本發明涉及生物醫藥，具體地，本發明涉及一種單克隆抗體及其檢測應用。

背景技術：

1、殺傷細胞免疫球蛋白樣受體（kir3dl2）是殺傷細胞免疫球蛋白樣受體（kir）家族中的一員，主要在記憶性t細胞和自然殺傷（nk）細胞上表達，是nk細胞功能的關鍵調節因子。kir3dl2與其配體之間的相互作用，在多種疾病的發生率、進展和結果中起著重要作用，包括妊娠并發癥、病毒感染、自身免疫性疾病和血液系統惡性腫瘤等。kir3dl2的抗體或抗原結合片段在診斷、治療和研究領域中具有廣泛的應用潛力。

2、單克隆抗體在醫學診斷、治療和研究中扮演著重要角色。用于治療各種疾病，包括癌癥、自身免疫疾病和感染性疾病。然而，傳統的單克隆抗體生產方法往往成本高昂且生產過程復雜。因此，開發一種高效的核酸分子編碼單克隆抗體具有重要意義。目前，已有多項技術用于生產單克隆抗體，并且這些抗體在諸如酶聯免疫吸附試驗（elisa）和流式細胞術（facs）等應用中顯示出其獨特的價值。

3、盡管現有的單克隆抗體技術在許多方面已經取得了顯著的進展，但在提高特異性和擴大應用范圍方面，仍存在對新型單克隆抗體的需求。目前，針對kir3dl2蛋白的高特異性單克隆抗體的開發仍然是一個挑戰。此外，對于這些抗體的衍生物、編碼其氨基酸序列的核酸分子，以及它們在elisa和facs等實驗技術中的應用，也存在著進一步研究和開發的必要。

技術實現思路

1、為彌補現有技術的不足，本發明目的在于提供一種新型的單克隆抗體，該抗體針對kir3dl2蛋白具有高特異性，并且在其氨基酸序列、衍生物以及應用方面均有所創新。

2、為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

3、本發明的第一方面提供了一種抗kir3dl2蛋白的抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含如seq?id?no:2所示的重鏈可變區中的cdr1、cdr2、cdr3；所述輕鏈可變區包含如seq?id?no:6所示的輕鏈可變區中的cdr1、cdr2、cdr3。

4、在本發明的上下文中，術語“抗體”在本發明中以最廣義使用，而且明確覆蓋單克隆抗體、多克隆抗體、人源性抗體、嵌合抗體和自至少兩種完整抗體形成的多特異性抗體（例如雙價抗體），只要它們展現期望的生物學活性。在本發明中，經修飾得到的抗體序列也屬于本發明的保護范疇。術語“修飾”是指對氨基酸序列任何形式的修飾，例如氨基酸的取代、缺失、插入和/或添加。術語“取代”是指用不同的氨基酸替換一個或多個原本氨基酸序列中的氨基酸。術語“缺失”是指在原本氨基酸序列中減少一個或多個氨基酸。術語“插入”或“添加”是指在氨基酸序列中的改變導致與原本氨基酸序列相比，一個或多個氨基酸的添加。在本發明中，修飾優選發生在可變區以外的區域，例如抗體的恒定區或框架區，且經過修飾的抗體依然保留本發明抗體或其抗原結合片段期望的功能特性，或具有改進的與抗原結合的特性。

5、進一步，所述抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體或鼠源抗體。

6、進一步，本發明所述抗體為單克隆抗體。

7、所述重鏈可變區中的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如sfpma、tiissggssyyrdsvkg和ggsfay所示；所述輕鏈可變區中的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如kasqninnyln、ntnnlqm和fqhnnwplt所示。

8、在本發明中，術語“抗原結合片段”包含完整抗體的一部分，通常是指抗體中發揮特異性結合抗原功能的一個或多個片段。抗體的抗原結合功能可通過抗體的全長片段來實現。所述“抗原結合片段”可以是fab、fv、scfv等形式的抗體片段，它們保留了與kir3dl2蛋白結合的能力，同時具有更小的分子尺寸，便于穿透組織或用于特定的治療應用。

9、所述抗體的“重鏈可變區和輕鏈可變區”分別包含氨基酸序列，這些序列能夠與kir3dl2蛋白的特定表位特異性結合。

10、本發明的第二方面提供了一種核酸分子，所述核酸分子能夠編碼前面所述的抗體或其抗原結合片段。

11、在本發明中，術語“核酸分子”是指具有任何長度并由核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸構成的任何聚合物形式。通常，核酸分子是編碼序列，編碼序列可包括但不限于原核序列、來自真核mrna的cdna、來自真核（例如哺乳動物）dna的基因組dna序列以及甚至重組dna序列。轉錄終止序列將通常位于編碼序列的3’處。

