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一種基于鏈霉親和素磁珠篩選靶向凝血酶非天然核酸適配體的方法和應用

文檔序號:41755475發布日期:2025-04-29 18:23閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種基于鏈霉親和素磁珠篩選靶向凝血酶的非天然核酸適配體的方法,其特征在于,包括:

2.根據權利要求1所述的基于鏈霉親和素磁珠篩選靶向凝血酶的非天然核酸適配體的方法,其特征在于,所述合成初始dna分子隨機文庫和引物,合成初始dna分子隨機文庫的dna模板序列如seq?id?no.1所示,所述引物包括上游引物和下游引物,序列如seq?id?no.2~seq?id?no.3所示。

3.根據權利要求1所述的基于鏈霉親和素磁珠篩選靶向凝血酶的非天然核酸適配體的方法,其特征在于,所述引物延伸反應條件為:反應緩沖液為therminator酶反應緩沖液,反應溫度為36~38?°c,反應時間為1~2?h。

4.根據權利要求1所述的基于鏈霉親和素磁珠篩選靶向凝血酶的非天然核酸適配體的方法,其特征在于,所述四種dt、dc、dg、a*的核苷三磷酸單體的比例為1:1:1:3~20。

5.根據權利要求1所述的基于鏈霉親和素磁珠篩選靶向凝血酶的非天然核酸適配體的方法,其特征在于,s3中,所述與未結合凝血酶的羧基磁珠孵育條件為:室溫孵育1~2?h。

6.根據權利要求1所述的基于鏈霉親和素磁珠篩選靶向凝血酶的非天然核酸適配體的方法,其特征在于,s4中,所述偶聯有凝血酶的鏈霉親和素磁珠采用如下步驟獲得:使用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺和n-羥基琥珀酰亞胺活化磁珠;將活化后的磁珠與凝血酶溶液孵育,偶聯凝血酶;使用乙醇胺封閉未反應的活性位點。

7.根據權利要求1所述的基于鏈霉親和素磁珠篩選靶向凝血酶的非天然核酸適配體的方法,其特征在于,s4中,所述pcr擴增反應條件為:95?°c預變性5分鐘;95?°c變性10秒,55°c退火10秒,72?°c延伸30秒,70?°c延伸5分鐘,25~35個循環。

8.根據權利要求1~7任意一項所述的基于鏈霉親和素磁珠篩選靶向凝血酶的非天然核酸適配體的方法,其特征在于,還包括測試非天然核酸分子與靶蛋白的親和力步驟,對非天然核酸適配體二級結構預測并通過實驗驗證其親和力步驟。

9.權利要求1~8任意一項所述的方法獲得的靶向凝血酶的非天然核酸適配體。

10.權利要求1~8任意一項所述的方法在篩選靶向蛋白的非天然核酸適配體中的應用,其特征在于,所述靶向蛋白為sars-cov-2核衣殼蛋白、腫瘤壞死因子相關的ox40蛋白、lag-3免疫檢查點蛋白中的任意一種。


技術總結
本發明公開了一種基于鏈霉親和素磁珠篩選靶向凝血酶的非天然核酸適配體的方法和應用,屬于生物技術領域。該方法通過引物延伸技術,高效構建初始篩選文庫,簡化了化學修飾SELEX技術流程;引入鏈霉親和素磁珠分離技術,不僅提高了篩選的特異性和效率,還顯著縮短了篩選周期,降低了成本;通過選擇非天然核酸修飾位點,采用反向與正向篩選相結合的策略,確保了適配體的高特異性和親和力,克服了現有篩選方法的局限;篩選出的非天然核酸適配體展現出高親和力和出色的穩定性,通過優化核苷三磷酸單體比例及延伸反應條件,成功獲得了具有特定結構和功能的適配體,為藥物開發、生物傳感器制備等領域提供了廣闊的應用前景,為核酸適配體的研究與應用開辟了新路徑。

技術研發人員:馬文建,陳雪,梅輝,何雷,熊成鶴,溫駿林
受保護的技術使用者:天津科技大學
技術研發日:
技術公布日:2025/4/28
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