab及我國華北制藥集團的奧木替韋單抗注射液(ormutivimab?injection)。由于每種單克隆抗體具有單特異性，因此who建議使用包含能與非重疊抗原表位結合的至少兩種單克隆抗體的雞尾酒，以限制由于缺乏對流行的rabv毒株的覆蓋或突發的病毒逃逸而失敗的風險。

3、中國專利cn117771365a為申請人之前開發的一種使用劑量較低，親和力高，中和活性強的人源抗狂犬病病毒單克隆抗體制劑，該制劑由2株中和狂犬病毒不同表位的單克隆抗體r71和r92等濃度混合組成，總蛋白濃度為1mg/ml。藥物規格為1500iu/mg/ml，在食蟹猴體內最低給藥劑量為50iu/kg。

4、但是在該制劑的藥代動力學檢測中，使用滅活的狂犬病病毒顆粒或是狂犬病病毒糖蛋白都無法區分2株單克隆抗體，因此需要篩選并表達能分別與r71或r92特異性結合的蛋白。

5、通常，單克隆抗體在建立藥代動力學檢測方法時，elisa因其高通量、低成本的特點成為最常用的檢測方法。雙抗體夾心elisa具有高靈敏度和高特異性，但是需要2株針對藥物的特異性抗體分別作為包被抗體和檢測抗體，檢測抗體與目標蛋白的結合位點需要有區別于目標蛋白與包被抗體的結合位點，會涉及抗體配對的問題，需要進行進一步探究。

技術實現思路

1、為了解決上述問題，本發明提供了elisa檢測用抗獨特型抗體及其在抗狂犬病病毒單克隆抗體藥代動力學評價中的應用。

2、一方面，本發明提供了一對elisa檢測用的抗獨特型抗體，所述的抗獨特型抗體為包被抗體38h9g8c12和檢測抗體53c7b12c9。

3、具體地，所述包被抗體38h9g8c12含有序列如seq?id?no.1、seq?id?no.2和seq?idno.3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3中的任意一個或多個；或者與seq?id?no.1、seq?id?no.2和seq?id?no.3分別至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列；

4、和/或

5、含有序列如seq?id?no.4、seq?id?no.5和seq?id?no.6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3中的任意一個或多個，或者與seq?id?no.4、seq?id?no.5或seq?id?no.6分別至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列。

6、進一步具體地，所述包被抗體38h9g8c12含有序列分別如seq?id?no.1、seq?idno.2和seq?id?no.3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或含有序列分別如seq?id?no.4、seqid?no.5和seq?id?no.6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

7、seq?id?no.1：syfmh；

8、seq?id?no.2：yidpyndgtkynekfkg；

9、seq?id?no.3：gggypptgyfdv；

10、seq?id?no.4：rasksvstsgysymh；

11、seq?id?no.5：lasnles；

12、seq?id?no.6：qhsrelplt。

13、具體地，所述檢測抗體53c7b12c9含有序列如seq?id?no.7、seq?id?no.8和seq?idno.9所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3中的任意一個或多個，或者與seq?id?no.7、seq?id?no.8和seq?id?no.9分別至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列；

14、和/或

15、含有序列如seq?id?no.10、seq?id?no.11和seq?id?no.12所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3中的任意一個或多個，或者與seq?id?no.10、seq?id?no.11和seq?id?no.12分別至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列。

16、進一步具體地，所述檢測抗體53c7b12c9含有序列分別如seq?id?no.7、seq?idno.8和seq?id?no.9所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或含有序列分別如seq?id?no.10、seqid?no.11和seq?id?no.12所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

17、seq?id?no.7：sytms；

18、seq?id?no.8：yisngggntyypdtlkg；

19、seq?id?no.9：qnygnspyamdy；

20、seq?id?no.10：kssqsllyssnqknyla；

21、seq?id?no.11：wastres；

22、seq?id?no.12：qqyysyplt。

23、具體地，所述包被抗體38h9g8c12含有序列如seq?id?no.13所示的重鏈可變區，或者與seq?id?no.13至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列；

24、和/或含有如seq?id?no.14所示的輕鏈可變區，或者與seq?id?no.14至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列。

25、進一步具體地，所述包被抗體38h9g8c12含有序列如seq?id?no.13所示的重鏈可變區，和/或含有如seq?id?no.14所示的輕鏈可變區。

26、seq?id?no.13：evqlqqsgpelvkpgasvkmsckasgytftsyfmhwvkqqpgqglewigyidpyndgtkynekfkgkatltsdkssttaymelsnltsedsavyycargggypptgyfdvwgagttvtvss。

27、seq?id?no.14：divltqspaslgvslgqratiscrasksvstsgysymhwyqqkpgqppklliylasnlesgvparfsgsgsgtdftlnihpveeedaatyycqhsrelpltfgagtkldlk。

