本發明涉及鏈霉素檢測技術領域，具體為一種鏈霉素檢測方法及檢測卡。
背景技術：
鏈霉素是一種氨基葡萄糖型抗生素，分子式C21H39N7O12。1943年美國S.A.瓦克斯曼從鏈霉菌中析離得到，是繼青霉素后第二個生產并用于臨床的抗生素。它的抗結核桿菌的特效作用，開創了結核病治療的新紀元。從此，結核桿菌肆虐人類生命幾千年的歷史得以有了遏制的希望。鏈霉素是一種從灰鏈霉菌的培養液中提取的抗菌素。屬于氨基糖甙堿性化合物，它與結核桿菌菌體核糖核酸蛋白體蛋白質結合，起到了干擾結核桿菌蛋白質合成的作用，從而殺滅或者抑制結核桿菌生長的作用。由于鏈霉素肌肉注射的疼痛反應比較小，適宜臨床使用，只要應用對象選擇得當，劑量又比較合適，大部分病人可以長期注射（一般2個月左右）。所以，應用數十年來它仍是抗結核治療中的主要用藥。
鏈霉素，對結核桿菌有較強的抑制作用，在結核病的治療方面曾起過重要的作用。此外，它對流行性結核桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌和鼠疫桿菌等均敏感。鏈霉素對聽覺神經毒性較大，長期使用引起耳聾，也可引起過敏反應，如皮疹、發燒甚至休克等。
鏈霉素的毒副作用主要表現為對腦神經、聽覺及腎臟的損害,因此,許多國家和機構都明確規定了該類藥物在動物性食品中的最大殘留限量(MRLs)。1973年歐共體規定氨基糖苷類(鏈霉素、新霉素)物質不宜用作飼料添加劑。歐盟2377/90/EEC(703/2007修訂)規定動物性食品肌肉中鏈霉素的最大殘留限量(MRLs)為0.5mg/kg,肝臟中的MRLs為0.5mg/kg,腎臟中的MRLs為1.0mg/kg,奶中的MRLs為0.2mg/kg。CAC規定動物性食品肌肉中鏈霉素的MRLs為0.5mg/kg,肝臟中的MRLs為0.5mg/kg,腎臟中的MRLs為1.0mg/kg。瑞士規定動物性食品肝臟中鏈霉素的MRLs為0.5mg/kg,腎臟中的MRLs為1.0mg/kg。美國從1997年8月20日起,禁止將氨基糖苷類藥物作為非限制性藥物使用,并規定其在動物性食品肌肉中的MRLs為0.5mg/kg,肝臟中的MRLs為0.5mg/kg,腎臟中的MRLs為2.0mg/kg。日本規定蜂蜜中抗生素的含量不得超過0.05mg/kg。我國農業部于2002年發布了《動物性食品中獸藥最高殘留限量》的通知,規定牛奶中鏈霉素的最高殘留限量(MRLs)為0.2mg/kg。
但由于養殖過程中經常存在藥物違法使用或不合理使用現象,造成食品中氨基糖昔類抗生素的過量殘留,已成為國內外普遍關注的食品安全問題之一。如美國、加拿大等國官方機構調查發現,鏈霉素是僅次于青霉素而在動物性食品中殘留超標的藥物。
鏈霉素的檢測方法主要包括微生物法、免疫分析法、色譜法和其他方法，目前,多數研究采用反相色譜或離子對色譜系統檢測鏈霉素殘留。鏈霉素在低pH值條件下為極性較強的堿性化合物,因此一般用強離子交換柱進對其行分離,以進一步提高檢測的精確度、穩定性和重復性。由于鏈霉素無特征性紫外吸收,可利用其結構中的活潑基團(如氨基、碳基)與衍生化試劑反應,形成在紫外區有吸收或有熒光的物質,以便于紫外檢測或熒光檢測，然而由于空氣的正常PH約為7.5，呈堿性，在堿性環境下容易對鏈霉素造成破壞，在提取制備的過程中往往造成檢測的不準確性；且目前在檢測鏈霉素時常常使用膠體金免疫層析法進行檢測，然而膠體金免疫層析法往往與大環內酯類、慶大霉素、新霉素、β-內酰胺類、四環素類、氯霉素類等藥物反應，造成了檢測的不準確性，因此亟需一種準確的鏈霉素檢測方法。
技術實現要素：
（一）解決的技術問題
