專利名稱：一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法
技術領域：
本發明屬于魚類外周神經的染色領域，特別涉及一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法。
背景技術：
神經系統對魚類的生命活動很重要，它由腦、腦神經、脊髓與脊神經構成，腦和脊髓為中樞神經，腦神經與脊神經為外周神經；魚類外周神經系統分布的研究可以為魚類起源與進化及生理功能的研究提供重要依據。有關魚類外周神經分布的研究方法報道國內尚未見到，國外相關報道主要集中在以下幾個方面蘇木素神經染色法，該方法染色效果不佳；軟骨、硬骨、神經三重染色法，主要過程首先用阿利新藍將軟骨染為藍色，其次用茜素紅將硬骨染為紅色，最后外周神經經蘇丹黑染色后，顯黑色，染色效果良好，但該染色過程較為煩瑣。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法，該方法操作簡單、所需試劑少，大大縮短了染色時間，也無須昂貴的試劑和特殊的儀器。本發明的一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法，包括(1)用IOvol %福爾馬林固定魚體標本48 Mh，將固定好的魚體標本沖洗 12-24h ；(2)將上述魚體放入容器中，加入0. 5wt% KOH溶液直至將魚體淹沒，放置l_2h ；(3)向上述溶液中滴加濃度為3 4Vol% H2O2溶液，將容器置于白熾燈下過夜，以加速褪去魚表皮色素；(4)對魚體進行酒精脫水處理，依次放入3(^01%、5(^01%、7(^01%酒精中，各 30 40min ；(5)將魚體浸入30wt% _50wt%蘇丹黑溶液中進行神經染色，染色時間為8_12h ；(6)對魚體進行酒精水化處理，依次放入7(^01%、6(^01%、5(^01%酒精，各 l_2min ；(7)將魚體置于0. 5wt% KOH溶液中過夜，即完成對外周神經的染色。所述步驟(1)中的10vol%福爾馬林由37vol% _40vol%甲醛溶液稀釋而得。所述步驟(1)中的魚體標本為魚類仔稚幼魚標本。所述步驟O)中的容器為塑料或玻璃方形盒。所述步驟(3)中每100ml KOH滴加4-6滴H2O2。所述步驟(5)中的神經染色在搖床中進行，染色效果更佳。所述步驟(5)中的30wt% -50wt%蘇丹黑溶液配制工藝為蘇丹黑粉末溶解于 70vol%酒精中，至飽和狀態；用70vol%酒精稀釋至30wt% -50wt%。在0. 5wt% KOH溶液中緩慢加入甘油，直至魚體標本樣品沉入底部，放置1 后，輕輕去除頭部表皮，在體視鏡下清晰可見外周神經分布，外周神經經過處理后染為黑色。有益效果(1)本發明操作簡單、所需試劑少，大大縮短了染色時間，也無須昂貴的試劑和特殊的儀器；(2)在本發明的操作中，KOH易溶于水和甘油，而且其化學性質類似NaOH，有強堿性，能破壞細胞組織；H2O2其水溶液俗稱雙氧水，外觀為無色透明液體，是一種強氧化劑； KOH和H2A結合使用能夠使魚體骨骼軟化，消除肌肉組織，褪去表皮色素，使魚體透明，便于觀察魚體外周神經染色情況；根據KOH易溶于甘油的特點，染色后魚體放入KOH和甘油的混合液，不僅使魚體透明便于神經染色觀察，而且能夠保持魚體水分含量，隔絕空氣，便于樣品長期保存；(3)本發明操作簡便，結果穩定，可用于一般魚類仔稚幼魚外周神經分布的研究， 其適用范圍較廣。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。實施例1(1)用IOvol %福爾馬林(由37Vol%甲醛溶液稀釋而得)固定中華鱘仔魚標本 (全長6. 2cm) 48h，將固定好的魚體標本沖洗12h ；(2)將上述魚體放入玻璃方形盒中，加入0. 5wt% KOH溶液直至將魚體淹沒，放置 lh；(3)向上述溶液中滴加濃度為3vol % H2O2溶液(100ml KOH滴加4 6滴H2O2)， 將玻璃方形盒置于白熾燈下過夜，以加速褪去魚表皮色素；(4)對魚體進行酒精脫水處理，依次放入3(^01%、5(^01%、7(^01%酒精中，各 30min ；(5)將魚體浸入30wt%蘇丹黑溶液(蘇丹黑粉末溶解于70Vol%酒精中，至飽和狀態；用70vOl%酒精稀釋)中進行神經染色，染色時間為他；(6)對魚體進行酒精水化處理，依次放入7(^01%、6(^01%、5(^01%酒精，各 Imin ；(7)將魚體置于0. 