12、進一步，編碼上述抗體的核酸分子包括重鏈可變區（vh）編碼序列、輕鏈可變區（vl）編碼序列、重鏈恒定區（ch）編碼序列、輕鏈恒定區（cl）編碼序列。

13、本發明提供了一種或多種用于制備單克隆抗體的來源物種，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、倉鼠、人類、非人靈長類、山羊、轉基因動物、體外培養的細胞系等。

14、進一步，本發明制備單克隆抗體的來源為大鼠。

15、本發明的第三方面提供了一種載體，所述載體包括前面所述的核酸分子。

16、在本發明中，提供了一種包含本發明所述的核酸分子的載體。術語“載體”是指一種人工構建體，其能夠在宿主細胞中遞送并優選表達一種或多種目的基因或序列。本發明的載體可以是質粒載體、病毒載體等。在一些實施方案中載體指代直鏈或圓形核酸分子，其包含可操作地連接于提供在重組宿主細胞中的自主復制的其它鏈段的本發明的核酸，或根據核酸分子的表達盒。“可操作地連接”意味著所關注的核酸序列以允許核苷酸序列表達的方式連接到調節序列（例如在體外轉錄/翻譯系統中或在將載體引入宿主細胞中）。

17、進一步，所述載體包括質粒、噬菌體、哺乳動物細胞表達載體、桿狀病毒、酵母病毒、植物表達載體等。

18、本發明所述載體為用于在哺乳動物細胞中表達蛋白的pcdna系列載體。

19、進一步，本發明所述載體為pcdna3.1載體。

20、本發明的第四方面提供了一種重組細胞，所述重組細胞包括前面所述的單克隆抗體、前面所述的核酸分子，和/或前面所述的載體。

21、進一步，所述細胞包括b淋巴細胞、骨髓瘤細胞、淋巴瘤細胞、雜交瘤細胞、cho細胞、hek293細胞、昆蟲細胞系等。

22、本發明的第五方面提供了一種抗體衍生物，所述抗體衍生物包括本發明第一方面所述的單克隆抗體上直接或間接的偶聯可檢測標記物。

23、所述可檢測標記物包括酶標記物、熒光標記物、放射性標記物、化學發光標記物、磁性標記物等。

24、進一步，所述可檢測標記物為酶標記物。

25、進一步，所述酶標記物為辣根過氧化酶。

26、本發明的第六方面提供了一種檢測kir3dl2蛋白的產品，所述產品包括前面所述的抗體或其抗原結合片段，前面所述的核酸分子，前面所述的載體，和/或前面所述的重組細胞。

27、進一步，所述產品通過elisa和facs方法檢測。

28、本發明的第七方面提供了一種制備前面所述的抗體或其抗原結合片段的方法，所述方法包括培養本發明第四方面所述的重組細胞。

29、進一步，具體步驟包括：1）使用前面所述的載體轉化到宿主細胞中；2）在適合條件下培養步驟1）中的宿主細胞；3）從宿主細胞的培養液中分離純化獲得前面所述的單克隆抗體。

30、本發明的第八方面提供了一種檢測kir3dl2蛋白或其功能結構域的方法，所述方法包括使用前面所述的抗體或其抗原片段與所述kir3dl2蛋白或其功能結構域共同孵育。

31、優選地，所述kir3dl2蛋白的功能結構域是kir3dl2蛋白第22-337位氨基酸所在的胞外結構域。

32、優選地，所述kir3dl2蛋白是鼠源的。

33、進一步，所述大鼠抗小鼠kir3dl2抗體為12c5e6。

34、本發明的第九方面提供了前面所述單克隆抗體或其抗原結合片段在制備產品中的應用，所述應用為在制備檢測kir3dl2蛋白的產品中的應用。

35、優選地，所述kir3dl2蛋白為游離蛋白或在細胞膜上表達的蛋白。

36、優選地，所述產品是通過elisa和facs方法來檢測的。

37、優選地，所述kir3dl2蛋白的功能結構域是kir3dl2蛋白第22-337位氨基酸所在的胞外結構域。

38、進一步，所述抗體可梯度依賴的結合mkir3dl2-his重組蛋白。

39、進一步，所述抗體可很好的結合過表達mkir3dl2蛋白的細胞。

40、本發明中使用的術語“cdr序列”指的是抗體分子的互補決定區中的氨基酸序列。這些序列是抗體可變區的一部分，它們在抗體與抗原的結合中起著決定性作用。cdr序列是抗體能夠識別并結合特定抗原的關鍵區域。在抗體分子中，cdr序列分為三個區域，分別是：cdr1?、cdr2、cdr3。“cdr”這個術語可以指代根據本領域內公認的任何方法所確定的cdr。

41、本發明的優點和有益效果：本發明提供了一種12c5e6抗體，所述12c5e6抗體與過表達mkir3dl2蛋白的細胞具有良好的結合活性，具有廣闊的應用前景。