針對現有技術的不足，本發明提供了一種鏈霉素檢測方法及檢測卡，解決了鏈霉素檢測不準確的問題。
（二）技術方案
為實現所述目的，本發明提供如下技術方案：
一種鏈霉素檢測方法，包括以下步驟：
S1：取鏈霉菌菌絲，置于離心管中，漩渦、震蕩、超聲、離心后，取5ml所述離心后的上清液于15ml的強離子交換柱中，對其進行分離。
S2：將所述柱后的上清液接種到斜面培養基上，于27℃下培養7天，待斜面長滿孢子后,制成懸浮液接入裝有培養基的搖瓶中，于27℃下培養45～48小時待菌絲生長旺盛后，取若干個搖瓶，合并其中的培養液將其接種于種子罐內已滅菌的培養基中，通入無菌空氣攪拌，在罐溫27℃下培養62～63小時，然后接入發酵罐內已滅菌的培養基中，通入無菌空氣，攪拌培養，在罐溫為27℃下，發酵約7～8天。
S3：發酵液經酸化、過濾，除去菌絲及固體物，然后中和，通過弱酸型陽離子交換樹脂進行離子交換，再用稀硫酸洗脫,收集高濃度洗脫液─鏈霉素硫酸鹽溶液，洗脫液再經磺酸型離子交換樹脂脫鹽，此時溶液呈酸性，用陰離子樹脂中和后，再經活性炭脫色得到精制液，精制液經薄膜濃縮成濃縮液。
S4：將化學熒光探針溶入有機溶劑中制取熒光試劑，取4g堿溶于10g蒸餾水中，制取溶液A，同時，將所述鏈霉素濃縮液溶于蒸餾水中，制取標準溶液，將熒光試劑和溶液A分別與不同濃度的標準溶液混合、震蕩，靜置5-10min，待混合液分層后移取水層，測量熒光強度。
優選的，所述熒光試劑為鄰苯二甲醛溶劑，且熒光試劑的濃度為50ppm，所述步驟S4中的有機溶劑為與水不溶，且密度比水小的乙醚溶劑，所述堿為無機堿，優選氫氧化鈉，且溶液A為濃度1N的堿溶液。
優選的，所述熒光試劑為鄰苯二甲醛溶劑，且熒光試劑的濃度為50ppm，所述步驟S4中的有機溶劑為與水不溶，且密度比水小的乙醚溶劑，所述堿為無機堿，優選氫氧化鈉，且溶液A為濃度1N的堿溶液標準溶液為3種不同濃度的鏈霉素水溶液，且標準溶液的濃度范圍為0mmp-10mmp，優選標準溶液的濃度為0ppm、5mmp和10mmp。
一種鏈霉素檢測卡，包括上殼體和下殼體，所述上殼體插接在下殼體頂部開設的凹槽內，所述下殼體的表面從上到下開設有定位槽，所述定位槽內粘附有檢測試紙，所述檢測試紙的表面從下到上依次設置有對照線和檢測線，所述定位槽的一側開設有加樣孔，所述加樣孔與定位槽之間開設有導流槽。
優選的，所述上殼體的頂端開設有夾持槽。
優選的，所述加樣孔到定位槽一側面的距離為1厘米，導流槽的長度為1厘米，且導流槽的中線與對照線和檢測線的中線重合。
優選的，所述定位槽的寬度為0.5厘米，且對照線和檢測線之間的距離為0.5厘米，所述對照線和檢測線的寬度均為0.3厘米。
（三）有益效果
本發明提供了一種鏈霉素檢測方法及檢測卡。具備以下有益效果：
（1）、該鏈霉素檢測方法及檢測卡，將鏈霉菌菌絲通過強離子交換器進行分離，而后進行菌種發酵和提取精制，制備純凈的鏈霉素濃縮液，防止鏈霉素內的其他元素對檢測造成影響，導致檢測的不準確，同時通過利用應該試劑和溶液A對標準溶液進行檢測，解決了利用膠體金免疫檢測法檢測時容易造成檢測不準確的效果，使檢測更加準確方便。
（2）、該鏈霉素檢測方法及檢測卡，通過設置加樣孔和對加樣孔位置的限定，縮短了加樣孔與檢測試紙的距離，減少了中間過程對檢測結果造成影響的概率，同時通過對導流槽的限定，使待測液直接作用于對照線和檢測線，檢測更加快捷，準確。
附圖說明
圖1為本發明鏈霉素檢測卡的結構正視圖。
圖中：1上殼體、2下殼體、3凹槽、4定位槽、5檢測試紙、6加樣孔、7導流槽、8夾持槽。
具體實施方式
下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