28、具體地，所述檢測抗體53c7b12c9含有序列如seq?id?no.15所示的重鏈可變區，或者與seq?id?no.15至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列，和/或含有如seq?id?no.16所示的輕鏈可變區，或者與seq?id?no.16至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列。

29、進一步具體地，所述檢測抗體53c7b12c9含有序列如seq?id?no.15所示的重鏈可變區，和/或含有如seq?id?no.16所示的輕鏈可變區。

30、seq?id?no.15：evklvesggglvqpggslklscaasgftfrsytmswvrqtpekrlewvayisngggntyypdtlkgrftisrdnakntlylqmsslksedtamyycarqnygnspyamdywgqgtsvtvss。

31、seq?id?no.16：divmsqspsslavsvgekvtmsckssqsllyssnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrftgsgsgtdftltissvkaedlavyycqqyysypltfgagtklelk。

32、具體地，所述包被抗體38h9g8c12含有序列如seq?id?no.17所示的重鏈，或者與seq?id?no.17至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列，和/或含有如seqid?no.18所示的輕鏈，或者與seq?id?no.18至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列。

33、在本發明的某些具體實施例中，所述包被抗體38h9g8c12含有序列如seq?idno.17所示的重鏈，和/或含有如seq?id?no.18所示的輕鏈。

34、seq?id?no.17：mewswiflfllsgtagvhsevqlqqsgpelvkpgasvkmsckasgytftsyfmhwvkqqpgqglewigyidpyndgtkynekfkgkatltsdkssttaymelsnltsedsavyycargggypptgyfdvwgagttvtvss。

35、seq?id?no.18：metdtlllwvlllwvpgstgdivltqspaslgvslgqratiscrasksvstsgysymhwyqqkpgqppklliylasnlesgvparfsgsgsgtdftlnihpveeedaatyycqhsrelpltfgagtkldlk。

36、具體地，所述檢測抗體53c7b12c9含有序列如seq?id?no.19所示的重鏈，或者與seq?id?no.19至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列，和/或含有如seqid?no.20所示的輕鏈，或者與seq?id?no.20至少具有85%的序列相似性的任意一個或多個氨基酸序列。

37、在本發明的某些具體實施中，所述檢測抗體53c7b12c9含有序列如seq?id?no.19所示的重鏈，和/或含有如seq?id?no.20所示的輕鏈。

38、seq?id?no.19：mnfglsliflvlvlkgvlcevklvesggglvqpggslklscaasgftfrsytmswvrqtpekrlewvayisngggntyypdtlkgrftisrdnakntlylqmsslksedtamyycarqnygnspyamdywgqgtsvtvss。

39、seq?id?no.20：mdsqaqvlmllllwvsgtcgdivmsqspsslavsvgekvtmsckssqsllyssnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrftgsgsgtdftltissvkaedlavyycqqyysypltfgagtklelk。

40、具體地，上述抗體均為單克隆抗體。

41、另一方面，本發明提供了一種核酸分子，所述核酸分子編碼上述任一抗體。

42、再一方面，本發明提供了一種生物學表達載體，其特征在于，所述的生物學表達載體包含上述核酸分子。

43、具體地，所述生物學表達載體為原核表達載體或真核表達載體。

44、進一步具體地，所述原核表達載體包括但不限于：pet系列載體、pgex系列載體、pbad系列載體或pqe系列載體。

45、進一步具體地，所述真核表達載體包括但不限于：cmv4或psv2。

46、又一方面，本發明提供了一種宿主細胞，所述宿主細胞包含上述核酸分子和/或生物學表達載體。

47、進一步具體地，所述宿主細胞包括但不限于：大腸桿菌、釀酒酵母、馬克斯克魯維酵母、cho細胞、ns0細胞或h293t細胞。

48、又一方面，本發明提供了上述抗體在r92藥代動力學評價中的應用。

49、又一方面，本發明提供了上述抗體在制備用于檢測r92的試劑盒中的應用。

50、又一方面，本發明提供了一種試劑盒，所述試劑盒包括上述抗體。

51、具體地，所述試劑盒中還包括其他檢測r92所需的試劑。

52、進一步具體地，所述試劑包括但不限于：洗滌液、封閉液、包被液或緩沖液。

53、又一方面，本發明提供了一種通過elisa雙抗體夾心方法檢測r92藥代動力學的方法，所述方法以38h9g8c12作為包被抗體和/或以53c7b12c9作為檢測抗體。

54、與現有技術相比，本發明具有以下優點：

55、能r92特異性結合，不與可變區序列外，幾乎完全相同且同時存在與樣本中的r71結合。

56、使用本發明提供的抗體對進行elisa雙抗體夾心法檢測時，標準曲線范圍為10-130ng/ml，最小稀釋倍數為5，定量下限為10ng/ml，具有良好的選擇性、精密度與準確度、穩定性、平行性、特異性、稀釋線性，無明顯hook效應，可用于測定血清中r92的含量。