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可實現牛β?酪蛋白鑒定及絕對定量的試劑盒及測定方法與流程

文檔序號:11109112閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種可實現牛β-酪蛋白鑒定及絕對定量的試劑盒,其特征在于:包括標準物質:

標準物質包括特征肽段及其內標肽段,肽段序列為:

使用方式如下:

(1)、所述標準物質的特征肽段單獨使用或者與其他特征肽段配成兩種混合特征肽段使用;

(2)、所述標準物質的內標肽段單獨使用或者與其他特征肽段配成兩種混合內標肽段使用;

(3)、所述標準物質的特征肽段與其內標肽段配成的混合內標物質,單獨使用或與另外一種混合內標物質同時使用;

(4)、內標肽段與其他內標肽段混合使用。

2.根據權利要求1所述的可實現牛β-酪蛋白鑒定及絕對定量的試劑盒,其特征在于:該試劑盒還包括反應試劑:

反應試劑,由以下成分組成:

3.根據權利要求1所述可實現牛β-酪蛋白鑒定及絕對定量的試劑盒,其特征在于:所述標準物質配成單劑或雙劑。

4.根據權利要求1所述可實現牛β-酪蛋白鑒定及絕對定量的試劑盒,其特征在于:所述胰蛋白酶為序列級胰蛋白酶、胰蛋白酶中的至少一種。

5.根據權利要求2所述可實現牛β-酪蛋白鑒定及絕對定量的試劑盒,其特征在于:所述反應試劑配成單劑。

6.根據權利要求1所述可實現牛β-酪蛋白鑒定及絕對定量的試劑盒,其特征在于:

1)標準物質

①用以實現本發明試劑盒的標準物質是標準特征肽段,是單一標準物質,或配成雙混合標準物質,使用其中的一種或多種;

②用以實現本發明試劑盒的內標肽段是單一內標肽段,或配成多混合內標肽段,使用其中的一種或多種;

③將上述特征肽段與其內標肽段聯合使用,更有利于牛β-酪蛋白的定量檢測,是單一內標物質,或配成多混合內標物質,使用其中的一種或多種;

④標準物質是單劑、或是雙劑,根據上述方法自由組合或選擇其中的一種或多種。

7.利用權利要求1所述的可實現牛β-酪蛋白鑒定及絕對定量的試劑盒所實施的牛β-酪蛋白含量測定方法,其特征在于:該方法步驟如下:

(1)將待測樣品加入碳酸氫銨,渦旋,加入二硫蘇糖醇,溫育振蕩,再加入碘乙酰胺,溫育振蕩,放置至室溫后,再加入胰蛋白酶,溫育振蕩,最后加入甲酸終止反應;

(2)將標準物質和(1)步驟中最終酶解產物分別注入高效液相色譜-串聯四極桿質譜儀中檢測或將混合內標物質和(1)步驟中含內標肽段的最終酶解產物分別注入高效液相色譜-三重四極桿質譜儀中檢測,檢測后通過m/z和tR進行定性,色譜峰峰面積變化測算出牛β-酪蛋白的絕對含量;

溫度控制在25~60℃范圍,溫育時間控制在0.5~12h,振蕩頻率控制在800~2500rmp,渦旋時間控制在2~10min,室溫控制在18-22℃范圍;

胰蛋白酶與被測樣品總蛋白量比例控制在1/1到1/100。

8.根據權利要求7所述牛β-酪蛋白含量測定方法,其特征在于:所述步驟(2)為:將一種或兩種特征肽段和(1)步驟中最終酶解產物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜儀中檢測,或將一種或兩種混合內標物質和(1)步驟中含一種或兩種內標肽段的最終酶解產物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質譜儀中檢測,通過m/z和tR進行定性,色譜峰峰面積變化測算出牛β-酪蛋白的含量。

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