5wt% KOH溶液中過夜，即完成對外周神經的染色。實施例2(1)用IOvol %福爾馬林(由40vol%甲醛溶液稀釋而得)固定魚體標本MhJf 固定好的魚體標本沖洗24h ；(2)將上述魚體放入塑料中，加入0. 5wt% KOH溶液直至將魚體淹沒，放置濁；(3)向上述溶液中滴加濃度為4vol % H2O2溶液(100ml KOH滴加4 6滴H2O2)， 將塑料置于白熾燈下過夜，以加速褪去魚表皮色素；(4)對魚體進行酒精脫水處理，依次放入3(^01%、5(^01%、7(^01%酒精中，各40min ；(5)將魚體浸入50wt%蘇丹黑溶液(蘇丹黑粉末溶解于70Vol%酒精中，至飽和狀態；用70Vol%酒精稀釋)中在搖床中進行神經染色，染色時間為12h ；(6)對魚體進行酒精水化處理，依次放入7(^01%、6(^01%、5(^01%酒精，各 2min ；(7)將魚體置于0. 5wt% KOH溶液中過夜，即完成對外周神經的染色。
權利要求
1.一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法，包括(1)用IOvol%福爾馬林固定魚體標本48 Mh，將固定好的魚體標本沖洗12-24h ；(2)將上述魚體放入容器中，加入0.5wt% KOH溶液直至將魚體淹沒，放置1- ；(3)向上述溶液中滴加濃度為3 4Vol%H2O2溶液，將容器置于白熾燈下過夜；(4)對魚體進行酒精脫水處理，依次放入30vol%,50vol %、70vol %酒精中，各30 40min ；(5)將魚體浸入30wt%-50wt%蘇丹黑溶液中進行神經染色，染色時間為8-12h ；(6)對魚體進行酒精水化處理，依次放入70VO1%、60VO1%、50to1%酒精，各Hmin；(7)將魚體置于0.5wt% KOH溶液中過夜，即完成對外周神經的染色。
2.根據權利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法，其特征在于所述步驟(1)中的IOvol %福爾馬林由37vol% _40vol%甲醛溶液稀釋而得。
3.根據權利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法，其特征在于所述步驟(1)中的魚體標本為魚類仔稚幼魚標本。
4.根據權利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法，其特征在于所述步驟O)中的容器為塑料或玻璃方形盒。
5.根據權利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法，其特征在于所述步驟(3)中每IOOml KOH滴加4-6滴H2O2。
6.根據權利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法，其特征在于所述步驟(5)中的神經染色在搖床中進行。
7.根據權利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法，其特征在于所述步驟(5)中的30wt% -50wt%蘇丹黑溶液配制工藝為蘇丹黑粉末溶解于70Vol%酒精中， 至飽和狀態；用70vol%酒精稀釋至30wt% -50wt%。
全文摘要
本發明涉及一種魚類仔稚幼魚外周神經的染色方法，包括將魚體標本浸入0.5wt％KOH溶液和3～4vol％H2O2溶液中，進行酒精脫水處理后再浸入30wt％-50wt％蘇丹黑溶液中進行神經染色，進行酒精水化處理后置于0.5wt％KOH即可。本發明操作簡單、所需試劑少，大大縮短了染色時間，也無須昂貴的試劑和特殊的儀器，操作簡便，結果穩定，可用于一般魚類仔稚幼魚外周神經分布的研究，其適用范圍較廣。
文檔編號G01N1/30GK102519774SQ20111036253
公開日2012年6月27日 申請日期2011年11月16日 優先權日2011年11月16日
發明者宋煒, 馬凌波 申請人:中國水產科學研究院東海水產研究所