本發明提供的技術方案：
一種鏈霉素檢測方法，包括以下步驟：
S1：取鏈霉菌菌絲，置于離心管中，4000r/min轉速漩渦、進行震蕩、利用超聲分離、離心后，取5ml所述離心后的上清液于15ml的強離子交換柱中，對其進行分離。
S2：將所述柱后的上清液接種到斜面培養基上，于27℃下培養7天，待斜面長滿孢子后,制成懸浮液接入裝有培養基的搖瓶中，于27℃下培養45～48小時待菌絲生長旺盛后，取若5-10個搖瓶，合并其中的培養液將其接種于種子罐內已滅菌的培養基中，通入無菌空氣攪拌，在罐溫27℃下培養62～63小時，然后接入發酵罐內已滅菌的培養基中，通入無菌空氣，攪拌培養，在罐溫為27℃下，發酵約7～8天。
S3：發酵液經酸化、過濾，除去菌絲及固體物，然后中和，通過弱酸型陽離子交換樹脂進行離子交換，再用稀硫酸洗脫,收集高濃度洗脫液─鏈霉素硫酸鹽溶液，洗脫液再經磺酸型離子交換樹脂脫鹽，此時溶液呈酸性，將酸性溶液利用氫氧化鈉溶液進行堿性處理，進一步出去蛋白質，保持溶液的PH值為7，用陰離子樹脂中和后，再經活性炭脫色得到精制液，精制液經薄膜濃縮成濃縮液。
S4：將化學熒光探針溶入有機溶劑中制取熒光試劑，取4g堿溶于10g蒸餾水中，制取溶液A，同時，將所述鏈霉素濃縮液溶于蒸餾水中，制取標準溶液，將熒光試劑和溶液A分別與0mmp-10mmp濃度的標準溶液混合、震蕩，靜置5-10min，待混合液分層后移取水層，測量熒光強度。
分別選取熒光試劑和溶液A分別與0mmp、5mmp和10mmp濃度的標準溶液混合，分別對其熒光強度進行測量，測量發現在0mmp濃度的標準溶液時無熒光強度，在5mmp濃度的標準溶液時熒光強度為20，在10mmp濃度的標準溶液時熒光強度為12，由此，標準溶液濃度在5mmp時，檢測性能最好，將鏈霉菌菌絲通過強離子交換器進行分離，而后進行菌種發酵和提取精制，制備純凈的鏈霉素濃縮液，防止鏈霉素內的其他元素對檢測造成影響，導致檢測的不準確，同時通過利用應該試劑和溶液A對標準溶液進行檢測，解決了利用膠體金免疫檢測法檢測時容易造成檢測不準確的效果，使檢測更加準確方便。
本發明提供一種鏈霉素檢測卡，包括上殼體1和下殼體2，上殼體1的頂端開設有夾持槽8，上殼體1插接在下殼體2頂部開設的凹槽3內，下殼體2的表面從上到下開設有定位槽4，定位槽4的寬度為0.5厘米，且對照線和檢測線之間的距離為0.5厘米，對照線和檢測線的寬度均為0.3厘米，定位槽4內粘附有檢測試紙5，檢測試紙5的表面從下到上依次設置有對照線和檢測線，定位槽4的一側開設有加樣孔6，加樣孔6到定位槽4一側面的距離為1厘米，導流槽7的長度為1厘米，且導流槽7的中線與對照線和檢測線的中線重合，通過設置加樣孔6和對加樣孔6位置的限定，縮短了加樣孔6與檢測試紙5的距離，減少了中間過程對檢測結果造成影響的概率，加樣孔6與定位槽4之間開設有導流槽7，同時通過對導流槽7的限定，使待測液直接作用于對照線和檢測線，檢測更加快捷，準確，將3-5ml的5mmp濃度的標準溶液滴入加樣孔6內，標準溶液由導流槽7流入定位槽4，浸濕檢測試紙5，檢測試紙5浸泡有熒光試劑和氫氧化鈉溶液，對照線顯示紅色色帶，檢測線也顯示紅色色帶，無論顏色深淺均判為陰性，對照線顯示紅色色帶，檢測線不顯示紅色色帶，判為陽性，對照線不顯示紅色色帶，無論檢測線是否顯示紅色色帶，該試紙均判為無效。
盡管已經示出和描述了本發明的實施例，對于本領域的普通技術人員而言，可以理解在不脫離本發明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發明的范圍由所附權利要求及其等同物限定。